目的:评价补肺益肾组分方Ⅲ（ECC-BYFⅢ）阻抑慢性阻塞性肺疾病（COPD）黏液高分泌的配伍特点。方法:将ECC-BYFⅢ组分按原方药物功效分成补气（人参皂苷Rh1+黄芪甲苷）、补肾（淫羊藿苷）、化痰（川陈皮素）、活血（丹皮酚）4组，按数学排列组合的方法将其分为不同组分配伍组（14组）。①按随机数字表法将大鼠分为对照组、模型组、ECC-BYFⅢ及不同组分配伍组，共17组。采用香烟烟雾暴露联合反复细菌感染的方法复制COPD稳定期大鼠模型。于制模第9周开始给予相应的药物灌胃，16周结束后取材。用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清及支气管肺泡灌洗液（BALF）中基质金属蛋白酶9（MMP-9）、基质金属蛋白酶抑制剂1（TIMP-1）水平，以及肺组织和BALF中黏蛋白（MUC）5AC水平。②将人肺上皮细胞BEAS-2B分为空白组、模型组、ECC-BYFⅢ及不同组分配伍组。于相应药物预处理后4 h建立缺氧诱导的BEAS-2B细胞黏液高分泌模型。采用定量聚合酶链反应（PCR）检测MUC5AC、MUC5B、MUC1的mRNA表达。采用Region（R）值综合评价法评价大鼠及BEAS-2B细胞黏液分泌指标。结果:①与对照组比较，模型组大鼠血清及BALF中MMP-9显著升高，TIMP-1水平显著降低；肺组织及BALF中MUC5AC显著升高。R值综合评价结果显示，除补气组和补肾组外，ECC-BYFⅢ及其组分配伍均能显著纠正COPD大鼠黏液高分泌，以ECC-BYFⅢ、补肾祛邪、扶正化痰、祛邪组分配伍效果较优（R值分别为2.15±0.42、2.11±0.23、2.16±0.23、2.16±0.55），与模型组（R值：3.00±0.00）比较差异均有统计学意义（均 P<0.05）。②与空白组比较，模型组细胞MUC5AC、MUC5B、MUC1的mRNA表达均升高；但不同组分配伍对BEAS-2B细胞黏液分泌没有明显的作用特点。③综合体内外实验，R值综合评价结果显示，ECC-BYFⅢ及其活血、祛邪、补肾活血、扶正化痰、补气祛邪组分配伍可显著纠正COPD黏液高分泌状态（R值分别为2.30±0.43、2.33±0.44、2.12±0.68、2.27±0.64、2.24±0.27、2.29±0.47），与模型组（R值：3.00±0.00）比较差异均有统计学意义（均 P<0.01）；其作用强度为：祛邪>扶正化痰>补肾活血>补气祛邪>ECC-BYFⅢ>活血。 结论:ECC-BYFⅢ组分配伍对COPD黏液分泌相关指标效应不同，含化痰（川陈皮素）或活血（丹皮酚）的组分配伍抑制黏液分泌效果较好。

背景 慢性阻塞性肺疾病(COPD)是重大慢性疾病,气道重塑是其重要病理机制.补肺益肾方对COPD疗效较好,其有效成分组成的补肺益肾组分方Ⅲ(ECC-BYF Ⅲ)与之疗效相当,可显著改善COPD模型大鼠气道重塑,但其组分配伍规律尚待揭示.目的 基于COPD大鼠模型评价ECC-BYF Ⅲ及其组分配伍对COPD气道重塑的干预作用.方法 将ECC-BYF Ⅲ组分分成补气、补肾、化痰、活血 4 类,按数学排列组合的方法将其分成不同的组分配伍组.2018 年 5-9 月进行动物实验.将 216 只SD大鼠随机分为正常、模型、ECC-BYF Ⅲ、不同组分配伍及氨茶碱组,共 18 组,每组 12 只.第 1～8 周,采用香烟烟雾暴露联合反复细菌感染的方法制备COPD稳定期大鼠模型(正常组除外);第 9～16 周,给予相应的药物干预.苏木素-伊红(HE)染色技术观察气道壁及气道平滑肌变化;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清中基质金属蛋白酶 12(MMP-12)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)及支气管肺泡灌洗液(BALF)中胶原蛋白(COL)-1、COL-3、MMP-12 等气道重塑相关指标水平.Region(R)值综合评价各组分配伍对COPD大鼠气道重塑的干预作用.结果 与模型组比较,ECC-BYF Ⅲ及其组分配伍、氨茶碱组大鼠气道壁厚度均降低,ECC-BYF Ⅲ组、补气化痰组、扶正化痰组、扶正活血组、补气祛邪组、氨茶碱组大鼠平均气道平滑肌细胞数减少(P<0.05).与模型组比较,ECC-BYF Ⅲ组、补肾组、补气化痰组、补气活血组、补肾化痰组、补肾活血组血清bFGF水平降低,ECC-BYF Ⅲ组、扶正组血清MMP-12 水平降低,ECC-BYF Ⅲ及其组分配伍、氨茶碱组BALF MMP-12、BALF COL-1 水平均降低,ECC-BYF Ⅲ组、补肾组、化痰组、活血组、扶正组、补气化痰组、补气活血组、补肾活血组、扶正化痰组、补气祛邪组、补肾祛邪组及氨茶碱组BALF COL-3 水平均降低(P<0.05).对COPD大鼠气道壁厚度、气道平滑肌增生情况、血清及BALF中所有气道重塑相关指标进行R值综合评价结果显示,除化痰、祛邪组分配伍外,ECC-BYF Ⅲ及其余组分配伍和氨茶碱组均可改善COPD大鼠气道重塑(P<0.05),以补气祛邪、扶正化痰、补气活血组分配伍改善COPD大鼠气道重塑效果较好.结论 ECC-BYF Ⅲ及其组分配伍可不同程度干预COPD大鼠气道重塑,其中以补气祛邪、扶正化痰、补气活血(均含补气类组分:人参皂苷Rh1 和黄芪甲苷)组分配伍效果较为显著.

目的 观察PM2.5对慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型大鼠气道重塑的影响及补肺益肾组分方的保护作用与可能机制.方法 72只SD大鼠随机分为空白组、PM2.5组、COPD组、PM2.5+COPD组、补肺益肾组分方组和氨茶碱组,每组12只.第1～8周,除空白组和PM2.5组外,其余各组给予香烟熏吸联合反复细菌感染制备COPD大鼠模型.第9～16周,除空白组和COPD组外,其余各组给予大气实时浓缩PM2.5全身暴露;同时,补肺益肾组分方组和氨茶碱组分别给予补肺益肾组分方6.48 mg/ (kg·d)和氨茶碱混悬液54mg/ (kg·d)灌胃,其余各组给予生理盐水灌胃(雌鼠1.5 ml/只、雄鼠2 ml/只).PM2.5末次暴露24 h内取材,观察肺组织病理形态和超微结构;采用免疫组化法检测肺组织碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、血管内皮生长因子(VEGF)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白(COL Ⅰ),Ⅲ型胶原蛋白(COLⅢ)表达;采用ELISA法检测支气管-肺泡灌洗液中基质金属蛋白酶9(MMP-9)、基质金属蛋白酶12 (MMP-12)和金属蛋白酶组织抑制因子1 (TIMP-1)水平.结果 与空白组比较,PM2.5组、COPD组和PM2.5+COPD组大鼠肺组织出现肺泡壁和支气管壁增厚、支气管狭窄、血管增生、炎症细胞浸润和Ⅱ型肺泡上皮结构破坏,且以PM2.5+COPD组尤为显著;与PM2.5+COPD组比较,补肺益肾组分方组和氨茶碱组以上肺组织病理损伤显著改善.与空白组比较,PM2.5组、COPD组和PM2.5+COPD组大鼠肺组织中bFGF、VEGF、α-SMA、COL Ⅰ、COLⅢ阳性表达,支气管-肺泡灌洗液中MMP-9和MMP-12均显著升高,TIMP-1显著降低(P＜0.05或P＜0.01);与PM2.5组或COPD组比较,PM2.5+COPD组bFGF、VEGF、α-SMA、COL Ⅰ、COLⅢ和MMP-9、MMP-12显著升高,TIMP-1显著降低(P＜0.05或P＜0.01);与PM2.5+COPD组比较,补肺益肾组分方组和氨茶碱组bFGF、VEGF、α-SMA、COL I、MMP-9、MMP-12显著降低,TIMP-1显著升高,补肺益肾组分方组COLⅢ显著降低(P＜O.05或P＜0.01).结论 PM2.5暴露显著加重COPD模型大鼠气道重塑,补肺益肾组分方可以延缓PM2.5暴露环境下COPD气道重塑进程,其机制可能与抑制胶原沉积、改善蛋白酶/抗蛋白酶失衡等相关.

目的 基于起效时间和效应探讨补肺益肾组分方Ⅲ联合运动康复对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠的影响.方法 240只大鼠随机分为空白组(Control)、模型组(Model)、补肺益肾组分方Ⅲ组(ECC-BYF Ⅲ)、运动康复组(ER)、补肺益肾联合运动康复组(ECC-BYF Ⅲ+ER)、氨茶碱组(APL),每组40只.1～8周采用香烟联合细菌感染法复制COPD大鼠模型,9～16周给予相应干预处理,分别于第10、12、16、20、24周检测肺功能、炎症因子及肺组织病理等.结果 与Control组比较,Model组肺功能下降、肺组织病理损伤、炎症反应明显(P＜0.05,P＜0.01).与Model组比较,ECC-BYF Ⅲ组第10～24周IL-6表达及支气管壁厚度(Wt)降低,第12～24周IL-10、单位面积平均肺泡数(MAN)升高,第16～24周肺功能最大呼气中段流速(MMEF)、CD4+/CD8+升高(P＜0.05,P＜0.01);ER组10～24周IL-6、Wt降低,IL-10升高,第16～24周平均肺泡截距(MLI)降低、MAN升高(P＜0.05,P＜0.01);ECC-BYF Ⅲ+ER 组第 10～24 周 MLI、Wt、IL-6、TNF-α 均降低,IL-10、CD4+升高,第12～24周呼气中期流速(EF50)、MAN升高,FRC降低,第16～24周TV、CD4+/CD8+升高(P＜0.05,P＜0.01);APL 组第 10-24 周 Wt、IL-6、TNF-α 降低,12～24 周 MLI 降低、MMEF 升高,第 16 周 CD4+/CD8+升高(P＜0.05,P＜0.01).与 APL 组比较,ECC-BYF Ⅲ+ER 组第 16 周 TNF-α 降低,ECC-BYF Ⅲ+ER 组第 12、20、24 周 IL-10 升高,第 24 周 IL-6 降低(P＜0.05,P＜0.01).与 ER 组比较,ECC-BYF Ⅲ和 ECC-BYF Ⅲ+ER 组第 24 周 IL-6 降低,ECC-BYF Ⅲ+ER 组 12～20 周 IL-10 升高(P＜0.05,P＜0.01).结论 各方案干预COPD大鼠均具有较好的效应,其中联合干预在改善肺功能、病理损伤及调节炎症免疫方面均起效早、持续时间长,且改善炎症优于运动康复,改善炎症免疫优于氨茶碱.

目的 评价补肺益肾组分方Ⅲ、针刺及其联合在不同时间点对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠肺组织胶原和蛋白酶的影响.方法 将240只SD大鼠随机分为空白组、模型组、氨茶碱组、补肺益肾组分方Ⅲ组(组分方组)、针刺组、补肺益肾组分方Ⅲ联合针刺组(联合组).1～12周制备COPD大鼠模型,13～20周分别给予相应干预,停止干预后继续观察至28周结束.分别于14、16、20(即治疗2、4、8周)及24、28周(即停止干预4、8周)检测大鼠肺组织MMP-2、MMP-9、TIMP-1含量及Col Ⅰ、Col Ⅲ蛋白表达.结果 与空白组比较,模型组大鼠肺组织中MMP-2、MMP-9、Col Ⅰ和Col Ⅲ均升高,TIMP-1降低(P＜0.01),并随疾病进程加重.与模型组比较,组分方组第16～24周Col Ⅰ和Col Ⅲ降低,16～28 周 TIMP-1 升高,20～28 周 MMP-2 降低(P＜0.05,P＜0.01);针刺组第 16～24 周 Col Ⅰ 和 Col Ⅲ 降低,16～20 周TIMP-1升高,仅第20周MMP-2、MMP-9降低(P＜0.05,P＜0.01);联合组第16～28周Col Ⅲ降低、TIMP-1升高,16～24周Col Ⅰ降低,20～28周MMP-2降低(P＜0.05,P＜0.01).与茶碱组比较,组分方组第16、24～28周TIMP-1升高,20～24周Col Ⅲ降低(P＜0.05,P＜0.01);针刺组第16周TIMP-1升高,第20周MMP-2降低,第16～24周Col Ⅲ降低(P＜0.05,P＜0.01);联合组第 16～28 周 TIMP-1 升高,16～24 周 Col Ⅲ 降低,20～24 周 Col Ⅰ 降低(P＜0.05,P＜0.01).与针刺组比较,组分方组、联合组TIMP-1上升(P＜0.05);28周联合组TIMP-1上升(P＜0.01).结论 补肺益肾组分方Ⅲ、针刺及其联合均可明显改善COPD肺组织蛋白酶和胶原沉积,但各有特点:针刺起效早但作用时间短,补肺益肾组分方Ⅲ及其联合针刺起效早且作用时间长,以联合为优.

目的:探讨补肺益肾组分方Ⅲ(ECC-BYPⅢ)对烟雾和细菌诱导的大鼠肺动脉高压(PH)的改善作用,初步阐明其作用机制.方法:SPF级SD大鼠随机分为对照组(n=9)和造模组(n=140).对照组大鼠常规饲养,造模组大鼠给予香烟烟雾和克雷伯杆菌(Kp),制备PH模型.停止造模后,造模大鼠按照肺功能均匀的原则分为模型组(n=10)和低剂量(3.24 mg·kg-1·d-1,n=9)、中剂量(6.48 mg·kg-1·d-1,n=10)及高剂量(12.96 mg·kg-1·d-1,n=10)ECC-BYPⅢ组.给药大鼠按照组别每天分别给予相应剂量的ECC-BYPⅢ灌胃,对照组和模型组大鼠给予等量生理盐水灌胃.连续给药4周.第29天检测各组大鼠肺动脉平均压(mPAP)、收缩压(PASP)、舒张压(PADP)和右心肥大指数(RVHI).取大鼠肺组织,部分采用苏木精-伊红(HE)染色,观察各组大鼠肺组织中肺小动脉周围炎症等病变;部分采用维多利亚蓝染色,测定各组大鼠肺小动脉血管中非肌性血管、部分肌性血管和肌性血管的百分比,肺小动脉管壁厚度占管径的百分比(WT％)及血管腔面积占血管总面积百分比(LA％).另取大鼠肺组织,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测各组大鼠肺组织中白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、内皮素1(ET-1)和前列环素(PGI2)水平.结果:与对照组比较,模型组大鼠mPAP、PASP和PADP明显升高(P<0.05或P<0.01),RVHI明显增加(P<0.01),肺小动脉周围炎症细胞浸润明显,肺组织中TNF-α和IL-6水平明显升高(P<0.01),肌性血管百分比和肺小动脉WT％明显升高(P<0.01),非肌性血管百分比和LA％明显降低(P<0.01),肺组织中ET-1水平和ET-1/PGI2比值明显升高(P<0.05或P<0.01).与模型组比较,高剂量ECC-BYPⅢ组大鼠mPAP和PADP明显降低(P<0.05);与模型组比较,中和高剂量ECC-BYPⅢ组大鼠肺小动脉周围炎症细胞浸润明显改善,中和高剂量ECC-BYPⅢ组大鼠肺组织中TNF-α及IL-6水平、WT％及肌性血管百分比明显降低(P<0.01),LA％明显升高(P<0.01);与模型组比较,中和高剂量ECC-BYPⅢ组大鼠肺组织中ET-1水平明显降低(P<0.05或P<0.01),高剂量ECC-BYPⅢ组大鼠ET-1/PGI2比值明显降低(P<0.05).与低剂量ECC-BYPⅢ组比较,中和高剂量ECC-BYPⅢ组大鼠WT％和肺组织中ET-1水平明显降低(P<0.05或P<0.01),LA％明显升高(P<0.01);中剂量ECC-BYPⅢ组大鼠肺组织中TNF-α水平,高剂量ECC-BYPⅢ组大鼠肺组织中IL-6水平和ET-1/PGI2比值明显降低(P<0.05).结论:ECC-BYPⅢ可降低PH,减小肺血管壁厚度,改善管腔狭窄和肺小动脉肌化,改善肺血管重构,其机制可能与减轻肺血管周围炎症反应、改善血管周围收缩血管因子水平/舒张血管因子水平失衡有关.

目的 观察PM2.5及补肺益肾组分方对慢性阻塞性肺疾(COPD)大鼠上皮-间质转化(EMT)的作用,并探讨其作用机制.方法 将50只健康SD大鼠随机分为:空白组、COPD组、大气颗粒物(PM2.5)组、补肺益肾组分方组(组分方组)和氨茶碱组,每组10只.除空白组外采用香烟熏吸联合反复克雷伯杆菌感染制备COPD大鼠模型,除空白组和COPD组外以大气实时浓缩PM2.5对其进行全身暴露.自暴露第1天起,组分方组和氨茶碱组分别给予补肺益肾组分方[6.48 mg/(kg·d)]或氨茶碱[54 mg/(kg·d)]灌胃,其余各组给予生理盐水,1次/天,持续8周.检测大鼠最大呼气中期流速(MMEF)和功能残气量(FRC);免疫组化法检测肺组织α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白(COL Ⅰ)、Ⅲ型胶原蛋白(COL Ⅲ)表达;Western Blot检测肺组织E-钙黏附蛋白(E-cad)、N-钙黏附蛋白(N-cad)、α-SMA、COL Ⅰ、Smad家族成员(Smad)4、p-Smad2/3表达;ELISA法检测血清和肺组织匀浆中TGF-β1水平.结果 与空白组比较,COPD组MMEF及E-cad蛋白表达降低,FRC、TGF-β1水平及α-SMA、COL Ⅰ、COL Ⅲ、α-SMA、p-Smad3、Smad4 蛋白表达增加(P＜0.05,P＜0.01);PM2.5组 MMEF及 E-cad 蛋白表达降低,FRC、TGF-β1 水平及 α-SMA、COL Ⅰ、COL Ⅲ、N-cad、p-Smad2、p-Smad3、Smad4 蛋白表达增加(P＜0.05,P＜0.01).与 COPD 组比较,PM2.5 组 FRC、TGF-β 1 水平及α-SMA、COL Ⅰ、COL Ⅲ表达增加(P＜0.05,P＜0.01).与PM2.5组比较,组分方组MMEF及E-cad表达升高,FRC、TGF-β 1 水平及 α-SMA、COL Ⅰ、COL Ⅲ、N-cad、p-Smad2、Smad4蛋白表达降低(P＜0.05,P＜0.01);氨茶碱组 FRC、TGF-β 1 水平及 α-SMA、COL Ⅰ、COL Ⅲ、p-Smad2、Smad4蛋白表达降低(P＜0.05,P＜0.01).结论 PM2.5暴露促进COPD大鼠肺组织EMT,进一步加重肺功能损伤;补肺益肾组分方可有效防治PM2.5诱导的COPD肺组织EMT加重,其机制可能与调控TGF-β1/Smad通路有关.