目的:评估缺氧缺血(HI)自我复苏的新生SD大鼠模型外周血微小RNA(miRNA)指标。方法:3只孕鼠所产幼鼠按窝别分为3组，A组为空白对照组，B组为HI组，C组备用。采用高通量深度测序方法比较对照组和HI组新生4日龄SD大鼠外周血中miRNA的表达谱。应用生物信息学分析研究这些差异表达的miRNA。采用基因本体论(GO)和京都基因与基因组学百科全书(KEGG)分析方法预测相关的细胞信号通路和功能。通过miRBD预测miRNA及与缺氧缺血性脑病(HIBD)相关的靶基因。应用HE染色观察脑组织病理变化。结果:经外周血深度测序后可得到成熟miRNA序列为1 049种。A组miRNA种类为525种；HI组miRNA种类为524种；其中A组有27种miRNA与HI组存在差异，且2组间miRNA种类呈高度相关。HI新生大鼠外周血中有38个miRNA表达异常，并存在显著差异表达(2 -ΔΔCt值>2.5， P< 0.05),其中21个miRNA显著过表达，17个显著低表达。KEGG通路富集分析和GO分析显示这些差异的miRNA与谷氨酸能突触通路、髓鞘脂类代谢、神经活性配体-受体相互作用和血管上皮生长因子(VEGF)信号通路与缺氧/缺血诱导的脑损伤有关，并且过度活化。2组间幼鼠脑组织未见皮质及胼胝体下白质病变、脑室扩大、灰质神经元排列紊乱和明显凋亡。 结论:HI自然复苏模型大鼠外周血中miRNA差异表达提示，miRNA对缺氧缺血有积极的应答。存在高度显著差异的miR-200家族、miR-471家族、miR-429、miR-216和miR-871，与神经系统损伤分子生物学机制有关，有望成为HIBD或HI新的生物学诊断指标，对HI新的治疗靶点的研究探索是有益的。

目的:明确低温缺血再灌注心律失常大鼠心肌miRNA表达的变化及其靶基因。方法:清洁级健康雄性SD大鼠，2～3月龄，体重300～400 g，麻醉后开胸取心脏，建立离体心脏灌注模型。成功建立离体心脏灌注模型6个，采用随机数字表法分为2组( n＝3)：对照组(C组)和心脏缺血再灌注组(IR组)。采用全心停灌60 min再灌注30 min的方法制备低温心脏缺血再灌注损伤模型。记录再灌注期间心律失常评分。通过高通量测序筛选出2组心肌表达有显著性差异的miRNA(DEmiRNAs)。利用RNAhybrid和miRanda数据库对DEmiRNAs调节的mRNA行靶基因预测，通过Gene Ontology和KEGG数据库对靶基因进行富集分析，选取与心律失常密切相关且表达水平较高的miRNA进行RT-PCR检测。 结果:高通量测序结果：与C组比较，IR组有7个miRNA表达有显著性差异(novel-miR-17、novel-miR-19、novel-miR-30、novel-miR-43、rno-miR-122-5p、novel-miR-16和rno-miR-429)。与心律失常关系密切且表达水平较高的miRNA有4个：与C组比较，IR组心肌novel-miR-17、novel-miR-30和rno-miR-122-5p表达上调，rno-miR-429表达下调( P<0.05)。通过miRNA-mRNA相关性分析结果：GJA1基因是novel-miR-17的靶点。 结论:心肌novel-miR-17可能作用于GJA1基因参与大鼠低温缺血再灌注心律失常的发生。

目前恶性肿瘤仍然严重威胁着人类的健康和生命，而微小核糖核酸(microRNAs，miRNAs)的表达水平与多种肿瘤的发生和发展密切相关，可在多种肿瘤的发生中起到促进或抑制的作用。microRNA-429(miR-429)作为miR-200家族的成员之一，它的异常表达可以导致多种肿瘤的发生，促进或抑制肿瘤细胞侵袭、迁移、上皮-间质转化和耐药性。根据肿瘤细胞和组织的不同类型，miR-429可能特异性地作为某些肿瘤的终止子或启动子发挥作用。miR-429的作用机制复杂，可在不同的肿瘤细胞和组织中产生不同的效应，可以抑制肿瘤的发生，也可以促进肿瘤的发生，在一些肿瘤中还显示出矛盾的作用。本文综述了miR-429与恶性肿瘤的关系以及潜在的作用机制，并分析了miR-429作为某些肿瘤的诊断、治疗和预后的生物标志物的意义。

目的:探讨微小RNA-429(micro RNA-429，miR-429)对神经母细胞瘤(neuroblastoma，NB)细胞增殖、侵袭和转移的影响，及其在NB细胞中对IKKβ是否有调控作用及其调控机制。方法:选择2016年6月至2018年6月青岛大学附属医院小儿外科术中切除的NB原发肿瘤组织和瘤旁正常组织。采用RT-PCR检测NB组织和正常对照组织中miR-429的表达水平；RT-PCR检测miR-429在NB细胞SH-SY5Y、SK-N-SH和对照细胞HUVEC中的表达情况；在SH-SY5Y和SK-N-SH中抑制miR-429的表达，采用细胞集落形成实验、细胞划痕实验、细胞侵袭实验和流式细胞术检测NB细胞增殖、侵袭和转移能力的变化；在SH-SY5Y和SK-N-SH中过度表达miR-429，采用细胞集落形成实验、细胞划痕实验、细胞侵袭实验和流式细胞术检测NB细胞增殖、侵袭和转移能力的变化；基因软件预测miR-429的靶基因并用荧光素酶报告实验进行验证；过度表达miR-429，采用RT-PCR和Western blot检测其对NF-κB通路下游基因cyclinD1、IL-8、Bcl2的影响，并用MTT检测过表达IKKβ后，miR-429对NB细胞抗肿瘤作用影响的变化。结果:RT-PCR检测显示miR-429在NB组织中的表达为0.46±0.08，明显低于对照组织1.11±0.12，且差异有统计学意义( P<0.05)；miR-429在SH-SY5Y和SK-N-SH中的表达分别为0.37±0.06和0.45±0.08，明显低于HUVEC中的1.07±0.11，且差异有统计学意义( P<0.01)。抑制miR-429表达后，RT-PCR显示miR-429 mRNA在SH-SY5Y和SK-N-SH分别为0.42±0.07和0.27±0.03，与对照组相比抑制作用明显( P均<0.01)。抑制miR-429表达后，细胞集落形成实验显示，SH-SY5Y和SK-N-SH细胞集落形成分别为(255±6)个和(275±9)个，明显高于对照组(67±2)个和(82±3)个，且差异有统计学意义( P均<0.01)；细胞划痕实验显示，SH-SY5Y和SK-N-SH细胞的愈合率分别为55%和61%，较对照组25%和36%高，且差异有统计学意义( P均<0.05)；细胞侵袭实验显示，SH-SY5Y和SK-N-SH细胞侵袭数量分别为(74±2)个和(96±4)个，与对照组(34±1)个和(45±1)个比较，细胞侵袭能力明显增强( P均<0.05)；流式细胞术显示，各组NB细胞的凋亡显著降低( P均<0.05)。过度表达miR-429后，RT-PCR显示miR-429 mRNA在SH-SY5Y和SK-N-SH的相对表达量为9.2±0.5和8.8±0.4，与对照组相比，过表达作用明显( P均<0.01)。过度表达miR-429后，SH-SY5Y和SK-N-SH细胞集落形成分别为(20±1)个和(29±2)个，较对照组(76±2)个和(98±3)个低，且差异有统计学意义( P均<0.01)；划痕实验中SH-SY5Y和SK-N-SH细胞愈合率为5%和7%，均较对照组22%和30%低，且差异有统计学意义( P均<0.05)；侵袭实验中，SH-SY5Y和SK-N-SH细胞侵袭数量分别为(15±1)个和(11±1)个，均较对照组(38±1)个和(43±2)个低，且差异有统计学意义( P均<0.05)；流式细胞术中，各组NB细胞的凋亡增加( P均<0.05)。过度表达miR-429后，RT-PCR检测cyclinD1、IL-8、Bcl2在SH-SY5Y(0.73±0.04、0.71±0.03、0.78±0.04)和SK-N-SH(0.65±0.03、0.73±0.03、0.58±0.02)的表达均较对照组降低，Western blot显示cyclinD1、IL-8、Bcl2蛋白表达下降，MTT显示IKKβ的过度表达，与对照组相比细胞增殖增加上述指标组间比较，差异均有统计学意义( P<0.01或<0.05)。 结论:miR-429可能通过靶向调控IKKβ进而调节NF-κB炎症信号通路抑制NB细胞体外增殖、侵袭和转移，miR-429可以尝试作为阻断NB进展的潜在靶点。

目的 探究高糖干预对胰腺癌细胞免疫逃逸的影响及作用分子机制.方法 采用不同浓度葡萄糖(0、7.5、15、30 mmol/L)处理PANC-1细胞24 h构建高糖干预的PANC-1细胞.将miR-429 mimics及其阴性对照(mimics NC)转染至PANC-1细胞,分为对照组、HG组、HG+mimics NC组、HG+mimics 组、HG+mimics+oe-NC 组和 HG+mimics+oe-ZEB1组.流式细胞术检测细胞表面分子细胞程序性死亡-配体1(PD-L1)表达水平;qRT-PCR检测细胞miR-429和锌指E-盒结合同源盒蛋白1(ZEB1)mRNA表达水平;Western blot检测细胞ZEB1蛋白表达水平.将以上各组PANC-1细胞与CD8+T细胞建立共培养体系,CCK-8检测细胞增殖活性;流式细胞术检测细胞凋亡水平;乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测CD8+T细胞对PANC-1细胞的杀伤作用;采用双荧光素酶报告系统验证miR-429和ZEB1的靶向调控关系.结果 HG可促进PANC-1细胞表面分子PD-L1及ZEB1表达(P＜0.05),抑制miR-429表达,且呈浓度依赖性.miR-429过表达可显著抑制HG诱导的PANC-1细胞表面分子PD-L1表达,而过表达ZEB1可逆转miR-429过表达对HG诱导PANC-1细胞表面分子PD-L1表达的抑制作用.建立与CD8+T细胞共培养体系后,与对照组比较,HG组PANC-1细胞增殖活性明显增加,细胞凋亡率和杀伤活性明显降低(P＜0.05);与 HG+mimics NC 组比较,HG+mimics 组 PANC-1细胞增殖活性明显降低,细胞凋亡水平和杀伤活性明显升高(P＜0.05).与 HG+mimics+oe-NC 组比较,HG+mimics+oe-ZEB1组PANC-1细胞增殖活性明显增加,细胞凋亡率和杀伤活性明显降低(P＜0.05).双荧光素酶报告基因实验证实,miR-429靶向负调控ZEB1.结论 高糖通过下调miR-429表达水平,靶向负调控ZEB1 mRNA的表达,提高PANC-1细胞表面分子PD-L1表达水平,进而促进PANC-1细胞免疫逃逸.

目的 探究长链非编码RNA(lncRNA)核富集转录体1(NEAT1)NEAT1对喉鳞状细胞癌(LSCC)细胞迁移和侵袭的影响,并进一步分析miR-429/锌指E-盒结合同源异形盒1(ZEB1)轴在其中发挥的作用.方法 慢病毒转染建立稳定敲减lncRNA NEAT1的LSCC细胞,通过RT-qPCR检测细胞lncRNA NEAT1表达以验证转染效率,通过Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,通过Western blot检测细胞上皮-间充质转化(EMT)相关蛋白N-cadherin、Vimentin、Slug和Snail表达.通过生物信息学分析miR-429与lncRNA NEAT1和ZEB1 mRNA间的潜在结合位点,并通过双荧光素酶报告基因实验验证miR-429与lncRNA NEAT1以及miR-429与ZEB1 mRNA结合.将miR-429抑制剂转染敲减lncRNA NEAT1的LSCC细胞,通过Western blot检测细胞ZEB1表达.进一步检查敲减ZEB1对抑制miR-429的敲减lncRNA NEAT1的LSCC细胞迁移、侵袭和EMT的影响.结果 敲减lncRNA NEAT1降低LSCC细胞lncRNA NEAT1表达,抑制细胞迁移和侵袭并下调细胞N-cadherin、Vimentin、Slug和Snail表达.miR-429 与 lncRNA NEAT1 和 ZEB1 mRNA 间存在潜在结合位点,且 miR-429 与 lncRNA NEAT1 以及 miR-429 与ZEB1 mRNA结合.抑制miR-429逆转了敲减lncRNA NEAT1对LSCC细胞ZEB1表达的抑制作用.此外,敲减ZEB1逆转了抑制miR-429对敲减lncRNA NEAT1的LSCC细胞迁移和侵袭的促进作用及EMT相关蛋白N-cadher-in、Vimentin、Slug和Snail表达的上调作用.结论 lncRNA NEAT1促进LSCC细胞迁移和侵袭,其机制可能与海绵化miR-429上调ZEB1表达促进LSCC细胞EMT有关.

目的 研究子宫内膜异位症(EMs)患者血清微小核糖核酸-429(miR-429)与缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)和EMs分期的相关性,并探讨其对EMs预测价值.方法 选取2020年2月至2023年1月深圳市龙华区人民医院妇科EMs确诊患者135例为EMs组,年龄21～46岁,平均(32.67±9.03)岁,其中Ⅰ期23例、Ⅱ期35例、Ⅲ期49例及Ⅳ期28例.同期非EMs健康育龄妇女80例为对照组,年龄20～47岁,平均(30.96±8.74)岁.分别检测miR-429、HIF-1 α及VEGF水平,并对结果进行统计分析.结果 EMs 组 miR-429、HIF-1α 及 VEGF 水平[2.70±0.80,(20.90±6.58)pg/mL 及(234.10± 80.37)pg/mL]明显高于对照组[0.98±0.11,(6.06±3.35)pg/mL 及(117.91±22.26)pg/mL],差异有统计学意义(t=19.118、18.768、12.635,均 P＜0.05);miR-429、HIF-1α 及 VEGF 水平随 EMs 临床分期的加重而升高,不同临床分期之间差异有统计学意义(F=66.860、25.558、24.362,均P＜0.05),但Ⅰ期与Ⅱ期之间差异无统计学意义(t=1.340、1.294、0.889,均 P＞0.05).经 Pearman/Spearman 相关性分析,miR-429 与HIF-1α、VEGF水平及临床分期呈明显正相关(r=0.525 0、0.483 2、0.751 0,均P＜0.05);经ROC曲线分析,血清miR-429预测EMs的曲线下面积(AUC)为0.915(95％CI:0.877～0.953),特异度为72.98％,明显高于HIF-1α和VEGF指标(Z=2.405、2.756,均P＜0.05),但明显低于三者联合检测预测价值(AUC为0.959,特异度为79.6％),而敏感度基本一致.结论 EMs患者miR-429水平明显升高,且与HIF-1α、VEGF水平及EMs分期呈明显正相关,其可能通过激活HIF-1α/VEGF通路在EMs发病中发挥作用的,且三者联合检测对EMs诊断有更高的预测价值.

目的 通过基因芯片检测新生大鼠缺氧缺血性脑病(HIE)模型中差异性表达miRNA,构建HIE中miRNA及其靶基因调控网络.方法 将7d龄新生SD大鼠12 只随机分为HIE组及假手术对照组,每组6只.采用Rice法建立新生大鼠HIE模型,造模24h取新生大鼠海马组织,基因芯片检测HIE组和假手术对照组海马组织中差异性表达的miRNA,采用生物信息软件分析相关miRNA调控的靶基因及信号通路.结果 筛选出差异性表达的miRNA共22 个,其中表达上调9 个(mm u-miR-215-5 p,mmu-miR-1249-3p,mmu-miR-3072-5p,mmu-miR-324-3p,mmu-miR-690,mmu-miR-874-5p,11_10767,11_10888,13_12928_star)、表达下调共 13 个(mmu-miR-141-3p,mmu-miR-182-5p.mmu-miR-183-5p,mmu-miR-190a-3p,mmu-miR-200a-3p,mmu-miR-200b-3p,mm u-miR-200c-3p,mmu-miR-429-3p,mmu-miR-455-3p,mmu-miR-760-5p,mmu-miR-96-5p,6_5971_star,9_8784).GO功能分析显示,差异性表达的miRNA调控基因在生物过程中主要参与调节生物生长发育、神经元形成与分化过程,KEGG 通路分析显示主要有丝裂原活化蛋白激酶信号通路被激活.结论 差异性表达的miRNA可能参与调控HIE发病的机制,将为HIE的机制研究、临床诊断及药物设计提供理论依据和新的思路.

目的 探讨miR-429在上皮性卵巢癌组织中的表达及其与卵巢癌细胞增殖和迁移的关系,寻找其下游靶基因,并探讨miR-429靶基因DNAJB6在卵巢癌中的作用.方法 收集2019年9月—2022年2月期间于哈尔滨医科大学附属第二医院经妇科手术切除得到的27例上皮性卵巢癌组织和14例正常卵巢组织,使用实时荧光定量聚合酶链反应检测组织中miR-429及DNAJB6 mRNA的表达.在人卵巢癌细胞株A2780中敲低miR-429,使用CCK-8、平板克隆形成及Transwell细胞迁移实验在体外检测肿瘤细胞增殖及迁移能力的变化.采用生物信息学软件预测miR-429下游靶基因并分析其在卵巢癌中的预后价值,应用qRT-PCR和Western blotting实验进一步证实miR-429与DNAJB6之间的调控关系.结果 与正常卵巢组织[0.886(0.785,2.014)]相比,miR-429在上皮性卵巢癌组织[2.048(0.830,5.281)]中高表达(P=0.018),过表达miR-429可以增强卵巢癌细胞的增殖和迁移能力.与正常卵巢组织(1.290±0.781)相比,DNAJB6在上皮性卵巢癌组织(0.710±0.456)中低表达(P=0.004),与卵巢癌患者的预后关系密切.相对于对照组DNAJB6 mRNA的表达量(1.020±0.251),敲低miR-429可以上调DNAJB6 mRNA的表达量(2.839±0.305,P=0.001);敲低miR-429同样也上调了 DNAJB6蛋白的表达(P=0.049).结论 miR-429在上皮性卵巢癌中发挥促癌作用,可以调控靶基因DNAJB6的表达,提示miR-429/DNAJB6可能是卵巢癌治疗的新靶点.

目的:构建子宫内膜癌(endometrial carcinoma,EC)竞争性内源RNA(competing endogenous RNA,ceRNA)并研究LINC-FAM138B对HEC1B细胞恶性生物学行为的影响.方法:从TCGA数据库下载EC患者的表达谱,筛选差异基因并构建ceRNA网络.STRING结合Cytoscape进行蛋白互作分析及筛选Top10基因,筛选与预后相关的基因,RT-qPCR实验验证LINC-FAM138B、hsa-mir-429 和PRKG1 在EC患者的癌组织及癌旁组织样本(n =7)中的表达水平.将细胞分为OV LINC-FAM138B组、Sh LINC-FAM138B组、OV NC组和Sh NC组,通过CCK-8 实验检测细胞增殖能力;划痕实验检测细胞迁移能力;Transwell实验检测细胞侵袭能力;流式细胞术检测细胞凋亡能力.结果:筛选到 457、65 和 1 119 个差异lncRNA、miRNA和mRNA.获得具有 823 个调控关系对的 ceRNA 网络.结合 Top10 基因和生存分析结果发现PRKG1 是LINC-FAM138B结合 hsa-mir-429 靶向基因中得分最高的基因.PRKG1、RBFOX3、RGS2、SLC2A4 高表达的EC患者预后显著比低表达的患者差(P<0.05).RT-qPCR实验结果表明,与癌旁组织相比,LINC-FAM138B和PRKG1 在EC癌组织中低表达(P<0.05),而hsa-mir-429 在EC癌组织中高表达(P<0.05).与OV NC组比较,OV LINC-FAM138B组中HEC1B细胞的增殖、迁移、侵袭能力显著下降(P<0.05),凋亡能力显著上升(P<0.01).与Sh NC组比较,Sh LINC-FAM138B组中HEC1B细胞的增殖、迁移、侵袭能力显著上升(P<0.01),凋亡能力显著下降(P<0.05).结论:构建了EC的ceRNA网络,且发现LINC-FAM138B抑制HEC1B细胞的增殖、迁移和侵袭及促进细胞的凋亡.