目的 利用蛋白质组学寻找抑制冠心病血瘀证的关键蛋白,并基于核因子(nuclear factoer,NF)-κB炎性信号通路和内皮细胞活化模型验证关键蛋白纤维连接蛋白(fibronectin 1,Fn)对冠心病血瘀证的作用.方法 将冠心病血瘀证组患者和健康组受试者的血清进行相对定量和绝对定量的等比标记(isobaic tag for relative and absolute quantitation,ITRAQ)蛋白质组学分析,将差异蛋白进行GO和KEGG功能富集,从与冠心病密切相关的富集通路中筛选出关键蛋白Fn.利用 60 μg/mL的氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,oxLDL)构建内皮细胞活化模型,在内皮细胞活化模型中加入 5 μg/cm2、10 μg/cm2、20 μg/cm23个浓度的血浆Fn或敲减内皮细胞来源Fn的方法进行干预.分组为空白组、模型组、对照组、FnEC-KD 组、Fn5 组、Fn10 组、Fn20 组.细胞免疫荧光法和免疫印迹法检测各组 NF-κB 核位移和 NF-κB 蛋白表达水平,ELISA 检测培养上清的细胞间黏附分子(intercellular cell adhesion molecule,ICAM)-1、血管细胞黏附分子(vascular cell adhesion molecule,VCAM)-1、前列环素 I-2(Proataglandin-I-2,PGI2)、内皮素的蛋白含量.结果 血清蛋白质组学结果显示健康组和冠心病血瘀证组存在 121 种差异蛋白,51 种血瘀证组下调蛋白集中在补体与凝血级联、肌动蛋白细胞骨架的调节、细胞外基质-受体相互作用途径,70 种血瘀证组上调蛋白集中在补体与凝血级联、肌动蛋白细胞骨架的调节、血小板活化、吞噬体途径.Fn与冠心病密切相关且在血瘀证患者中下调.细胞实验发现各组NF-κB总蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05);与空白组比较模型组NF-κB 核位移增强,ICAM-1、VCAM-1、内皮素表达上调,PGI2 分泌下调(P<0.05);与模型组比较,Fn5 组、Fn10 组、Fn20 组NF-κB 核位移减弱,VCAM-1、ICAM-1、内皮素分泌下调(P<0.05),PGI2 分泌显著上调(P<0.05);与模型组比较,FnEC-KD 组NF-κB 核位移减弱,VCAM-1、ICAM-1、内皮素表达含量明显降低(P<0.05),PGI2 表达明显增加(P<0.05).结论 血浆Fn抑制内皮细胞活化和功能障碍,内皮细胞来源的Fn促进内皮细胞活化和功能障碍.

目的:观察滋阴化痰方调控外泌体对小鼠胃癌皮下瘤的干预作用。方法:取对数生长期的第4代人胃癌细胞株MGC-803细胞，按随机数字表法分为外泌体对照组和低、高剂量组，低、高剂量组分别加入25、100 μg/ml的滋阴化痰方进行干预，48 h后提取各组MGC-803细胞分泌的外泌体。将20只BALB/c雄性小鼠按随机数字表法分为外泌体对照组、滋阴化痰方低剂量组、滋阴化痰方高剂量组和空白对照组，每组5只。除空白对照组外，其余各组小鼠分别经眼眶注射对应组细胞提取的外泌体，每只10 μg/次，隔日1次，共15次；空白对照组注射等量PBS。末次给药后以SGC-7901细胞接种小鼠建立肿瘤模型。观测小鼠体重及成瘤情况。采用免疫组化染色观察肿瘤组织血小板-内皮细胞黏附分子(platelet endothelial cell adhesion molecule-1, CD31)、VEGF、碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor, bFG)表达。结果:与空白对照组比较，滋阴化痰方高剂量组肿瘤重量[(170.00±10.00)mg比(343.33±20.82)mg]降低( P<0.05)，肿瘤CD31[(37.43±0.55)比(63.30±0.85)]、VEGF[(11.37±1.19)比(70.30±0.72)]、bFGF[(43.77±1.53)比(84.97±1.86)]表达均降低( P<0.05)。与外泌体对照组比较，滋阴化痰方低、高剂量组CD31、VEGF、bFGF表达均降低( P<0.05)。 结论:滋阴化痰方可调控外泌体抑制小鼠胃癌皮下瘤的生长，这种作用可能与抑制肿瘤血管新生有关。

目的:建立大鼠肺动脉内皮细胞(PAEC)、肺静脉内皮细胞(PVEC)以及肺微血管内皮细胞(PMVEC)的体外分离和培养方法，分析3种肺血管内皮细胞的生物学特征及功能。方法:本研究为实验研究。精分1只雄性SD大鼠肺动脉、肺静脉，肺组织取边缘剪碎，各样本分别用混合酶液消化，以血小板-内皮细胞黏附分子(PECAM-1/CD31)免疫磁珠法分选内皮细胞，用内皮细胞专用培养基培养。倒置显微镜下观察3种肺血管内皮细胞的形态差别，通过免疫荧光鉴定各组细胞纯度。通过免疫荧光和Western blot观察3组细胞血管性血友病因子(vWF)和平滑肌激动蛋白抗体(α-SMA)蛋白表达情况。通过基质胶体外成环实验比较3组细胞1.5、2.5、3.5、4.5、5.5、6.5、7.5 h成环情况。采用SPSS 22.0和FlowJo 10软件进行统计学分析和统计作图。结果:3组细胞24 h后均迅速贴壁，vWF免疫荧光染色均为阳性。3组细胞形态均为铺路石状，其中PAEC为典型的铺路石状，大多数呈椭圆形；而PVEC、PMVEC形态更细长。免疫荧光显示PVEC和PMVEC细胞浆内少量α-SMA蛋白弥散表达[(0.16±0.03)、(0.23±0.01)]，而PAEC中几乎观察不到α-SMA蛋白表达(0.06±0.01)。随着时间推移，3种肺血管内皮细胞成环周长均呈先上升后下降趋势，其中PVEC组成环长度最长。3组细胞成环周长在组间、时点间、时间和组间交互作用差异均具有统计学意义( P值均<0.01)。 结论:该方法所获得的3种肺血管内皮细胞纯度高，可在体外稳定培养。3种血管内皮细胞生物学功能有差别，其中PVEC体外成环能力最强。PAEC细胞表达α-SMA蛋白量最少。

目的:观察痰火方对脑缺血模型大鼠Caspase-3、胶质纤维酸性蛋白（GFAP）表达及血管新生的影响。方法:将大鼠按随机数字表法分为假手术组、模型组、痰火方低剂量组、痰火方中剂量组、痰火方高剂量组、金纳多组。除假手术组外，其余各组采用线栓法建立大鼠中动脉栓塞模型。造模2 h后，痰火方低、中、高剂量组分别灌胃0.92、1.84、3.68 g/kg痰火方干浸膏粉溶液，金纳多组灌胃金纳多60 mg/kg，每24 h给药1次，连续给药3 d。假手术组和模型组大鼠灌胃等体积生理盐水。采用四肢对称性评分评价肢体功能症状，采用免疫荧光染色法检测梗死灶周围组织GFAP、Caspase-3蛋白表达，评价大鼠星形胶质细胞活化、神经细胞凋亡情况，采用免疫荧光双标法检测血小板-内皮细胞黏附分子（CD31）/硫酸软骨素蛋白多糖2（NG2）蛋白表达，观察各组大鼠血管新生情况。结果:与模型组比较，术后48、72 h，痰火方高剂量组大鼠四肢对称运动评分提高（ P<0.01或 P<0.05），梗死灶周围皮层、纹状体Caspase-3阳性细胞数［皮层：（765.0±122.4）比（1 131.0±392.9）、纹状体：（895.9±389.8）比（1 401.9±453.1）］减少（ P<0.05或 P<0.01），CD31 +/NG2 +阳性细胞数［皮层：（1 355.0±257.9）比（825.4±308.1）；纹状体：（1 290.9±400.9）比（675.2±259.7）］增多（ P<0.01）；梗死周围皮层GFAP阳性积分光密度［（4 210.00±1 226.38）比（7 935.78±2 001.98）］降低（ P<0.01）。 结论:痰火方可减轻脑缺血大鼠肢体功能症状，抑制星形胶质细胞活化，下调Caspase-3表达，促进血管新生。

目的:探讨缺氧条件下，中介素(IMD)和肾小球系膜细胞(HMC)对内皮细胞的影响。方法:内皮细胞分为4组：(1)内皮细胞与系膜细胞共培养，加IMD处理作为HEMI组；(2)内皮细胞与系膜细胞共培养，无处理作为HEM组；(3)内皮细胞加IMD处理作为HEI组；(4)内皮细胞无处理作为HE组；将各组细胞在1%O 2、94%N 2、5%CO 2条件下缺氧培养12 h后，蛋白质印迹法(Western blot)、免疫细胞化学技术检测相关蛋白表达，实时定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测相关基因mRNA相对表达量，酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血管内皮生长因子A(VEGFA)含量，体外血管形成实验检测内皮细胞的成管分支数。实验结果两组间比较采用 t检验，多组间比较采用单因素方差分析。 结果:上皮型钙黏分子(VE-cadherin)表达量HEMI(1.629±0.197、1.557±0.066、10.552±0.523)高于HEM(1.116±0.118、1.340±0.161、8.128±0.542)、HEI(1.278±0.096、1.078±0.088、7.523±1.211)、HE组(1.000±0.000， F＝0.734、1.244、6.134， P<0.05)，差异有统计学意义；血小板内皮细胞黏附分子(PECAM-1/CD31)表达量HEMI(1.309±0.234、1.203±0.105、1.654±0.462)高于HEM(1.067±0.379、1.038±0.035、1.601±0.397)、HEI(1.225±0.091、1.101±0.038、1.605±0.207)、HE组(1.000±0.000)，差异无统计学意义( F＝5.083、5.434、6.428， P>0.05)；VEGF表达量HEMI(0.904±0.005、1.922±0.457)高于HEM组(0.690±0.071、1.000±0.000， F＝8.307、10.896， P<0.01)，ELISA中加入IMD组(1.018±0.319)VEGFA浓度比值高于对照组(0.921±0.294， F＝0.132， P<0.05)，差异有统计学意义；体外血管形成中HEMI(22.289±0.131)、HEM(21.318±0.594)、HEI(21.533±0.867)、HE(20.755±1.798)高于NE组(18.731±0.525， F＝5.926、0.030、1.033， P<0.05； F＝6.753， P>0.05)。 结论:缺氧条件下，IMD可以直接或通过系膜细胞间接双重影响内皮细胞，促进血管形成。

目的:探讨CO 2点阵激光Fusion融合模式对小鼠皮肤增生性瘢痕(HS)的影响及其机制。 方法:将50只雄性C57BL/6J小鼠采用随机数字表法分成空白对照组(空白涂膜剂基质0.1 ml)、模型组(空白涂膜剂基质0.1 ml)、10 mJ激光治疗组(10 mJ组)、20 mJ激光治疗组(20 mJ组)和阳性对照复方醋酸地塞米松乳膏(DXM，0.1 ml)组，每组10只。空白对照组皮下注射生理盐水，其余各组小鼠均于背部皮肤注射博来霉素(BLM)(1 mg/ml)制作HS模型，3周后采用温哥华瘢痕量表(VSS)评估皮肤瘢痕增生情况。治疗4周后处死小鼠，取瘢痕全层皮肤组织，苏木精-伊红(HE)染色、马松(Masson)染色法观察病理形态，免疫荧光染色检测血小板内皮细胞黏附分子(CD31)、转化生长因子β1(TGF-β1)表达，蛋白质印迹法(Western blot)检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤连蛋白(FN)、Ⅰ型胶原蛋白(Col Ⅰ)表达。组间数据比较采用单因素方差分析，最小显著性差异法(LSD)或Tamhane’s T2法进行两两比较。结果:模型组、10 mJ组、20 mJ组和DXM组VSS总评分高于空白对照组[(7.900±0.800)、(8.200±0.600)、(8.000±0.700)、(7.900±0.700)分比(0.000±0.000)分， t＝31.227、43.218、36.140、35.689， P均<0.05]，差异均有统计学意义。治疗4周后，空白对照组小鼠背部皮肤组织中表皮细胞排列整齐，层次清晰；模型组有较厚的表皮增生；10 mJ组有少量毛囊生出；20 mJ组毛囊排列较整齐；DXM组基本无表皮增生。空白对照组、10 mJ组、20 mJ组、DXM组的CD31、TGF-β1染色强度以及α-SMA、FN、Col Ⅰ蛋白相对表达量均明显低于模型组，且20 mJ组低于10 mJ组[α-SMA(3.840±0.410)、(2.560±0.260)、(2.180±0.250)、(1.330±0.150)比(0.980±0.120)， t＝21.171、17.448、13.684、5.762；FN(3.880±0.420)、(2.920±0.300)、(2.460±0.260)、(1.180±0.140)比(1.020±0.140)， t＝20.429、18.149、15.421、2.556；Col Ⅰ(3.360±0.340)、(2.480±0.260)、(2.020±0.220)、(1.360±0.180)比(1.000±0.160)， t＝19.861、15.330、11.857、4.727， P均<0.05]，差异均有统计学意义。 结论:CO 2点阵激光Fusion融合模式可减轻小鼠皮肤瘢痕增生，其机制可能与抑制瘢痕组织中CD31、TGF-β1和α-SMA、FN、Col Ⅰ蛋白表达有关。

目的:探究趋化因子和黏附分子在肾综合征出血热(hemorrhagic fever with renal syndrome，HFRS)发病机制中的作用及其临床意义。方法:纳入2014年至2016年丹阳市人民医院收治的35例HFRS患者。根据病期患者被分为发热期8例，低血压少尿期13例，多尿期8例，恢复期6例，并根据病情轻重分为轻症组19例和重症组16例。纳入20名健康者作为健康对照组。按病期采集血标本，分别检测血浆趋化因子、黏附分子、白细胞计数、淋巴细胞计数、单核细胞计数、血小板计数、凝血功能指标、肌酸激酶同工酶、肝肾功能相关指标。统计学分析采用LSD- t检验。 结果:重症组发热期和低血压少尿期单核细胞趋化蛋白-1水平分别高于健康对照组( t＝3.239、5.585)，重症组发热期和低血压少尿期血浆白细胞介素-8水平分别高于轻症组( t＝2.201、3.670)，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。重症组发热期和低血压少尿期的P选择素( t＝4.621、5.129)、L选择素( t＝5.321、5.641)、E选择素( t＝14.915、10.726)和细胞间黏附分子-1( t＝9.071、9.580)水平分别与健康对照组比较，差异均有统计学意义(均 P<0.01)。白细胞介素-8和单核细胞趋化蛋白-1分别与白细胞计数( r＝0.521、0.355)、中性粒细胞计数( r＝0.512、0.457)、单核细胞计数( r＝0.479、0.387)呈正相关(均 P<0.01)。重症组肌酸激酶同工酶、丙氨酸转氨酶、天冬氨酸转氨酶和乳酸脱氢酶在发热期( t＝4.049、3.887、6.021、4.660)与低血压少尿期( t＝4.614、3.955、4.937、4.396)均升高，与健康对照组相比差异均有统计学意义(均 P<0.01)。重症组尿素氮、肌酐在发热期( t＝11.127、8.342)和低血压少尿期( t＝10.078、6.011)均升高，与健康对照组相比差异均有统计学意义(均 P<0.01)。肌酸激酶同工酶与P选择素、L选择素、E选择素呈正相关( r＝0.365、0.401、0.425， P＝0.002、0.013、0.004)。重症组发热期和低血压少尿期活化部分凝血活酶时间( t＝6.977、7.862)、国际标准化比值( t＝6.326、6.664)、D-二聚体( t＝9.455、10.848)水平分别高于健康对照组，差异均有统计学意义(均 P<0.01)。重症组纤维蛋白原在发热期和低血压少尿期分别低于健康对照组，差异均有统计学意义( t＝-3.614、-5.674，均 P<0.01)。重症组血小板计数在发热期与低血压少尿期分别低于健康对照组( t＝-12.795、-14.160)，而血小板平均体积在发热期和低血压少尿期分别高于健康对照组( t＝8.132、9.976)，差异均有统计学意义(均 P<0.01)。 结论:HFRS患者趋化因子和黏附分子所介导的白细胞和内皮细胞的相互作用是引起毛细血管损伤和多器官损伤的重要因素。

目的:探讨褪黑素对链脲佐菌素(streptozotocin, STZ)诱导的糖尿病肺纤维化的作用及其具体调控机制。方法:将C57BL/6小鼠以随机数字表法随机分为对照组、STZ组、STZ＋低剂量褪黑素(5 mg/kg)组、STZ＋高剂量褪黑素(30 mg/kg)组，采用单次腹腔注射STZ(150 mg/kg)建立糖尿病肺纤维化小鼠模型，2周后血糖≥16.7 mmol/L为造模成功，随后给予褪黑素灌胃4周并喂养至16周处死取材。将人脐静脉内皮细胞分为对照组(葡萄糖浓度为5.5 mmol/L)、高糖组(葡萄糖浓度为33.3 mmol/L)、高糖＋低剂量褪黑素(5 μmol/L)组、高糖＋高剂量褪黑素(20 μmol/L)组，药物刺激结束后收集各组细胞用于后续检测。采用马松染色和免疫荧光染色观察肺纤维化病变，Western印迹法检测相关蛋白表达，采用转染沉默调节蛋白3(Sirtuin 3, Sirt3)siRNA的方法敲低Sirt3。结果:与对照组相比，STZ组肺组织发生显著的纤维化病变，而STZ＋低剂量褪黑素组、STZ＋高剂量褪黑素组纤维化均较STZ组减少。同时，与对照组相比，STZ/高糖组内皮细胞标志物血小板-内皮细胞黏附分子(CD31)显著减少( P<0.001; P<0.001)，间质纤维化标志物胶原蛋白3(Collagen 3)、波形蛋白(Vimentin)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)显著增加( P<0.001, P＝0.035, P<0.001; P<0.001, P<0.001, P<0.001)，而STZ/高糖＋低剂量褪黑素组、STZ/高糖＋高剂量褪黑素组在给予褪黑素治疗后上述趋势被部分逆转。此外，与对照组相比，STZ/高糖组Sirt3的蛋白表达显著减少( P<0.001; P<0.001)，而STZ/高糖＋低剂量褪黑素组、STZ/高糖＋高剂量褪黑素组的Sirt3的蛋白表达较STZ/高糖组增加( P＝0.047, P<0.001; P＝0.048, P<0.001)。转染Sirt3 siRNA敲低Sirt3的表达后，与高糖＋高剂量褪黑素组相比，高糖＋高剂量褪黑素＋Sirt3 siRNA组内皮细胞标志物CD31显著减少( P＝0.026)，间质纤维化标志物Collagen 3、Vimentin和α-SMA显著增加( P<0.001, P<0.001, P<0.001)。 结论:褪黑素通过激活Sirt3的表达抑制内皮间质转化，进而减轻STZ诱导的糖尿病小鼠肺纤维化。

目的:观察孔源性视网膜脱离（RRD）伴格子样变性（LD）患眼玻璃体液中相关细胞因子表达水平。方法:临床观察性研究。2022年5月至2023年2月于东南大学附属中大医院及南京医科大学附属眼科医院检查确诊且首次行玻璃体切割手术（PPV）治疗的RRD伴或不伴LD患者43例43只眼纳入研究。将患者分为RRD伴LD组（LD组）、RRD不伴LD组（Non-LD组），分别为27例27只眼、16例16只眼。选取同期特发性黄斑裂孔患者6例6只眼、特发性视网膜前膜患者4例4只眼作为对照组。PPV开始未开放眼内灌注前，切除并抽吸未稀释的中央部玻璃体液0.5 ml。采用Luminex高通量多因子检测技术定量检测玻璃体液中单核细胞趋化蛋白-1 （MCP-1）、巨噬细胞炎症蛋白（MIP）-1α、MIP-1β、干扰素-γ诱导蛋白-10 （IP-10）、白细胞介素（IL）-6、IL-8、巨噬细胞迁移抑制因子（MIF）、肿瘤坏死因子-α、干扰素-γ、细胞间黏附分子（ICAM）-1、血管细胞黏附分子（VCAM）-1、血小板内皮细胞黏附分子（PECAM）-1、胎盘生长因子（PLGF）、血管内皮生长因子（VEGF）浓度。组间细胞因子表达水平比较采用Kruskal-Wallis秩和检验，DSCF法校正事后两两比较的显著性水平。结果:LD组、Non-LD组、对照组患眼IL-6 （ H=14.400）、IL-8 （ H=13.610）、MCP-1（ H=12.050）、VEGF （ H=9.920）、MIP-1α （ H=6.620）、IP-10 （ H=7.780）、MIF （ H=12.920）、PECAM-1（ H=9.990）、ICAM-1 （ H=8.070）、PLGF （ H=16.850）浓度比较，差异有统计学意义（ P<0.05 ）。组间两两比较，LD组玻璃体液中IL-6、IL-8、PLGF浓度高于Non-LD组，差异有统计学意义（ P<0.05）。 结论:RRD伴LD患眼玻璃体液中IL-6、IL-8、PLGF表达水平升高。

目的:探讨高压氧处理对急性心肌梗死（AMI）大鼠心脏微血管功能及心室重构的影响。方法:选取33只雄性SPF级SD大鼠，按照随机数字表法分为假手术组、模型组和高压氧组，每组11只。模型组和高压氧组大鼠打开胸腔后在肺圆锥和左心耳之间下缘2～3 mm处进行结扎，术后缝合胸腔；高压氧组大鼠再进行高压氧处理7次；假手术组大鼠打开胸腔后再进行缝合，并不进行结扎。应用酶联免疫吸附实验检测大鼠血清肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、高敏C反应蛋白（hs-CRP）、白细胞介素（IL）-6和IL-1β含量；运用超声心动图和BL-420F生物机能实验系统检测大鼠心脏功能；Western blotting实验检测大鼠心肌组织磷酸化内皮型一氧化氮合酶（P-eNOS）和血小板内皮细胞黏附分子（PECAM-1）蛋白的表达水平，并进行Masson及HE染色，观察心室重构情况。结果:与假手术组比较，模型组大鼠左室射血分数（LVEF）、左室短轴缩短率（LVFS）、左室收缩压（LVSP）、左室内最大上升速率（+dp/dt max）明显降低，左室舒张末压（LVEDP）、左室内最大下降速率（-dp/dt max）明显升高（ P<0.01）。与模型组比较，高压氧组大鼠LVFS、LVEF、LVSP、+dp/dt max及梗死面积明显降低或缩小，LVEDP、-dp/dt max明显升高（ P<0.05）。与假手术组比较，模型组大鼠心肌组织P-eNOS和PECAM-1 表达水平明显降低（ P<0.01）；与模型组比较，高压氧组大鼠心肌组织P-eNOS和PECAM-1表达水平明显升高（ P<0.05）。与假手术相比，模型组大鼠心肌组织纤维化程度明显增高（ P<0.01）；与模型组对比，高压氧组大鼠心肌组织纤维化程度明显降低（ P<0.05）。与假手术相比，模型组大鼠血清IL-6、IL-1β、TNF-α及hs-CRP水平明显增高（ P<0.01）；与模型组对比，高压氧组大鼠血清IL-6、IL-1β、TNF-α及hs-CRP水平均明显低于模型组（ P<0.05）。 结论:高压氧处理可调节AMI大鼠体内炎症反应及心肌细胞的凋亡，减轻心肌组织的纤维化程度，从而改善临床症状。