目的 利用蛋白质组学寻找抑制冠心病血瘀证的关键蛋白,并基于核因子(nuclear factoer,NF)-κB炎性信号通路和内皮细胞活化模型验证关键蛋白纤维连接蛋白(fibronectin 1,Fn)对冠心病血瘀证的作用.方法 将冠心病血瘀证组患者和健康组受试者的血清进行相对定量和绝对定量的等比标记(isobaic tag for relative and absolute quantitation,ITRAQ)蛋白质组学分析,将差异蛋白进行GO和KEGG功能富集,从与冠心病密切相关的富集通路中筛选出关键蛋白Fn.利用 60 μg/mL的氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,oxLDL)构建内皮细胞活化模型,在内皮细胞活化模型中加入 5 μg/cm2、10 μg/cm2、20 μg/cm23个浓度的血浆Fn或敲减内皮细胞来源Fn的方法进行干预.分组为空白组、模型组、对照组、FnEC-KD 组、Fn5 组、Fn10 组、Fn20 组.细胞免疫荧光法和免疫印迹法检测各组 NF-κB 核位移和 NF-κB 蛋白表达水平,ELISA 检测培养上清的细胞间黏附分子(intercellular cell adhesion molecule,ICAM)-1、血管细胞黏附分子(vascular cell adhesion molecule,VCAM)-1、前列环素 I-2(Proataglandin-I-2,PGI2)、内皮素的蛋白含量.结果 血清蛋白质组学结果显示健康组和冠心病血瘀证组存在 121 种差异蛋白,51 种血瘀证组下调蛋白集中在补体与凝血级联、肌动蛋白细胞骨架的调节、细胞外基质-受体相互作用途径,70 种血瘀证组上调蛋白集中在补体与凝血级联、肌动蛋白细胞骨架的调节、血小板活化、吞噬体途径.Fn与冠心病密切相关且在血瘀证患者中下调.细胞实验发现各组NF-κB总蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05);与空白组比较模型组NF-κB 核位移增强,ICAM-1、VCAM-1、内皮素表达上调,PGI2 分泌下调(P<0.05);与模型组比较,Fn5 组、Fn10 组、Fn20 组NF-κB 核位移减弱,VCAM-1、ICAM-1、内皮素分泌下调(P<0.05),PGI2 分泌显著上调(P<0.05);与模型组比较,FnEC-KD 组NF-κB 核位移减弱,VCAM-1、ICAM-1、内皮素表达含量明显降低(P<0.05),PGI2 表达明显增加(P<0.05).结论 血浆Fn抑制内皮细胞活化和功能障碍,内皮细胞来源的Fn促进内皮细胞活化和功能障碍.

纤维蛋白原（Fbg）由肝脏合成及分泌，是血浆中浓度最高的凝血因子。纤维蛋白原是由三对多肽链（Aα、Bβ、γ）以二硫键连接而成的二聚体，三条肽链分别由位于4号染色体长臂的FGA、FGB和FGG三个基因编码 [1]。遗传性纤维蛋白原异常作为一种罕见的遗传性出血性疾病主要包括两种类型，一类为纤维蛋白原量的减少或缺乏，包括遗传性低纤维蛋白原血症和无纤维蛋白原血症。另一类则为纤维蛋白原的缺陷，包括遗传性异常纤维蛋白原血症（CD）和遗传性低异常纤维蛋白原血症，其中前者以纤维蛋白原活性（Fbg∶C）降低而抗原（Fbg∶Ag）水平正常为特征，后者纤维蛋白原活性和抗原均有下降但活性降低更为明显。CD和遗传性低异常纤维蛋白原血症患者在临床上既可能表现为出血，亦可能发生有血栓事件，甚至在同一患者上述两种表现共存 [1,2]。该类疾病患者的临床表现通常难以预测，目前仅有少数基因型与临床表型存在明确对应关系，因此对这些患者的管理极具挑战。本文中我们对一个首次报道的遗传性低异常纤维蛋白原血症家系的基因型及患者表型进行介绍。

目的:探讨血浆蛋白质组学在高原红细胞增多症（HAPC）诊断和发病机制研究中的应用价值。方法:选取2020年1月至2021年1月青海省人民医院10例HAPC患者为试验组，其中男4例，女6例，年龄（46±4）岁。筛选同期同海拔健康对照者10名为对照组，其中男5名，女5名，年龄（44±4）岁。运用高效液相色谱-质谱联用方法进行差异蛋白鉴定和定量，针对筛选出的差异蛋白进行基因本体（GO）功能富集分析、京都基因与基因组百科全书（KEGG）功能富集分析和互作网络分析。结果:试验组和对照组共筛选出有定量值的差异蛋白共117个，只在试验组有定量值的显著上调蛋白数为45个，只在对照组有定量值的显著下调蛋白数为40个，试验组与对照组均有定量值的差异表达蛋白为32个。与对照组比较，试验组32个差异表达蛋白中，11个表达下调，21个表达上调。GO功能富集分析结果显示，差异蛋白参与的生物学过程主要包括免疫反应、补体激活、蛋白级联激活、凝血系统；KEGG功能富集分析结果显示，差异蛋白参与的主要生化代谢途径和信号转导途径为轴突导向、溶酶体、细胞黏附分子、脂质和动脉粥样硬化、造血细胞谱系、胆固醇代谢；显著富集的结构域主要在免疫球蛋白样结构域、类EGF域、纤维连接蛋白Ⅲ型超家族、丝氨酸蛋白酶、Sushi/SCR/CCP超家族；差异蛋白互作分析结果显示，互作评分>700分，节点数最多的前10个差异蛋白分别为MPO、RPS27A、ARG1、GM2A、TIMP1、CRP、FABP5、HBB、S100A7、RHOA。结论:血浆蛋白质组学分析技术有助于识别在HAPC发展中的相关蛋白标志物，为HAPC的诊断及发病机制研究提供参考。

目的 探究连接蛋白 2(JP2)和成纤维细胞生长因子 23(FGF23)在房颤介导心肌病(AMC)兔中的表达规律.方法 通过左心房快速起搏法建立心房颤动(AF)模型,4 周后行超声心动图检查,射血分数下降＞10％纳入AMC组,否则为AF组,对照组只植入起搏器不起搏.最终成功建立AF动物模型 11 只,其中AF组 6 只,AMC组 5 只,对照组 6 只.超声心动图检测左室舒张末期内径(LVEDD)、左室收缩末期内径(LVESD)、左室射血分数(LVEF)等指标,酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清JP2 和FGF23 水平.处死动物后,取心房组织,Western blot和RT-qPCR检测JP2 和FGF23 蛋白及mRNA表达.结果 与对照组相比,AMC组左房内径、右房内径、右室内径增大,LVEF降低,与 AF 组相比,AMC 组 LVEF 降低,主动脉增宽,右室扩大.与对照组相比,AF 组左房心肌细胞 FGF23(P＜0.001)、JP2(P＜0.01)的表达均明显增加,而AMC组JP2 表达降低(P＜0.001).与AF组相比,AMC组FGF23和JP2 的表达下降.与对照组相比,AF组FGF23 和JP2 血浆浓度升高,AMC组FGF23 水平升高.与AF组相比,AMC组FGF23 和JP2 血浆浓度偏低.结论 在AMC兔模型中,FGF23 表达增加,JP2 表达下降.

目的 探讨血浆纤维连接蛋白(fibronectin,FN)与 131I治疗格雷夫斯甲亢(Graves'hyperthyroidism,GH)后早发甲状腺功能减退症的关系.方法 收集2020年1月-2022年1月广东药科大学附属第一医院接收的 131I治疗后随访1年的214例GH患者的临床资料,其中甲减组140例,无甲减组74例,比较两组间性别、年龄、血浆FN、甲状腺过氧化物酶抗体(thyroid peroxidase antibody,TPOAb)、甲状腺球蛋白抗体(thyroglobulin antibodies,TGAb)水平、131I治疗剂量间的差异.选取有差异的因素纳入logistic回归进一步分析及进行两两成对比较.结果 两组患者间性别、TPOAb、TGAb的分布差异无统计学意义(P>0.05);两组患者间的年龄、131I治疗剂量和血浆FN差异均有统计学意义(P<0.05);logistic回归分析中只有 131I治疗剂量和血浆FN与最终预测结果 相关(P<0.05),其OR值分别为0.896、1.005.两两比较中年龄为20～39岁组和40～59岁组间早发甲减发生率的差异有统计学意义(P<0.05);131I治疗剂量为203.5～351.5 MBq组和370～555 MBq组间早发甲减发生率的差异有统计学意义(P<0.05).结论 血浆FN是新发现的早发甲减的独立影响因素,治疗前血浆FN浓度高的患者更容易发生早发甲减,可作为临床制定治疗方案的参考.

目的 改进血浆冷沉淀提取方法,并用于提取患者血浆冷沉淀用于回输治疗.方法 取重型肝炎患者血浆200 mL,加入与血浆等量的无菌半饱和NaCl溶液,置-30℃冰冻48 h以上(或-80℃,6h).然后将冰冻血浆置4℃水浴溶化,4℃下500×g,离心10 min,弃上清留沉淀;在沉淀物中加ACD液重溶至20 mL,即为冷沉淀溶液.检测血浆和相应冷沉淀溶液中Na+、Cl-、纤维蛋白原(FIG)、纤维连接蛋白(Fn)、Ⅷ因子、PT、ATPP值.结果 冷沉淀溶液中Na+、Cl浓度比血浆中高2～3倍;FIG、Fn和Ⅷ因子含量分别比血浆中高7倍多和近9倍;冷沉淀溶液的PT、ATPP值均比血浆的值降低,但差异无统计学意义(P＞0.05).结论 盐析冻融法可用于提取肝炎患者血浆冷沉淀,但提取的冷沉淀需经适当稀释才可用于回输.

目的 对一个新的FGG基因杂合缺失突变导致异常纤维蛋白原血症家系进行表型和基因突变分析,探讨其分子发病机制.方法 收集2016年4月来温州医科大学附属第一医院就诊的先证者临床资料及其家系成员(共3代5人),采用凝固法检测血浆纤维蛋白原活性(Fg:C)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT);免疫比浊法检测纤维蛋白原抗原(Fg:Ag)、D-二聚体(D-D)和纤维蛋白(原)降解产物(FDPs)含量;抽提先证者及其家系成员外周血的基因组DNA,采用PCR扩增先证者纤维蛋白原的FGA、FGB及FGG基因所有外显子和侧翼序列,以及家系成员相应的突变位点区域,产物纯化后直接测序,同时采用克隆测序及非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳-银染色进一步验证;用ClustalX-2.1-win软件分析突变位点基因的保守性,并采用Pymol软件分析突变前后蛋白质空间结构及分子间作用力的改变.结果 先证者Fg:C明显下降,而Fg:Ag含量正常,分别为0.30 g/L和2.00 g/L(参考范围均为2.00~4.00 g/L);母亲及外婆Fg:C和Fg:Ag分别为0.42 g/L、2.09 g/L及0.47 g/L和2.42 g/L.基因分析发现先证者FGG基因8号外显子存在c.944_c.952 delCCTTTGATG杂合缺失突变,导致氨基酸289_291delAla,Phe,Asp,其母亲和外婆同样携带此突变,父亲和外公为正常野生型.同源性分析表明Ala289,Phe290,Asp291残基在同源物种间高度保守;蛋白模型分析发现在野生型FGG蛋白质中,Ala289分别与Gly287、Gly292及Thr371形成3个氢键,Phe290分别与Tyr262、Tyr278、His307及Asn308形成4个氢键,Asp291分别与Asp288及Lys302形成2个氢键,当Ala289、Phe290和Asp291发生缺失突变后,原有的氢键连接全部消失.结论 本研究发现了纤维蛋白原γ链289_291delAla,Phe,Asp杂合缺失突变会引起Fg分子空间结构重排,降低了结构稳定性,其与该家系引起异常纤维蛋白原血症有关.(中华检验医学杂志,2018, 41:305-311)

目的 分析早发型重症肌无力(EOMG)和迟发型重症肌无力(LOMG)患者的临床特点. 方法 回顾性研究,纳入157例重症肌无力(MG)患者,根据发病年龄分为年龄小于等于50岁为EOMG组85例,大于等于50岁为LOMG组72例.对两组患者的临床症状、肌无力分型、重复电刺激(RNS)、单纤维肌电图(SFEMG)、乙酰胆碱受体抗体(Ach R Ab)、肌肉特异性激酶抗体(MuSK Ab)、抗连接蛋白抗体(Titin Ab)和抗兰尼碱受体抗体(RyR Ab)及甲状腺功能、外科手术情况、胸腺病理、治疗方案进行分析. 结果 EOMG组和LO MG组患者平均起病年龄为(40.9±9.7)岁、(62.0±12.2)岁.LOMG组和EOMG组患者眼肌型[36例(50.0％)比28例(32.9％)]、全身型[36例(50.0％)比57例(67.1％)]、球部症状[30例(41.7％)比20例(23.5％)]差异有统计学意义(P＜0.05).两组患者RNS、SFEMG阳性率和Ach-R Ab(+)、MuSK Ab(+)和双抗体均阴性表达,差异无统计学意义(P＞0.05).EOMG组患者甲状腺功能异常率和外科胸腺手术比例均高于LOMG组患者(P＜0.05).激素、他克莫司和血浆置换EOMG组患者使用频率高于LOMG组患者(P＜0.05). 结论 EOMG和LOMG组患者在临床分型、甲状腺功能、纹状抗体表达情况、外科手术比例及免疫用药方面存在差异.

目的 观察大蒜素对慢性肾功能衰竭(chronic renal failure, CRF)模型大鼠肾组织纤维化的影响,探讨其作用机制.方法 采用腺嘌呤溶液(250 mg/kg)灌胃21 d的方法建立CRF大鼠模型.造模成功后,将80只模型大鼠采用随机数字表法分为模型组和大蒜素低、中、高剂量组,每组20只,另设正常对照组20只.大蒜素低、中、高剂量组分别灌胃大蒜素溶液2.5、5.0、10.0 mg/ml,模型组和正常对照组灌胃等体积生理盐水,按2 ml/kg大鼠体重给药,1次/d,连续给药28 d.末次给药后2 h,测定大鼠体重并计算肾脏指数;采用HE染色观察肾组织病理改变并进行评分;采用生化分析仪测定血清BUN、SCr、尿酸、24 h尿蛋白水平;采用ELISA法检测血清中CRP、IL-6、TNF-α水平及血浆中Ⅳ型胶原(collage typeⅣ, CⅣ)、Ⅲ型前胶原(Ⅲ procollagen, PCⅢ)、层黏连蛋白(laminin, LN)、纤维连接蛋白(fibronectin, FN)水平;采用免疫组化染色法观察肾组织Ⅰ型胶原(collage typeI, ColⅠ)、丝氨酸蛋白酶-1 (plasminogen activator Inhibitor-1, PAI-1)、MMP-1表达.结果 与模型组比较,大蒜素中、高剂量组大鼠体重升高,肾脏指数降低(P＜0.05或P＜0.01),肾组织病理学改变评分降低(P＜0.01);大蒜素中、高剂量组大鼠血清 BUN[(14.51 ± 2.76)mmol/L 、 (11.48 ± 2.43)mmol/L 比(24.07 ± 3.82)mmol/L] 、 SCr[(116.28 ± 27.35)μmol/L、(106.57±24.18)μmol/L比(134.89±35.02)μmol/L]、尿酸[(83.34±16.42)mmol/L、(77.86± 13.97)mmol/L比(114.76±16.53)mmol/L]、24 h尿蛋白[(152.79±48.43)mg、(137.03±42.61)mg比(177.94± 96.47)mg] 、 CRP[(8.79 ± 1.84)mg/L 、 (7.51 ± 1.69)mg/L 比(11.64 ± 1.95)mg/L] 、 TNF-α[(184.37 ± 24.15)ng/L、(126.82±12.96)ng/L 比(255.87±31.93)ng/L]水平降低(P＜0.05 或 P＜0.01);血浆 C-Ⅳ[(40.26±7.12)ng/ml、(23.79±4.25)ng/ml比(67.53±8.39)ng/ml]、PC-Ⅲ[(32.03±5.89)ng/ml、(24.31± 5.84)ng/ml 比(54.20 ± 7.08)ng/ml] 、 LN[(99.05 ± 38.17)ng/ml 、 (83.42 ± 28.83)ng/ml 比(117.83 ± 35.76)ng/ml]水平降低,FN[(98.58±21.43)mg/L、(125.96±25.12)mg/L比(66.72±13.09)mg/L]水平升高(P＜0.05或P＜0.01);大蒜素中、高剂量组肾组织Col Ⅰ[(0.17±0.03)、(0.09±0.03)比(0.27±0.05)]、PAI-1[(0.20±0.05)、(0.16±0.04)比(0.31±0.08)]表达下调,MMP-1[(0.10±0.03)、(0.22±0.05)比(0.04± 0.02)]表达上调(P＜0.05或P＜0.01).结论 大蒜素可抑制CRF大鼠肾组织纤维化,减轻炎症反应,保护肾组织.

[目的]观察大蒜素对慢性肾功能衰竭(CRF)大鼠炎症反应和肾脏组织纤维化的影响,探讨大蒜素对CRF大鼠的保护作用机制.[方法]采用腺嘌呤溶液250 mg/(kg·d)灌胃21 d的方法建立CRF动物模型,设模型组,大蒜素5、10、20 mg/(kg·d)组,每组20只,另设正常对照组20只,疗程28 d.测定血清肾功能指标,测定肾脏质量并计算肾脏指数,苏木精－伊红(HE)染色观察肾脏组织病理变化并进行病变评分.酶联免疫吸附(ELISA)法测定血清炎症因子含量水平,测定血清中及肾脏组织中纤维化指标.[结果]大蒜素10、20 mg/(kg·d)组能够显著降低CRF大鼠血清尿素氮(BUN)、肌酐(SCr)、尿酸(UA)含量和尿蛋白(Pro),降低肾脏质量及肾脏指数,明显改善肾脏组织病变、降低肾脏组织病变评分;降低CRF大鼠血清炎症因子C反应蛋白(CRP)、肿瘤坏死因子－α(TNF－α)含量且20 mg/(kg·d)组降低白介素－6(IL－6)含量,降低血浆层黏连蛋白(LN)、PC－Ⅲ、C－Ⅳ并提高血浆纤维连接蛋白(FN),下调I型胶原(Col I)、纤溶酶原激活物抑制物1(PAI－1)表达并上调基质金属蛋白酶－1(MMP－1);上述差异均具有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).[结论]大蒜素可能通过抑制炎症反应和肾脏组织纤维化而对CRF大鼠起到一定的保护作用.