目的:探讨微小RNA(miRNA，miR)-630对膀胱尿路上皮癌侵袭转移的调控作用及其分子机制。方法:通过生物信息学预测，APC膜募集蛋白(Amer2)为miR-630下游靶基因。构建含miR-630结合位点的Amer2基因3’端非编码区(3’UTR)荧光素酶报告载体，检测miR-630与Amer2的3’UTR相互作用对荧光素酶活性的影响。miR-630模拟物(mimics)和抑制剂(inhibitor)用脂质体(Lipofectamine) 2000在体外瞬时转染膀胱癌细胞株EJ，转染72 h后采用荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)的方法检测Amer2、鸟嘌呤核苷酸交换因子(GEF-H1)的表达；蛋白质印迹法(Western blot)检测Amer2、GEF-H1蛋白的表达变化；细胞划痕实验、Transwell小室体外侵袭实验反映细胞增殖、转移潜能的变化，组间比较采用两独立样本 t检验。 结果:转染miR-630 mimics后，Amer2荧光海肾素酶活性低于对照组，差异有统计学意义(13.885±1.624比22.182±1.354， t＝-6.885， P<0.05)；转染miR-630 mimics后，膀胱癌细胞株EJ中Amer2的表达量明显低于对照组(11.786±4.123比8.327±3.863， t＝5.780， P<0.05)，差异有统计学意义，实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)及Western blot结果显示GEF-H1基因及蛋白的表达水平明显高于对照组(9.886±5.422比13.565±4.476， t＝5.420， P<0.05)，差异有统计学意义；转染miR-630 inhibitor后，体外实验表明膀胱癌细胞的迁移活性[(42.320±4.183)%比(35.528±5.433)%， t＝5.825]和侵袭能力[(49.180±5.677)%比(40.422±6.266)%， t＝7.377， P<0.05]明显低于对照组，差异有统计学意义。 结论:MiR-630在膀胱尿路上皮癌中高表达，可能通过调控Amer2/GEF-H1通路增强肿瘤细胞增殖，诱导膀胱癌细胞侵袭转移。

目的:检测不同临床分期膀胱尿路上皮癌组织中微小RNA(miRNA，miR)-630的表达水平，探讨miR-630调控通路与膀胱尿路上皮癌临床病理特征之间的关系。方法:选用郑州大学第一附属医院2017年3月至2019年4月行手术切除并经病理证实的膀胱尿路上皮癌标本62例，每例标本均选用癌组织中心、癌旁组织及其远端正常黏膜对照。采用荧光定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组织化学技术检测切除标本中的miR-630、APC膜募集蛋白2(Amer2)和鸟嘌呤核苷酸交换因子(GEF-H1)的表达，并分析与各临床病理因素之间的关系。组间比较采用两独立样本 t检验。患者临床病理特征的分析采用 χ2检验。 结果:miR-630在膀胱尿路上皮癌组织中的表达明显高于正常黏膜(0.913±0.215比0.624±0.195， t＝2.133， P<0.05)，差异有统计学意义，其在肌层浸润性尿路上皮癌中的表达高于非肌层浸润性(0.998±0.166比0.721±0.274， t＝1.886， P<0.05)，差异有统计学意义；Amer2在膀胱尿路上皮癌组织中的表达明显低于正常黏膜(0.828±0.235比1.683±0.612， t＝-0.091， P<0.05)，差异有统计学意义，与临床分期明显相关；Amer2下游调控因子GEF-H1在膀胱尿路上皮癌组织中的表达明显高于正常黏膜(1.712±0.192比1.125±0.554， t＝-0.037， P<0.05)，差异有统计学意义。相关分析显示miR-630与Amer2表达呈负相关( r＝-0.537， P<0.05)；Amer2与GEF-H1表达呈负相关( r＝-0.613， P<0.05)。 结论:miR-630与膀胱尿路上皮癌临床分期及淋巴结转移明显相关，可能通过调控Amer2/GEF-H1通路，从而介导膀胱癌进展。

目的:分析一个罕见智力发育障碍家系的临床特征和致病基因变异.方法:收集某智力发育障碍家系中4 个成员的临床资料,提取各成员的外周血DNA和RNA,采用全外显子组测序和Sanger测序进行基因变异的筛查和验证.结果:该家系先证者表现为重度智力发育障碍、语言运动发育迟缓、大头畸形、高额头和小下颌等,检测到TRIO基因c.4084T>C(p.Y1362H)新发变异;该变异可使高度保守的 1 362 位上的氨基酸由酪氨酸变成组氨酸,导致蛋白质鸟嘌呤核苷酸交换因子1 结构域的破坏.先证者姐姐表现为轻度智力发育障碍、小头畸形、眼距宽等,检测到TRIO基因c.2046+1G>T新发变异;该变异可导致剪接位点的破坏,使mRNA第11 号外显子多出5 个碱基,预测会产生一个含有724 个氨基酸的截短蛋白.其父母表型正常,TRIO基因均为野生型.结论:TRIO基因c.4084T>C和c.2046+1G>T可能是该家系的潜在致病变异.

该研究构建了NT CRISPR/Cas9(阴性对照)及C3G CRISPR/Cas9质粒,分别将其包装成重组慢病毒,并感染H9C2心肌细胞,以研究敲除C3G(Crk SH3域结合鸟嘌呤核苷酸交换因子)对H9C2心肌细胞增殖和凋亡的影响及其机制.将实验分为NT CRISPR/Cas9组、C3G CRISPR/Cas9组、NT CRISPR/Cas9低氧组和C3G CRISPR/Cas9低氧组. 通过RT-PCR检测C3G mRNA的表达;Western blot检测相关蛋白表达;CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡.结果显示,C3G CRISPR/Cas9组和C3G CRISPR/Cas9低氧组的C3G mRNA和蛋白无表达;分别与NT CRISPR/Cas9组和NT CRISPR/Cas9低氧组比较,C3G CRISPR/Cas9组和C3G CRISPR/Cas9低氧组的p-ERK1/2和Bcl-2蛋白以及细胞增殖水平均降低(P＜0.05),Bax蛋白及细胞凋亡水平均增加(P＜0.05);与NT CRISPR/Cas9组相比,NT CRISPR/Cas9低氧组C3G mRNA和蛋白表达均降低(P＜0.05),p-ERK1/2和Bcl-2蛋白及细胞增殖水平均降低(P＜0.05),Bax蛋白及细胞凋亡水平均增加(P＜0.05);与C3G CRISPR/Cas9组相比,C3G CRISPR/Cas9低氧组的p-ERK1/2和Bcl-2蛋白及细胞增殖水平均降低(P＜0.05),Bax蛋白及细胞凋亡水平均增加(P＜0.05).以上结果表明,敲除C3G能通过调控p-ERK1/2、Bcl-2及Bax抑制H9C2心肌细胞增殖并促进其凋亡.

蓝萼香茶菜[Rabdosia japonica (Burm.f.) Hara var.glaucocalyx (Maxim.) Hara]是中国民间草药,具有抗肿瘤活性.此研究的目的是探讨蓝萼甲素(glaucocalyxin A,GLA),一种从蓝萼香茶菜中分离纯化得到的二萜类化合物,诱导胶质瘤细胞凋亡的作用及其机制.通过检测C6大鼠胶质瘤细胞的存活率及干扰核糖核酸(ribonucleic acid,RNA)、聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)和蛋白质免疫印迹(Western blot)技术以探究细胞凋亡的分子信号机制.当GLA存在时,C6大鼠胶质瘤细胞的存活率明显降低,鸟嘌呤核苷酸交换因子H1 (guanine nucleotide-exchange factor,GEF-H1)表达上调,引起细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK)蛋白磷酸化,造成细胞凋亡.因此,GLA诱导神经胶质细胞凋亡是通过激活GEF-H1/ERK途径.

目的:探讨转录反式激活因子-Rab鸟嘌呤核苷酸交换因子1 (Tat-RabGEF1) 融合蛋白对小鼠肝脏缺血再灌注 (IR) 所致肺损伤的作用及其可能的机制.方法:选用雄性C57BL/6小鼠24只, 按随机数字表法分为假手术 (sham) 组、IR组和Tat-RabGEF1组, 每组8只.采用肝脏缺血90 min再灌注4 h制备肺损伤模型, Tat-Rab-GEF1组于再灌注即刻经尾静脉注射Tat-RabGEF1 (10 mg/kg) .再灌注4 h后处死小鼠, 收集支气管肺泡灌洗液 (BALF) , 采用ELISA法检测BALF中肿瘤坏死因子α (TNF-α) 、白细胞介素6 (IL-6) 和白细胞介素1β (IL-1β) 的含量;取肺组织进行病理学检测, 测定湿/干重比、β-氨基己糖苷酶 (β-Hex A) 和髓过氧化物酶 (MPO) 水平, 并采用Western blot法测定肺组织类胰蛋白酶的表达水平.结果: (1) 肝缺血90 min再灌注4 h肺组织病理损伤明显, 湿/干重比增高, Tat-RabGEF1尾静脉注射明显减轻肺脏病理损伤. (2) 与IR组比较, Tat-RabGEF1组BALF中TNF-α、IL-6和IL-1β浓度, 以及肺组织β-Hex A、MPO水平和类胰蛋白酶表达显著降低 (P <0.05) .结论:体内蛋白转导Rab GEF1减轻肝IR所致的肺损伤, 减少肺组织炎症反应和细胞因子水平, 其机制可能与抑制肥大细胞激活有关.

目的 研究鸟嘌呤核苷酸转化因子交换蛋白1对大鼠糖尿病机械性疼痛的影响.方法 雄性SD大鼠随机分为CON组和STZ组,CON组随机分为CONshRNA组、CONEpac1shRNA组,STZ组大鼠诱导成为糖尿病机械性疼痛(DMA)模型后随机分为DMAshRNA组、DMAEpac1shRNA组、DMANS组、DMA8-pCPT组.Epac1shRNA慢病毒载体用于抑制Epac1的表达,对照shRNA慢病毒载体为阴性对照,8-pCPT为Epac1的激活剂.CONshRNA 组、DMAshRNA 组鞘内注射对照 shRNA 慢病毒载体,CONEpac1shRNA 组、DMAEpac1shRNA组鞘内注射Epac1shRNA慢病毒载体,DMANS组足底注射生理盐水,DMA8-pCPT组足底注射8-pCPT.观察各组大鼠的后爪回缩阈值(PWT)变化,用实时PCR、Western印迹检测大鼠背根神经节(DRG)部位鸟嘌呤核苷酸转化因子交换蛋白1(Epac1)mRNA和蛋白表达的变化.结果 与CON组大鼠相比,STZ组大鼠的机械疼痛敏感性阈值下降(P=0.035).DMA大鼠注射Epac1激活剂8-pCPT组与生理盐水组相比,疼痛时间延长(2 h P=0.012,4 h P=0.020).DMA组与CON组相比Epac1mRNA和蛋白的表达升高(均P<0.01),鞘内注射shRNA可降低Epac1的mRNA和蛋白表达(P<0.01,P=0.020).DMA组的PWT值明显低于CON组(P=0.006).结论 Epac1在糖尿病机械性疼痛大鼠中表达增高,下调Epac1可缓解疼痛.