目的:通过成簇规律间隔的短回文重复序列及其相关蛋白9(CRISPR/Cas9)系统构建HMGB2基因敲除的小鼠巨噬细胞株(Raw264.7)，并验证肺炎克雷伯菌(KP)感染后HMGB2敲除细胞介导促炎因子产生和杀菌能力的变化。方法:针对小鼠HMGB2基因靶向设计向导RNA(sgRNA)，将插入sgRNA的pX459质粒转染Raw264.7细胞，利用抗性筛选和有限稀释法获得HMGB2基因敲除细胞克隆。利用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)对所获细胞克隆的HMGB2基因和蛋白表达进行鉴定。通过细菌计数测定HMGB2 －/－ Raw264.7吞噬和杀伤细菌能力，通过酶联免疫吸附试验(ELISA)测定HMGB2 －/－ Raw264.7促炎因子分泌情况。组间比较采用 t检验。 结果:利用嘌呤霉素成功筛选出单克隆细胞株，HMGB2蛋白在敲除细胞株中完全不表达，HMGB2敲除后对KP的吞噬与正常细胞比较，差异无统计学意义(2.37±0.31比2.33±0.15， t＝0.17， P>0.05)，但感染后18 h胞内细菌存活比例显著高于正常细胞[(67.67±9.02)%比(32.33±6.11)%， t＝5.62， P<0.01]；KP感染HMGB2 －/－ Raw264.7，促炎因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β和IL-6分泌量显著低于正常细胞[(54.00±18.08) pg/ml比(111.70±8.50) pg/ml， t＝5.00， P<0.01；(65.67±9.87) pg/ml比(128.00±30.61) pg/ml， t＝3.36， P<0.01；(72.67±9.07) pg/ml比(95.00±5.29) pg/ml， t＝3.68， P<0.05]。 结论:通过CRISPR/Cas9技术成功构建HMGB2基因敲除Raw264.7细胞株，验证了HMGB2对诱导相关炎性因子及抗KP感染的影响。

目的:观察腹腔注射百草枯（PQ）构建的帕金森（PD）小鼠模型的肠道时间依赖性改变，初步建立脑肠轴的联系。方法:于2019年10月，将48只小鼠随机分为染毒4周（P-4）组、染毒6周（P-6）组、染毒8周（P-8）组、对照4周（C-4）组、对照6周（C-6）组、对照8周（C-8）组，每组6只。染毒组腹腔注射15 mg/kg PQ溶液，对照组腹腔注射生理盐水（0.2 ml/20 g），每周2次。分别于初始状态（0周）及4、6、8周末次给药后，通过神经行为学测试（旷场、爬杆、悬尾及高架十字迷宫实验）评估小鼠的情绪变化和运动功能；收集小鼠1 h粪便，计算粒数及含水量评估肠道功能状态；免疫印迹实验检测小鼠中脑黑质区α突触核蛋白（α-syn）、酪氨酸羟化酶（TH），结肠闭锁小带蛋白-1 (ZO-1）、闭合蛋白（Occludin），炎症标志物分化抗原簇分子11b （CD11b）、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、高迁移率族蛋白B1 （HMGB1）、白细胞介素-1β（IL-1β），神经元标志物β-微管蛋白-Ⅲ（βⅢ-tubulin）、α-syn蛋白的表达水平；免疫组织化学染色检测结肠紧密连接蛋白ZO-1和Occludin表达水平；免疫荧光染色检测中脑黑质区TH表达水平及结肠神经元标志物βⅢ-tubulin和磷酸化（S129）α突触核蛋白（Ser129 α-syn）共定位。结果:与初始状态（0周）和C-8组比较，P-8组小鼠爬杆测试得分和静止时间明显增高，活动总路程、平均活动速度、开放臂进入次数百分比和1 h粪便粒数明显降低（ P<0.05）；染毒后，模型小鼠1 h粪便含水量先升高后降低，P-4组和P-6组明显高于相同时间点对照组，P-8组明显低于初始状态（ P<0.05）。与对照组（C-8组）、P-4组和P-6组比较，P-8组小鼠ZO-1、Occludin蛋白表达水平明显降低（ P<0.05）。与对照组比较，P-4组小鼠早期炎症标志物CD11b和IL-1β表达水平明显升高（ P<0.05）；与对照组和P-4组比较，P-6组和P-8组小鼠CD11b、iNOS、HMGB1和IL-1β表达水平明显升高（ P<0.05）。与对照组和P-4组比较，P-8组小鼠结肠βⅢ-tubulin表达水平明显降低，α-syn和Ser129 α-syn表达水平明显升高（ P<0.05）；模型小鼠结肠Ser129 α-syn与βⅢ-tubulin表达水平呈负相关（ r s=-0.914 9，95% CI:-0.977 1~-0.708 5， P<0.001）；Ser129 α-syn和βⅢ-tubulin在结肠肌间神经丛区域共定位随染毒时间逐渐增多。与对照组、P-4组和P-6组比较，P-8组小鼠中脑黑质区TH表达水平明显降低，α-syn和Ser129 α-syn表达水平明显增加（ P<0.05）；模型小鼠中脑黑质区Ser129 α-syn与TH相对表达水平呈负相关（ rs=-0.971 6, 95% CI：-0.992 5~ -0.895 3， P<0.001）。 结论:通过腹腔注射PQ成功构建PD小鼠模型，且模型小鼠肠道功能呈时间依赖性降低，初步确定异常聚集的α-syn可能是沟通脑肠轴的重要物质之一。

目的:研究长链非编码RNA mir-100-let-7a-2-mir-125b-1簇宿主基因(long non-coding RNA mir-100-let-7a-2-mir-125b-1 cluster host gene,LncRNA MIR100HG)调控miR-142-5p/SRY相关的高迁移率族盒蛋白5(SRY-related high mobility group box 5,SOX5)轴对口腔鳞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)细胞增殖、侵袭能力的影响.方法:采用实时荧光定量PCR和免疫印迹检测体外培养的人口腔上皮细胞和人OSCC细胞CAL27、SAS、SCC-25中LncRNA MIR100HG、miR-142-5p与SOX5表达.体外培养CAL27细胞,随机分为对照组、LncRNA MIR100HG敲低组(转染LncRNA MIR100HG siRNA质粒)、miR-142-5p mimics组(转染miR-142-5p mimics)、共转染阴性对照组(转染空载质粒和miR-142-5p阴性对照)、LncRNA MIR100HG敲低+miR-142-5p inhibitor组(转染LncRNA MIR100HG siRNA质粒和miR-142-5p inhibitor),分组转染后,采用实时荧光定量PCR和免疫印迹检测各组细胞LncRNA MIR100HG、miR-142-5p及SOX5表达;采用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐法、5-乙炔基-2'-脱氧尿苷染色及集落形成实验检测各组细胞增殖;采用Transwell侵袭实验检测各组CAL27细胞侵袭;采用免疫印迹检测各组CAL27细胞上皮间质转化相关蛋白表达.将各组细胞接种在裸鼠背部右侧腋窝附近皮下构建OSCC移植瘤模型,饲养3周后检测各组移植瘤裸鼠肿瘤体积及重量.采用双荧光素酶报告实验检测CAL27细胞LncRNA MIR100HG对miR-142-5p、miR-142-5p对SOX5的靶向调控.结果:与人口腔上皮细胞相比,CAL27、SAS、SCC-25中LncRNA MIR100HG、SOX5蛋白与mRNA表达升高,miR-142-5p表达降低.与对照组相比,LncRNA MIR100HG敲低组、miR-142-5p mimics组细胞SOX5蛋白与mRNA表达、细胞活力、增殖率、集落形成比例、移植瘤裸鼠肿瘤体积及重量、侵袭数、N-cadherin蛋白表达降低,miR-142-5p表达、E-cadherin蛋白表达升高.下调miR-142-5p可减弱LncRNA MIR100HG敲低对CAL27细胞各指标的作用.CAL27细胞中LncRNA MIR100HG靶向下调miR-142-5p、miR-142-5p靶向下调SOX5.结论:敲低LncRNA MIR100HG可通过调控miR-142-5p/SOX5轴而抑制OSCC细胞增殖、上皮间质转化及侵袭,并可延缓其体内肿瘤生长.

目的:基于脑肠轴理论探讨健脾化痰方联合针刺对卒中后抑郁(PSD)患者血清P物质(SP)和神经肽Y(NPY)和炎症介质的影响.方法:研究对象来自石家庄市中医院脑病科2019年3月～2022年4月期间收治的PSD患者,共计116例.按照随机数字表法,将患者分为对照组和实验组,各为58例.基于脑肠轴理论,对照组在接受西医常规治疗的基础上增加健脾化痰方治疗,实验组在对照组的基础上接受针刺治疗.观察两组的疗效、各项量表评分[汉密尔顿抑郁量表(HAMD)、美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)、日常生活活动能力评分(ADL)]、SP、NPY、炎症介质[白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、高迁移率簇蛋白B1(HMGB1)].结果:实验组的临床总有效率高于对照组(P＜0.05).实验组治疗后HAMD、NIHSS评分低于对照组,ADL评分高于对照组(P＜0.05).实验组治疗后SP低于对照组,NPY高于对照组(P＜0.05).实验组治疗后IL-1β、IL-6、TNF-α、HMGB1低于对照组(P＜0.05).结论:基于脑肠轴理论健脾化痰方联合针刺治疗PSD,可以有效改善患者的临床症状,调节血清SP、NPY和炎症介质水平.

目的 探讨血清上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)、高迁移率簇蛋白B1(HM GB1)在卵巢癌中的价值及其与化疗疗效的关系.方法 选取2012年10月至2014年10月应用ELISA 法测定80例初治卵巢癌患者行NAC化疗方案前后血清E-cadherin、HMGB1水平,并与60例健康体检者进行比,化疗后对患者随访36~60个月,分析血清 E-cadherin、HM GB1水平与卵巢癌近远期疗效的关系.结果 卵巢癌化疗前血清 E-cadherin、HM GB1水平高于卵巢良性肿瘤及对照组,差异有统计学意义(P<0.05),而化疗后血清E-cadherin、HMGB1水平低于化疗前,但仍高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).化疗后CR+PR组血清E-cadher-in、HM GB1水平低于化疗前,差异有统计学意义(P<0.05),且与对照组相当;而SD+ PD组患者血清E-cad-herin、HMGB1水平明显高于对照组及CR+ PR组,差异有统计学意义(P<0.05).患者化疗后E-cadherin、HMGB1水平与临床分期、肿瘤大小及淋巴结转移有关(P<0.05),经Cox风险模型分析可知,肿瘤临床分期、淋巴转移、化疗后E-cadherin>2.10 mg/L、化疗后 HMGB1>115 μg/mL是卵巢癌无进展生存期的独立危险因素(P<0.05).结论 化疗前后动态监测血清E-cadherin、HM GB1水平将有助于评价卵巢癌预后情况及复发情况,为下一步治疗提供指导.

目的:探讨逆行胆胰管造影术(ERCP)治疗胆总管结石合并肝硬化患者的临床效果及对患者肝功能的影响.方法:对实施ERCP手术治疗的122例胆总管结石合并肝硬化患者进行回顾性研究,观察取石成功率、治疗前后患者的肝功能等指标变化.结果:其中120例患者均成功完成取石手术,2例患者因合并Mirizzi综合征,转开腹手术治疗,手术成功率为98.36％.术后2周,120例患者的谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、直接胆红素(DBIL)、白蛋白(ALB)、终末期肝病(MELD)评分较术前均显著降低(P＜0.05);术后7d,患者的血清肿瘤坏死因子-α(TNF-αt)、白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6、MCP-1、高迁移率簇蛋白-1(HMGB-1)水平逐渐恢复至术前水平;Child-pugh分级A级患者并发症发生率为4.35％、B级患者的并发症发生率为7.69％、C级患者的并发症发生率为41.67％,肝功能C级患者采用ERCP治疗的并发症率较高(x2=21.625,P＜0.001).结论:ERCP治疗胆总管结石合并肝硬化患者取石效果较好,成功率高,术后患者肝功能及炎症应激反应可较快恢复,但是对于肝功能C级患者手术并发症发生率较高.

草酸钙肾结石是泌尿外科的常见病,其形成机制迄今不明.目前认为,细胞-晶体反应诱导的肾脏炎症损伤在肾内草酸钙晶体的形成过程中扮演着十分重要的角色.新近的研究结果显示,细胞-晶体反应介导的炎症可以导致肾脏细胞损伤,刺激细胞内的NADPH氧化酶表达,引发活性氧簇大量生成,激活核因子KB信号转导通路,释放大量的炎性因子,引发炎症级联反应,促进钙盐晶体的聚集、成核和生长过程,最终导致肾内晶体乃至结石的形成.巨噬细胞、NLRP3-高迁移率族蛋白炎症网络、胎球蛋白A、自噬激活等多种调控因子和作用机制参与这一过程.

目的:探讨缺氧条件下高迁移率族蛋白B1(HMGB1)对人肝癌细胞系HepG2线粒体功能的影响及其机制.方法:将HMGB1小干扰RNA(HMGB1-siRNA)和阴性对照siRNA(siRNA-NC)分别转染入HepG2细胞,实验分为:缺氧(hypoxia)组、hypoxia+HMGB1-siRNA组和hypoxia+siRNA-NC组.流式细胞术检测各组细胞线粒体活性氧簇(mtROS)含量和线粒体膜电位水平,RT-qPCR检测各组细胞线粒体DNA(mtDNA)拷贝数,ATP检测试剂盒检测各组细胞内ATP产生量,Western blot检测各组细胞线粒体生物合成相关分子表达的变化.结果:与hypoxia组和hypoxia+siRNA-NC组相比,当HMGB1表达被抑制后,细胞线粒体活性氧簇含量明显升高,线粒体膜电位水平、mtDNA拷贝数和ATP产生量明显下降(P<0.05);Western blot结果显示,hypoxia+HMGB1-siRNA组的线粒体生物合成相关分子表达量下降(P<0.05).结论:缺氧环境下,HMGB1通过调控线粒体生物合成,诱导新生线粒体形成并维持细胞线粒体的正常功能.

目的:研究蓝萼甲素(GLA)对JAR细胞HMGB1炎症信号通路的调节作用,探讨GLA与HMGB1相互作用的机制.方法:不同浓度GLA(0.01、0.1、1、10μg/ml)刺激培养JAR细胞48 h后,qRT-PCR与Western blot分别检测HMGB1 RNA与蛋白水平的表达;荧光素酶报告基因检测NF-κB表达活性;激光共聚焦检测HMGB1在细胞中的分布情况;ELISA检测培养液HMGB1的含量.结果:0.1μg/ml GLA刺激培养JAR细胞,HMGB1表达与NF-κB活性升高最显著,随着GLA浓度的增加,两者表达水平反而下降;GLA刺激培养JAR细胞可引起HMGB1从胞核转移入胞浆,进而分泌到胞外.结论:GLA通过HMGB1信号通路调节JAR细胞炎症反应,且作用效果与剂量密切相关.

目的 基于血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)-活性氧簇(ROS)-高迁移率族蛋白1(HMGB1)通路探讨参芪养心汤对扩张型心肌病(DCM)大鼠心功能的影响.方法 选取40只SD大鼠腹腔注射阿霉素构建DCM模型,造模成功32只,随机分为模型组、培哚普利组、美托洛尔组、参芪养心汤组,每组8只,另选8只同龄正常SD大鼠作为正常组.各组相应给予培哚普利3 mg/(kg·d),美托洛尔50 mg/kg(2次/d),参芪养心汤1.87 g/(kg·d),模型组和正常组给予等量生理盐水,持续灌胃8周.各组小鼠行心脏超声检查左心室舒张末期内径(LVEDD)、左心室收缩末期内径(LVESD)、左心室射血分数(LVEF)、短轴缩短率(FS);计算心脏重量指数(HWI);测定血清脑钠肽(BNP)、TNF-α、IL-1、C反应蛋白(CRP)水平;观察左室心肌组织形态学变化;放射免疫法测定心肌组织AngⅡ水平;RT-PCR法测定心肌组织血管紧张素原(AGT)、AngⅡ1型受体(AT1)、蛋白激酶C(PKC)、HMGB1、核因子κB (NF-κB) mRNA表达水平;DCFH-DA荧光法测定心肌组织ROS水平.正常组、模型组、参芪养心汤组行18F-FDG Micro-PET心肌代谢显像检查.结果 与正常组比较,模型组大鼠LVEDD、LVESD、HWI升高,心肌组织AngⅡ、ROS、AGT、AT1、PKC、HMGB1、NF-κB mRNA表达水平升高,血清BNP、TNF-α、IL-1、CRP水平升高(均P＜0.05);LVEF、FS下降(均P＜0.05),部分心肌摄取18 F-FDG降低(P＜0.05).与模型组比较,用药组大鼠LVEDD、LVESD、HWI下降,心肌组织AngⅡ、ROS以及AGT、AT1、HMGB1、NF-κB mRNA表达水平下降,血清BNP、TNF-α、IL-1、CRP水平下降(均P＜0.05),LVEF、FS升高(均P＜0.05),用药组间比较;差异无统计学意义(P＞0.05);培哚普利组、美托洛尔组心肌组织PKC mRNA表达水平下降(均P＜0.05);参芪养心汤组部分心肌摄取18 F-FDG升高(P＜0.05).大鼠左心室心肌组织AngⅡ、ROS水平、HMGB1mRNA之间呈正相关关系(P＜0.01).结论 参芪养心汤能缩小DCM大鼠左心室内径,提高LVEF,改善心功能,其作用机制可能与调节AngⅡ-ROS-HMGB1通路表达有关.