目的 基于HPLC指纹图谱技术和统计学分析方法,比较和评价常山柚橙Citrus aurantium'Changshan-huyou'未成熟的干燥果实(衢枳壳)与不同栽培变种酸橙间质量的一致性与差异性.方法 使用Extend XDB C18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),检测波长330nm,以乙腈-0.1％甲酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,体积流量1.0mL/min,柱温为30 ℃.通过聚类分析(cluster analysis,CA)和主成分分析(principal component analysis,PCA)对35批样品的指纹图谱进行评价.结果 建立的酸橙枳壳的指纹图谱共有模式获得24个共有峰,并指认出12个目标化合物.13批衢枳壳样品的相似度结果范围0.920～0.947,质量一致性好,不同基原枳壳相似度结果为0.127～0.990,质量差异大.CA将衢枳壳均与酸橙枳壳聚为一类,朱栾和部分黄皮酸橙单独聚为一类,结合PCA获得区分不同基原枳壳的差异性标志物,其中9个已知化合物分别为葡萄内酯水合物、川陈皮素、柚皮苷、桔皮素、木犀草素、新橙皮苷、芸香柚皮苷、橙皮苷、柚皮素.结论 研究表明衢枳壳的化学成分与酸橙枳壳相似度高,且药材质量一致性好,药材质量优于朱栾和塘橙,推荐作为《中国药典》的枳壳植物基原之一.同时应增加区分不同基原枳壳的关键化合物作为指标成分,以全面准确的评价和控制枳壳药材质量.

目的 以入血成分为研究对象,基于网络药理学探究衢枳壳对糖尿病起效的物质基础及作用机制.方法 采用高效液相色谱串联四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱(high-performance liquid chromatography tandem quadrupole-electrostatic field orbitrap high resolution mass spectrometry,HPLC-Q-Exactive Orbitrap MS/MS)对衢枳壳入血成分进行鉴定,在此基础上通过 Swiss Target Prediction与SuperPred数据库预测入血成分作用靶点,同时在OMIM,GeneCards等数据库获取糖尿病靶点.采用Cytoscape 3.9.1绘制中药衢枳壳"活性成分-靶点-疾病"网络关系图,利用String数据分析平台进行蛋白互作(protein-protein interaction,PPI)网络分析,筛选关键靶点.通过DAVID数据库对关键靶点进行基因本体功能(gene ontology,GO)和京都基因与基因组百科全书(kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)通路富集分析.应用Autodock 1.5.7软件进行分子对接验证.结果 共鉴定衢枳壳入血成分20个,筛选出潜在靶点170个,核心靶点32个.GO功能富集和KEGG信号通路分析结果显示缺氧诱导因子(hypoxia-inducible factor,HIF)-1信号通路、晚期糖基化终末产物(advanced glycation end products,AGE)-晚期糖基化终产物受体(receptor for advanced glycation end products,RAGE)信号通路、表皮生长因子(epidermal growth factor receptor,EGFR)信号通路、癌症蛋白聚糖通路等为衢枳壳降糖的关键通路,丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(RAC serine/threonine-protein kinase,AKT)1、白蛋白(albumin,ALB)、细胞肿瘤抗原p53(cellular tumor antigenp 53,TP53)、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)、EGFR为其中关键靶点,且衢枳壳中5个活性成分与核心靶点经分子对接后的结合活性较好.结论 衢枳壳中的芦丁、新橙皮苷、橙皮苷、芸香柚皮苷、川陈皮素等可能为衢枳壳降糖的物质基础,可能是通过调控HIF-1、AGE-RAGE、EGFR等信号通路及AKT1、ALB、TP53 等核心基因发挥降糖作用.

衢枳壳作为浙江地区道地中药材,在2018年入选新"浙八味"中药材培育品种后,其药理作用得到愈来愈多的关注.研究发现,衢枳壳及其活性成分具有抗炎、平喘、降血糖、保肝、抗氧化、降血脂、调节肠道菌群、抑菌和免疫调节等多种药理作用,具有良好的药用开发前景.本研究归纳总结了衢枳壳及其主要化学成分的药理作用和机制研究进展,为衢枳壳的进一步药用开发利用提供参考.

目的 建立HPLC同时测定衢枳壳中芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、木犀草素、川陈皮素和桔皮素含量.方法 采用Agilent Extend C18(4.6 mm×250 mm,5 μm)色谱柱,检测波长:330 nm,以乙腈-0.1％甲酸溶液为流动相,梯度洗脱,流速:1mL·min-1,柱温:30℃.结果 芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、木犀草素、川陈皮素、桔皮素分别在23.30～1 164.80 ng,170.84～8 541.91 ng,17.22～861.20 ng,156.17～7 808.64 ng,3.13～156.48 ng,0.90～45.23 ng,0.85～42.27 ng内线性关系良好(r≥0.999 5,n＝6),平均回收率分别为98.8％,101.3％,98.3％,96.8％,101.8％,101.7％,108.9％.结论 首次建立了衢枳壳中7个成分HPLC含量测定方法,该方法简便,结果准确,可为综合评价衢枳壳质量提供依据.

目的 建立衢枳壳的HPLC指纹图谱方法, 并联合聚类分析技术, 评价衢枳壳的质量.方法 色谱柱采用Extend XDB C18 (250 mm×4.6 mm, 5μm), 以乙腈-0.1％甲酸溶液为流动相进行梯度洗脱, 检测波长为330 nm, 柱温为30℃, 流速为1.0 m L·min-1.结果 通过11批衢枳壳样品建立了对照指纹图谱, 得到19个共有峰, 利用多级质谱信息, 结合对照品和文献对9个共有峰进行指认, 同时采用相似度分析和系统聚类分析方法对指纹图谱数据进行模式识别研究.衢枳壳相似度结果为0.995～1.000, 并聚为一类, 说明其质量较为一致, 而其他混淆品差异性较大, 另聚为一类.结论 该方法简便、快速, 专属性强, 可以有效地评价衢枳壳的质量.

中药材枳壳的基原植物来源复杂,对生长环境要求苛刻.为厘清药材标准收载与商品流通使用的枳壳基原植物种类及其地理分布规律,该研究收集查找了国家和地方药材标准,调查了枳壳产地和商品流通使用情况,分析研究枳壳生长环境及地理分布规律.结果《中国药典》及浙江、云南、贵州等6个地方标准收载枳壳基原植物共10种(含栽培变种,下同).实际商品有川枳壳、湘枳壳、江枳壳、衢枳壳、苏枳壳和温枳壳6大类,主要基原植物达19种.共有四川盆地、洞庭湖平原、鄱阳湖平原、金衢盆地及其周边丘陵四大产区,均位于东经104°-121°,北纬27°-31°.枳壳实际商品与标准收载基原有一定区别,建议将质量优良的传统主流品种收载进入《中国药典》,质次的淘汰出《中国药典》.

目的:研究衢枳壳中橙皮苷的提取工艺.方法:根据Box-Behnken Design (BBD)设计试验,采用遗传神经网络模型对橙皮苷的提取工艺条件与目标产物进行建模,并对其工艺条件进行目标寻优.结果:经交叉验证后,选取3个隐层神经元,平均预测误差和平均拟合误差分别为0.6081％和0.0666％,均小于5％.优化隐层神经元个数后,对衢枳壳中橙皮苷提取工艺进行寻优,最终得到的最佳提取条件为:纯水提取,液料比为25∶1(mL/g),粒径为20目,提取时间为105 min.此条件下,橙皮苷得率预测值为4.769％,试验测量值为4.953％,相对误差为0.2226％.结论:遗传神经网络优化衢枳壳中橙皮苷提取工艺的方法有效,相对误差较小,弥补了多元回归模型的不足,可为实现中药有效成分目标寻优提供参考.

目的:研究衢枳壳黄酮组分(the flavonoids from Quzhiqiao,TFQ)对脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)诱导的RAW264.7细胞的抗炎作用机制.方法:LPS(1 mg·L-1)诱导RAW264.7细胞建立细胞炎症模型.四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测不同浓度TFQ对RAW264.7细胞活性的影响,RT-PCR法检测细胞炎性因子肿瘤坏死因子 α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)和白细胞介素1β(IL-1β)mRNA表达情况,Western blot法和免疫荧光法分别检测细胞核因子-κB(NF-κB p65)表达情况和入核情况.结果:TFQ在10～100 mg·L-1时,对RAW264.7细胞活性无影响.RT-PCR结果表明,TFQ能够降低LPS诱导的RAW264.7细胞炎性因子TNF-α、IL-6和IL-1β 表达,以TFQ 100 mg·L-1作用显著(P<0.05);Western blot法和免疫荧光结果表明,TFQ能够显著抑制p65蛋白表达与入核.结论:TFQ具有抑制LPS诱导的RAW264.7细胞炎症反应的作用,其机制可能与抑制p65活化减少炎性因子表达有关.

目的:建立同时测定衢枳壳中12种黄酮类成分含量的方法.方法:采用高效液相色谱法.色谱柱为Agilent Extend C18,流动相为0.1％甲酸水溶液-乙腈溶液(梯度洗脱),流速为1.0 mL/min,柱温为35℃,检测波长为330 nm,进样量为10μL.测定不同采集地的10批衢枳壳样品中12种黄酮类成分(圣草次苷、芸香柚皮苷、柚皮苷、柚皮素、橙皮苷、新橙皮苷、水合橙皮内酯、木犀草素、橙皮内酯、川陈皮素、桔皮素、橙皮油内酯)的含量.结果:圣草次苷、芸香柚皮苷、柚皮苷、柚皮素、橙皮苷、新橙皮苷、水合橙皮内酯、木犀草素、橙皮内酯、川陈皮素、桔皮素、橙皮油内酯检测的质量浓度线性范围分别为1.65～16.51、4.50～45.02、35.41～354.12、4.11～41.12、2.29～22.86、34.96～349.56、1.42～14.15、1.50～15.04、1.83～18.28、1.51～15.08、1.61～16.12、1.28～12.84μg/mL(r均大于0.9997);检测限分别为0.1651、0.4502、3.5412、0.4112、0.2286、3.4956、0.1415、0.1504、0.1828、0.1508、0.1612、0.1284μg/mL;定量限分别为0.5478、1.4874、11.6633、1.3603、0.7583、11.5949、0.4663、0.4971、0.6012、0.4999、0.5323、0.4246μg/mL;精密度(n=6)、重复性(n=6)、稳定性(24 h,n=7)试验的RSD均小于3％;平均加样回收率分别为99.50％、99.61％、98.18％、98.85％、98.48％、98.50％、98.25％、99.91％、103.13％、98.82％、98.44％、100.29％(RSD=1.49％～2.38％,n=6).10批不同采集地衢枳壳样品中,上述12个成分的含量分别为1.9955～2.6488、4.3177～5.0051、33.2155～34.0546、3.1404～3.4715、3.2212～3.7488、42.7466～44.0266、0.2027～0.2394、0.1912～0.2088、0.0803～0.0979、0.2919～0.3071、0.1199～0.1491、0.0827～0.0898 mg/g.结论:建立的含量测定方法准确、可靠、简便、高效,可用于同时测定衢枳壳中12个黄酮类成分的含量,并为衢枳壳质量控制标准的建立提供了参考依据.

目的 厘清中药材衢枳壳基源植物的起源,解决衢枳壳基源植物起源的争议,根据各种文献使用的不同名称,确定科学的中文名和拉丁学名正名.方法 对衢枳壳形态、栽培历史和抗寒基因特性进行调查研究,对PCR扩增、化学成分和基因片段测序等方面进行文献考证.结果 衢枳壳基源植物的形态、PCR扩增结果和ITS1测序结果均与柚和酸橙非常相似或相同,而化学成分和抗寒基因特性与酸橙十分相近.结论 衢枳壳的基源植物系柚和酸橙的自然杂交栽培变种,不具备独立种的地位,其拉丁学名应为Citrus aurantium'Changshan-huyou',中文名宜为常山柚橙,常山胡柚和胡柚可作为别名.