目的:探讨氧化铜纳米酶对糖尿病小鼠全层皮肤缺损创面修复的作用及其机制。方法:(1)采用氯化铜与L-抗坏血酸反应的方法合成氧化铜纳米酶。采用透射电子显微镜观察氧化铜纳米酶大小和形貌，动态光散射粒度分析仪和纳米粒度电位仪分别分析其水合粒径和表面电位。(2)采用过氧化氢检测试剂盒、超氧阴离子检测试剂盒、3，3′，5，5′-四甲基联苯胺显色剂分别测定150 ng/mL氧化铜纳米酶的过氧化氢、超氧阴离子、羟自由基清除能力，计算过氧化氢、超氧阴离子、羟自由基清除比例(样本数均为3)。(3)将小鼠成纤维细胞系3T3细胞采用随机数字表法(分组方法下同)分为空白对照组、单纯过氧化氢组和过氧化氢＋氧化铜组，每组3孔。将终质量浓度25 ng/mL的氧化铜纳米酶加入过氧化氢＋氧化铜组细胞中预处理30 min。然后，在单纯过氧化氢组和过氧化氢＋氧化铜组细胞中各加入终物质的量浓度250 μmol/L过氧化氢，空白对照组常规培养。培养24 h后，采用2′，7′-二氯二氢荧光素二乙酸酯荧光探针检测细胞内活性氧水平(以绿色荧光强度表示)，细胞计数试剂盒8法检测并计算细胞存活率。(4)取10只6～8周龄雄性BALB/c小鼠(性别、鼠龄下同)，分为磷酸盐缓冲液(PBS)组与氧化铜组，每组5只。氧化铜组小鼠经尾静脉注射200 ng/mL的氧化铜纳米酶800 ng/kg，PBS组小鼠注射等体积的PBS。2组小鼠均每天注射1次，连续注射7 d。于第8天，取每组5只小鼠，采血行血细胞与血清生化分析，处死后收集心、肝、脾、肺和肾行苏木精-伊红(HE)染色后组织病理学观察。(5)取20只小鼠分为PBS组与氧化铜组，每组10只。采用链脲佐菌素及高糖高脂饮食法诱导糖尿病，并在其背部制作直径6 mm的全层皮肤缺损创面。伤后即刻，PBS组小鼠创面滴加20 μL PBS，氧化铜组小鼠创面滴加20 μL 200 ng/mL的氧化铜纳米酶，连续处理12 d。每组选定3只小鼠分别于伤后0(即刻)、3、6、9、12 d观察创面愈合情况，并计算创面未愈合面积。伤后6 d，每组取未行创面观察的3只小鼠，处死后酶联免疫吸附测定法测定创面组织中白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-6含量。伤后12 d，处死2组各剩余7只小鼠，行HE染色并观察创面新生上皮长度，行二氢乙锭荧光探针染色观察活性氧水平(以红色荧光强度表示)。对数据行单因素方差分析、重复测量方差分析、独立样本 t检验、Bonferroni检验。 结果:(1)制备的氧化铜纳米酶大小均匀，在干燥状态下平均直径为3.5～4.0 nm，水合粒径约为4.5 nm，表面电位为(-9.8±0.3)mV。综合判定，成功制备了氧化铜纳米酶。(2)氧化铜纳米酶分别处理2 h、10 min、5 min后，过氧化氢、超氧阴离子、羟自由基清除比例分别为(77±5)%、(45±5)%、(84±4)%。(3)培养24 h后，单纯过氧化氢组细胞内活性氧水平急剧增高，细胞形态异常且数量减少；过氧化氢＋氧化铜组细胞内活性氧水平明显降低，细胞形态与空白对照组相比无明显变化。单纯过氧化氢组细胞存活率明显低于空白对照组和过氧化氢＋氧化铜组( P<0.01)，而过氧化氢＋氧化铜组细胞存活率与空白对照组相近。(4)注射7 d后，PBS组和氧化铜组小鼠肝功能指标、肾功能指标、血细胞相关指标均相近；氧化铜组小鼠的心、肝、脾、肺和肾中，均未观察到组织坏死、充血或出血，与PBS组无明显差别。(5)氧化铜组小鼠创面相比PBS组表现出更快的愈合趋势，创面红肿情况较轻。氧化铜组小鼠伤后6、9、12 d创面未愈合面积分别为(28.8±1.9)、(17.6±3.8)、(10.4±1.8)mm 2，明显小于PBS组的(38.0±4.3)、(30.2±3.0)、(24.2±3.0)mm 2( t＝3.706、5.075、5.558， P<0.01)。伤后6 d，氧化铜组小鼠创面IL-1β、TNF-α、IL-6含量均明显低于PBS组( t＝6.115、11.762、11.725， P<0.01)。伤后12 d，氧化铜组小鼠创面新生上皮长度长于PBS组，创面组织活性氧水平明显低于PBS组。 结论:氧化铜纳米酶不仅具有良好的生物相容性，同时具有高效的活性氧清除活性，能够消除糖尿病小鼠全层皮肤缺损创面过量表达的活性氧，降低氧化应激、减轻炎症，促进创面修复。

目的:评估人工智能（AI）血细胞形态分析仪（AI阅片机）对外周血白细胞检测的性能。方法:多中心研究。（1）从全国11家三级医院收集3 010份静脉血标本，用AI阅片机进行14类白细胞分析，并且将预分类结果与资深形态学专家审核后结果进行比较，以此评估AI阅片机白细胞预分类的符合率、检出率、特异度和一致性。（2）从3 010份血液标本中选取400份血液标本（预分类人工审核后含异常白细胞的标本不少于50%），由形态学专家进行人工镜检并分析人工审核后的WBC分类结果和专家显微镜镜检结果之间的相关性。（3）从3 010份血液标本中找出诊断为淋巴瘤、急性淋巴细胞白血病、急性髓系白血病、骨髓增生异常综合征和骨髓增殖性肿瘤患者的标本结果，通过比较预分类和专家审核后结果，反映AI阅片机对这5种恶性血液病中具有重要临床意义的异常白细胞的预分类的能力。WBC预分类和专家审核结果的一致性分析采用Cohen′s Kappa 检验，比对试验采用Passing-Bablok回归分析，并根据公式统计符合率、检出率、特异度、准确度。结果:（1）AI阅片机可对14类白细胞及有核红细胞进行预分类，与形态学专家审核后结果对比，白细胞总的预分类符合率达97.97%，其中正常类型白细胞预分类符合率均>96%，总的异常白细胞预分类符合率>87%。（2）AI阅片机专家审核后结果与人工镜检对比，各种白细胞类型及有核红细胞均具有较好的相关性（中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、各阶段幼稚粒细胞、原始细胞、有核红细胞、恶性细胞均 r>0.90，反应性淋巴细胞 r=0.85），参考国际血液学复检专家组定义的白细胞阳性血涂片标准，AI阅片机对白细胞异常标本具有与人工镜检同等的筛查能力。（3）对5种恶性血液病中有较大意义的白细胞与形态学专家审核后结果进行对比，AI阅片机对原始细胞预分类符合率均>84%，检出率均>94%。在急性髓系白血病中，异常早幼粒细胞检出率为95.40%。 结论:AI阅片机对外周血中各类型白细胞的预分类结果与专家审核后结果的总体符合率和检出率均较高，与人工镜检结果具有良好的相关性，且为恶性血液疾病的筛查提供了高效的辅助检测手段。

目的:评价全自动数字图像分析（DIA）系统用于外周血细胞形态学分类计数的性能。方法:选取北京大学第一医院血常规检验外周血涂片379份，疟原虫感染外周血涂片18份，经瑞氏-姬姆萨染色，通过DIA系统完成白细胞（WBC）预分类（DIA直接分类）、再分类（DIA分类后人工审核），以及人工直接显微镜分类。分别计算DIA系统的批内及批间变异系数（ CV）进行重复性验证；以人工分类结果为金标准，计算DIA系统检测的灵敏度、特异度、正确率。并对其外周血原始细胞形态学计数、血小板（PLT）形态学计数及疟原虫形态学检查能力进行验证。 结果:除嗜酸粒细胞、嗜碱粒细胞外，DIA系统对正常样本WBC分类的 CV均<10%，异常样本WBC分类的 CV随所占百分比减低而增大；DIA系统进行WBC预分类的灵敏度、特异度和正确率分别为90.5%、99.2%和98.2%。触发原始细胞报警的血涂片经DIA系统预分类、再分类后，其结果均与人工分类结果具有相关性（ r=0.812、0.983，均 P<0.01）。DIA系统血小板形态学计数与血细胞分析仪计数结果具有相关性（ r=0.946， P<0.01）；两种方法计数血小板偏差绝对值<15%；血小板聚集及巨大血小板增多样本偏差绝对值均>15%。经DIA系统采集图像的18份疟原虫阳性外周血涂片，其中17份检出疟原虫滋养体，且图像清晰。 结论:DIA系统进行外周血分类计数的重复性较好，灵敏度、特异度和正确率较高；其预分类、再分类结果与人工分类结果具有相关性。

目的:探讨乳酸乳球菌温敏水凝胶对糖尿病小鼠全层皮肤缺损创面愈合的影响及其机制。方法:(1)按照菌与培养基体积比为1∶100用M17GS液体培养基培养约5×10 8集落形成单位/mL乳酸乳球菌(浓度下同)，分别于培养0(即刻)、2、4、6、8、10、12 h用酶标仪观测其生长情况。另取该菌菌落同前处理并于相同时间点收集培养基分离细菌培养上清液，用台式pH计测定pH值，并用L-乳酸检测分析试剂盒测定培养0(即刻)、2、4、8、12 h的L-乳酸浓度(样本数为3)。(2)将泊洛沙姆温敏聚合物与M17GS液体培养基按照质量与体积比为0.2 g∶1 mL充分混匀，制备单纯温敏水凝胶。按照菌与水凝胶体积比1∶100在单纯温敏水凝胶中加入乳酸乳球菌，充分混匀后制备乳酸乳球菌温敏水凝胶，分别在4、37 ℃孵育以及成胶后再4 ℃孵育观察其形态；通过流变仪测定乳酸乳球菌温敏水凝胶在10～40 ℃的储能模量与损耗模量，同时观察成胶温度；将乳酸乳球菌温敏水凝胶冷冻干燥后，通过扫描电子显微镜观察其表面及其中乳酸乳球菌的形态结构。(3)将小鼠巨噬细胞系Raw264.7细胞用终质量浓度分别为100、10 ng/mL内毒素/脂多糖与γ干扰素培养24 h刺激M1型极化，将细胞分为空白对照组(不做其他处理)、乳酸乳球菌温敏水凝胶组和乳酸组。乳酸乳球菌温敏水凝胶组细胞加入1 mL乳酸乳球菌温敏水凝胶，乳酸组细胞加入终物质的量浓度为30 mmol/L乳酸，37 ℃培养24 h后，通过实时荧光定量反转录PCR(RT-PCR)法检测M2型巨噬细胞标志物精氨酸酶1、CD206的mRNA表达量(样本数为3)，采用免疫荧光法检测精氨酸酶1和CD206的蛋白定位与表达。(4)取15只8～10周龄雌性BALB/c小鼠，通过链脲佐菌素联合高糖高脂饲料的方法诱导为糖尿病小鼠模型后，在每只小鼠背部制作直径6 mm全层皮肤缺损创面，采用随机数字表法将小鼠分为空白对照组(不做其他处理)、单纯温敏水凝胶组和乳酸乳球菌温敏水凝胶组，每组5只。水凝胶处理2组小鼠伤后即刻分别滴加200 μL相应水凝胶至创面，每天更换水凝胶。水凝胶处理2组小鼠处理0(即刻)、3、6、9、12 d后，观察创面愈合情况，测量创面面积；处理12 d后，取创面组织，行苏木精-伊红染色观察肉芽组织厚度，采用免疫荧光法观测CD206、M1型巨噬细胞标志物诱导型一氧化氮合酶(iNOS)阳性细胞。空白对照组小鼠于前述相同时间点进行相应观测。(5)取9只8～10周龄雌性BALB/c小鼠同实验(4)方法诱导糖尿病小鼠模型后，采用随机数字表法分为正常皮肤组(不做其他处理)、单纯创面组、乳酸乳球菌温敏水凝胶组，每组3只。单纯创面组与乳酸乳球菌温敏水凝胶组小鼠按照实验(4)方法制成全层皮肤缺损创面，前一组小鼠伤后不做其他处理，后一组小鼠伤后即刻滴加200 μL乳酸乳球菌温敏水凝胶至创面。水凝胶处理组小鼠处理1 d后，取创面组织，通过实时荧光定量RT-PCR法检测白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和核因子κB mRNA表达量；眼球取血后，通过全自动血细胞分析仪检测外周血白细胞计数、淋巴细胞计数和单核细胞计数，通过L-乳酸检测分析试剂盒测定血清L-乳酸浓度。于前述相同时间点，取正常皮肤组小鼠相应部位正常皮肤组织、单纯创面组小鼠创面组织及2组小鼠血液进行相应检测。对数据行单因素方差分析、重复测量方差分析、Tukey和Dunnett检验。 结果:(1)乳酸乳球菌于培养约6 h生长达到平台期。乳酸乳球菌培养上清液中，pH值逐渐降低，至培养8 h下降至最低值4.9左右；L-乳酸浓度逐渐升高，至培养8 h达到最高值约70 mmol/L。(2)乳酸乳球菌温敏水凝胶在4 ℃为液体溶胶态，在37 ℃为固体凝胶态，成胶后于4 ℃孵育后再次变为液体溶胶态；成胶温度约为25 ℃，成胶后储能模量约为3 000 Pa、损耗模量约为1 000 Pa。扫描电子显微镜下可见，乳酸乳球菌温敏水凝胶为疏松三维多孔结构，乳酸乳球菌为椭球形并被包裹在水凝胶内部。(3)培养24 h，与空白对照组比较，乳酸乳球菌温敏水凝胶组、乳酸组巨噬细胞中精氨酸酶1表达量显著升高( q＝11.620、15.250， P<0.01)、CD206 mRNA表达量显著升高( q＝16.770、19.030， P<0.01)，定位于细胞膜的CD206蛋白和定位于细胞质的精氨酸酶1蛋白表达明显升高；乳酸组巨噬细胞中精氨酸酶1、CD206 mRNA表达量与乳酸乳球菌温敏水凝胶组相近( q＝3.629、2.259， P>0.05)。(4)处理3～12 d后，与空白对照组和单纯温敏水凝胶组比较，乳酸乳球菌温敏水凝胶组小鼠创面愈合速度更快，创面面积明显缩小，创缘炎症减轻。乳酸乳球菌温敏水凝胶组小鼠处理3、6、9、12 d后创面面积[(25.8±5.9)、(21.2±4.6)、(16.0±2.4)、(8.4±2.4)mm 2]较空白对照组[(31.8±5.3)、(28.0±3.4)、(22.6±3.7)、(17.0±1.0)mm 2]显著缩小( q＝3.506、3.973、3.856、5.025， P<0.05或 P<0.01)，处理3、6 d后创面面积较单纯温敏水凝胶组显著缩小( q＝3.739、3.739， P<0.05)。处理12 d后，与空白对照组和单纯温敏水凝胶组比较，乳酸乳球菌温敏水凝胶组小鼠创面肉芽组织更厚，创面组织中iNOS阳性细胞明显减少且CD206阳性细胞明显增多。(5)处理1 d后，单纯创面组小鼠创面组织中IL-1β、TNF-α和核因子κB mRNA表达量显著高于正常皮肤组小鼠正常皮肤组织( q＝9.253、4.819、6.020， P<0.01)，与乳酸乳球菌温敏水凝胶组相近( q＝2.850、2.735、2.556， P>0.05)；单纯创面组小鼠外周血白细胞计数、淋巴细胞计数与单核细胞计数显著高于正常皮肤组( q＝3.523、5.373、5.279， P<0.05或 P<0.01)，与乳酸乳球菌温敏水凝胶组相近( q＝0.621、1.240、1.293， P>0.05)；3组小鼠血清L-乳酸浓度均保持在正常范围内且组间总体比较差异无统计学意义( F＝4.095， P>0.05)。 结论:乳酸乳球菌温敏水凝胶在糖尿病全层皮肤缺损小鼠创面局部使用安全，能够通过原位生产投递乳酸，促进巨噬细胞从M1型向M2型极化，重塑创面愈合微环境，促进创面的高效愈合。

血细胞形态学检查是血细胞分析的重要复检手段，也是以细胞病变为病理改变的血液病诊断的基础。人工智能辅助血细胞形态学检查可有效弥补人工显微镜检查方法的不足，极大提高细胞形态学检验的工作效率，很大程度上解决人力不足和劳动强度的问题，明显提高检验结果的重复性，便于检验结果的审核及复检，可以实现远程在线血细胞形态学检验和诊断等。但我国目前血细胞形态学检查方法仍是以人工显微镜检查为主要方法，为促进和拓展人工智能辅助血细胞形态学检查的临床应用，自动化血细胞形态分析仪研发生产商及临床检验专家应共同致力于推动自动化血细胞形态学分析的标准化，加强其性能评价及验证，不断提高其分析性能，拓展其临床应用范围，推进我国血细胞形态学数据库的建设。

目的:自行拟定竹叶青属毒蛇咬伤诊断标准，并探讨覆盖式负压封闭引流（VSD）技术用于竹叶青属毒蛇咬伤的临床治疗效果及作用机制。方法:参照《中国蛇伤急救学》《中国蛇类》中有关内容制定广西竹叶青属毒蛇咬伤诊断标准：①肇事蛇为广西竹叶青属毒蛇；②患者所述蛇的外观形态基本符合广西竹叶青属毒蛇特征；③具备血液毒临床表现，即局部肿胀、伤口剧烈疼痛、部分患者出现皮下瘀斑。具备①或同时具备②和③即可诊断。选择2016年1月至2020年1月桂中桂北蛇伤救治基地/柳州市中西医结合蛇伤救治中心收治的广西竹叶青属毒蛇咬伤患者作为观察对象。将患者分为普通治疗组和覆盖式VSD技术组，每组60例。普通治疗组给予抗蛇毒血清、抗破伤风、伤口周边局封、抗炎、硫酸镁纱布外敷患肢、对症支持治疗等处理；覆盖式VSD技术组在普通治疗组基础上运用覆盖式VSD技术。两组从入院治疗次日开始计算周期，治疗周期均为7 d。在治疗周期中，每日08：00取血后采用全自动血细胞分析仪检测红细胞计数（RBC）和血红蛋白（Hb），全自动血凝分析仪检测凝血酶原时间（PT）、活化部分凝血活酶时间（APTT）、纤维蛋白原（Fib），并记录患肢肿胀程度及皮下瘀斑出现情况。结果:在治疗周期不同时间点，覆盖式VSD技术组与普通治疗组PT、APTT、Fib动态变化趋势差异均有统计学意义，两组Fib于第1～4天均有下降，第5天开始逐步回升，第4天覆盖式VSD技术组Fib最低值高于普通治疗组（g/L：0.70±0.03比0.41±0.01， P<0.05）；两组PT在治疗周期前中期均有上升，后期回落，第5天覆盖式VSD技术组PT峰值明显低于普通治疗组（s：25.2±0.1比35.4±0.2， P<0.05），且第7天覆盖式VSD技术组PT恢复至正常范围，普通治疗组仍异常；两组APTT在治疗周期一开始均增高并逐渐回落，第3天覆盖式VSD技术组APTT峰值低于普通治疗组（s：47.3±0.1比55.7±0.2， P<0.05），其上升与下降速率也较普通治疗组平缓。而两组间RBC、Hb变化比较差异无统计学意义。随着时间的推移，两组患者患肢肿胀程度均有不同程度地缓解，覆盖式VSD技术组缓解程度较普通治疗组更为明显，组间差异有统计学意义（ χ2＝86.060， P＝0.000）；且覆盖式VSD技术组皮下瘀斑出现率明显低于普通治疗组（13.3%比40.0%， χ2＝10.909， P＝0.002）。 结论:将覆盖式VSD技术用于广西竹叶青属毒蛇咬伤并不加重出血，在有利于患肢消肿的同时还能促进凝血功能恢复，能更好地控制凝血功能障碍所致的不良事件发生。

目的 明确腹腔感染耐药菌小鼠的半数致死浓度(LC50)和绝对致死浓度(LC100),探讨R-(+)-长叶薄荷酮对腹腔感染耐药菌小鼠的抗炎作用.方法 随机将小鼠分为正常对照组(NC组)、耐药菌株感染模型组(Mod-el组)、R-(+)-长叶薄荷酮组(PU组,20 mg/kg)、头孢克肟组(CFM组,26 mg/kg),每组10只;除NC组外,其他试验组进行干预,连续3 d,1次/d,Model组按照20 ml/kg经口灌胃食用油,PU组、CFM组分别给予等体积的R-(+)-长叶薄荷酮、头孢克肟,第3天给药后1 h,腹腔注射耐药大肠埃希菌(10 ml/kg),观察24、48 h后收集小鼠眼眶血、腹腔冲洗液、腹膜组织;采用全自动细胞分析仪进行血液、腹腔冲洗液的白细胞计数;瑞氏-吉姆萨染色观察血细胞形态变化;苏木精-伊红(HE)染色法观察腹腔组织病理形态变化.结果 腹腔感染耐药菌小鼠的LC50和LC100分别是1.50× 108 CFU/ml、2.25× 108 CFU/ml;与NC组相比,Model组小鼠腹腔内存在弥漫性炎症,腹腔充血、水肿;而PU组、CFM组小鼠腹腔内炎症、充血、水肿程度较Model组不明显;眼眶血白细胞计数表明PU组较NC组有所降低,较Model组、CFM组无统计学差异;腹腔冲洗液白细胞计数PU组低于Model组,较NC组增高,较CFM组无统计学差异,表明R-(+)-长叶薄荷酮对腹腔感染耐药菌小鼠具有抗炎作用(P＜0.05);HE结果显示,PU组、CFM组腹膜组织结构完整,间皮细胞排列整齐,腹膜组织间质较NC组可见少量淋巴细胞浸润,相对于Model组腹膜组织结构更加完整,淋巴细胞浸润较少,表明R-(+)-长叶薄荷酮对腹腔耐药菌的感染具有显著的抗感染保护作用.结论 R-(+)-长叶薄荷酮对腹腔感染耐药菌小鼠具有一定抗炎作用,为R-(+)-长叶薄荷酮抗感染药理作用机制的探索提供一定的研究基础.

目的 研究五子衍宗丸对环磷酰胺造成的骨髓抑制小鼠的骨髓造血干细胞向巨核系分化的影响.方法 通过对C57BL/6J小鼠ip环磷酰胺构建化疗引起的骨髓抑制模型.根据随机数字表法将小鼠分为对照组、模型组及五子衍宗丸 4、8、16 g/kg组,每组 10 只.于首次注射环磷酰胺后即开始进行药物干预,对照组ig生理盐水;五子衍宗丸组分别ig 4、8、16 g/kg五子衍宗丸溶液,持续给药 3 周.实验第1、7、14、21 天称体质量,眼眶取血,并吸取 20 μL溶于血细胞检测仪用稀释液,全自动血细胞分析仪检测血细胞计数.股骨苏木精-伊红(HE)染色观察巨核细胞形态及数量,流式细胞法检测骨髓造血干、祖细胞数,并分选巨核细胞,测定巨核细胞多倍体情况.结果 五子衍宗丸能够明显提升化疗骨髓抑制小鼠的外周血小板数,剂量下相关性促进造血干细胞向巨核系逐步分化,促进巨核细胞多倍体形成(P＜0.05).结论 五子衍宗丸可一定程度恢复环磷酰胺造成的骨髓巨核系损伤,促进骨髓造血系统向巨核系分化,提高内源性血小板的产生.

目的 探讨人脐带间充质干细胞外泌体对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠肺部炎症的作用及机制.方法 将18只SD雄性大鼠随机分为Control组、COPD组、COPD+Exo组,每组6只;COPD组、COPD+Exo组大鼠采用香烟烟熏+脂多糖(LPS)雾化吸入的方法建立COPD大鼠模型,COPD+Exo组经尾静脉注射100μL人脐带间充质干细胞外泌体稀释液(含2×107个外泌体),Control组和COPD组注射等量的磷酸盐缓冲液.干预后1周处死大鼠,收集外周血、肺泡灌洗液(BALF)和肺组织.HE染色观察大鼠肺组织病理改变,全自动血细胞分析仪计数外周血炎性细胞数目,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测BALF和血清中白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α水平,qRT-PCR检测肺组织中IL-1β、IL-6、TNF-α mRNA的表达,Western blot检测肺组织中Toll样受体4(TLR4)、磷酸化核因子κB(p-NF-κB p65)和核因子抑制蛋白(IκBα)的表达.结果 Control组大鼠肺泡结构完整、形态规则;COPD组大鼠肺泡结构紊乱,部分肺泡不规则扩张、融合成肺大疱甚至破裂,肺泡间隔增宽且可见较多炎性细胞浸润.与COPD组比较,COPD+Exo组大鼠肺泡结构较完整,肺泡间隔炎性细胞浸润减少,外周血中炎性细胞减少,BALF、血清及肺组织中IL-1β、IL-6、TNF-α表达水平降低(P＜0.05);肺组织TLR4、IκBα蛋白表达水平升高,p-NF-κB p65表达水平降低(P＜0.05).结论 人脐带间充质干细胞外泌体通过调控TLR4/核因子κB(NF-κB)信号通路减轻COPD大鼠的肺部炎症,从而发挥肺保护作用.

目的:从对肠道短链脂肪酸(SCFAs)的调控角度探讨艾灸改善哮喘炎性反应的可能作用机制.方法:48只SD大鼠随机分为正常组、模型组、从肺论治组和肺肠同治组,每组 12只.采用卵清白蛋白(OVA)致敏和雾化激发法制备哮喘大鼠模型.从肺论治组艾灸大鼠双侧"肺俞"30 min;肺肠同治组艾灸大鼠双侧"肺俞""天枢"共30 min.模型组、从肺论治组、肺肠同治组大鼠上述干预结束1 h后,分别予以1%OVA溶液雾化20 min,均每天1次,连续14 d.同血细胞分析仪检测外周血中炎性细胞百分比,HE染色法观察肺组织病理形态学改变,瑞氏-吉姆萨染色法计数肺泡灌洗液(BALF)中炎性细胞,实时荧光定量PCR法检测肺组织中白细胞介素(IL)-4、IL-5、IL-13、IL-17、IL-33、前列腺素D2(PGD2)、胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)和白三烯(LT)mRNA的表达,气相色谱-质谱联用法检测粪便中SCFAs的含量.结果:与正常组相比,模型组大鼠肺组织结构重度异常,肺泡壁增厚,支气管周围可见大量炎性细胞浸润;外周血中性粒细胞、淋巴细胞、嗜酸性粒细胞百分比,BALF中嗜酸性粒细胞、中性粒细胞百分比,肺组织中IL-4、IL-5、IL-13、IL-17、IL-33、PGD2、TSLP、LT的mRNA表达均显著升高(P<0.01,P<0.05);粪便中乙酸、丙酸、异丁酸、丁酸、戊酸的含量均显著降低(P<0.05,P<0.01).与模型组相比,从肺论治组和肺肠同治组大鼠肺组织病理形态学损伤均显著改善;外周血中性粒细胞和淋巴细胞百分比,BALF中嗜酸性粒细胞百分比,肺组织中IL-4、IL-17、IL-33、PGD2、TSLP、LT的mRNA表达均显著降低(P<0.01,P<0.05);粪便中乙酸、丙酸、戊酸的含量均显著升高(P<0.05,P<0.01).除此之外,与模型组相比,肺肠同治组大鼠BALF中中性粒细胞百分比,肺组织中IL-5、IL-13的mRNA表达也均显著降低(P<0.05,P<0.01),粪便中异丁酸、丁酸含量也均显著升高(P<0.05,P<0.01).与从肺论治组相比,肺肠同治组大鼠肺组织中IL-5、LT的mRNA表达均显著降低(P<0.01,P<0.05),粪便中丙酸含量显著升高(P<0.05).结论:艾灸"肺肠同治"可以更好地调节肠道SCFAs的含量,缓解哮喘模型大鼠炎性反应;肠道SCFAs可能参与了艾灸改善哮喘大鼠炎性反应的作用过程.