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中国汉族ADRP一家系 RHO基因变异基因型及临床表型分析
编辑人员丨1周前
目的:分析中国汉族常染色体显性遗传视网膜色素变性(ADRP)一家系的致病基因及临床表型。方法:采用家系调查研究,收集2019年11月于河南省人民医院进行遗传咨询的中国汉族RP一家系,纳入该家系4代20名成员,包括9例患者和11名表型正常者,对部分家系成员进行视力、视野和眼底检查。收集该家系成员外周血样本,提取DNA,采用Ion Torrent PGM测序平台,对先证者进行包含43个与RP相关基因的外显子靶向测序,采用PCR和Sanger测序对变异位点进行验证。采用在线软件对变异位点进行蛋白功能预测。采用ClustalW2多重比对程序对变异位点的氨基酸序列进行比较。根据美国医学遗传学与基因组学学会(ACMG)遗传变异分类标准与指南分析变异的致病性。结果:该家系符合常染色体显性遗传。先证者,男,26岁,自幼双眼夜盲,视力右眼0.25,左眼0.5。双眼视网膜有骨细胞样色素沉着,视网膜血管变细,视盘颜色变淡。全视野视网膜电图检查显示,暗适应a波和b波峰值降低,明适应a波和b波峰值重度降低。其余家系成员患者均于7~10岁开始出现夜盲,约50岁时周边视力完全丧失,眼科检查均呈典型RP改变。基因检测结果显示,该家系视紫红质( RHO)基因(NM_000539.3)5号外显子中存在1个杂合错义变异c.982delC(p.L328fs)。该变异可导致编码的RHO蛋白第328位氨基酸以后的21个氨基酸改变,使编码区由348个氨基酸增加到358个氨基酸,RHO蛋白结构发生改变;多个不同物种之间蛋白同源序列比对分析结果显示该位点高度保守。根据ACMG遗传变异分类标准与指南,该变异具有1个非常强的致病性证据PVS1,2个中等致病证据PM2,3个支持致病证据PP1、PP3、PP4,属于致病性变异。 结论:RHO基因c.982delC变异为该家系的致病基因变异位点,该变异位点在中国汉族家系中首次报道。
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编辑人员丨1周前
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通过转录组测序和生物信息学方法鉴别小胶质细胞炎症激活过程中的关键通路和基因
编辑人员丨1周前
目的:通过转录组测序和生物信息学分析,探究小胶质细胞炎症激活的关键通路和基因。方法:使用质量浓度为1 μg/ml的脂多糖对小胶质细胞进行刺激,建立小胶质细胞炎症模型。使用ELISA法和RT-qPCR检测小胶质细胞炎症模型IL-6和TNF-α水平。对建立的小胶质细胞炎症模型进行转录组测序,采用生物信息学方法筛选出差异表达基因。对差异表达基因进行GO分析和KEGG分析。使用String数据库构建差异表达基因的蛋白互作网络,并使用Cytoscape软件进行蛋白互作网络的可视化。使用MCODE应用程序提取蛋白互作网络的模块,使用cytohubba应用程序提取枢纽基因。采用RT-qPCR验证枢纽基因的mRNA表达水平。对枢纽基因进行富集分析,预测其靶向miRNA,预测可能与其作用的药物。结果:经ELISA和RT-qPCR检验,小胶质细胞炎症模型建立成功。通过转录组测序和生物信息学分析,筛选出434个差异表达基因。GO分析显示这些差异表达基因主要集中在细胞对细胞因子刺激的反应、炎症反应、对外界刺激反应的调节等条目。KEGG分析显示这些差异表达基因主要集中在趋化因子信号通路、TNF信号通路、IL-17信号通路等通路。构建了这些差异表达基因的蛋白互作网络图,并进行了模块分析和枢纽基因的提取,枢纽基因大部分位于模块1内,模块1的种子基因为 S1pr1,枢纽基因包括 S1pr1、 Cxcr4、 Cx3cl1、 Cx3cr1、 Cxcl10、 Cxcl2、 Ccl4、 Ccl5、 Ccl9、 Fpr1。RT-qPCR结果显示,与培养液组相比,脂多糖组中 S1pr1、 Cxcr4、 Cx3cl1、 Cx3cr1的mRNA表达下调, Cxcl10、 Cxcl2、 Ccl4、 Ccl5、 Ccl9、 Fpr1的mRNA表达上调。枢纽基因的富集分析主要集中在趋化因子介导的信号通路、视紫红质样受体、细胞趋化性等条目。预测了可能和枢纽基因作用的miRNA和药物。 结论:通过对小胶质细胞炎症模型进行转录组测序和生物信息学分析,筛选出了差异表达基因,提取了枢纽基因和种子基因,有助于进一步理解小胶质细胞炎症的分子机制,为相关疾病的诊治提供潜在的靶点。
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编辑人员丨1周前
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治疗性650 nm低功率半导体激光照射鸡视网膜的安全剂量研究
编辑人员丨1周前
目的:观察650 nm半导体激光(功率2 mW)照射以视锥细胞为主的鸡视网膜后是否存在慢性光损伤,探讨该波段激光对视网膜的安全性。方法:采用随机数字表法将60只自然光线下饲养1个月的小鸡分为正常对照组、照射3-min组、照射6-min组和照射30-min组,每组15只。采用650 nm激光并按照分组不同各组小鸡双眼每日接受不同时间的激光照射。分别于激光照射后1个月(2月龄鸡)、3个月(4月龄鸡)和6个月(7月龄鸡)各组任选5只进行活体光相干断层扫描(OCT)检查,测定鸡的相对视网膜面积;采用过量麻醉法处死并制备视网膜切片,行苏木精-伊红染色和TUNEL染色,分别观察各组鸡视网膜面积变化和视细胞凋亡情况;实验眼制备视网膜匀浆,分别采用TBA法和NBT法检测鸡视网膜中丙二醛质量摩尔浓度和超氧化物歧化酶(SOD)比活性;采用Western blot法检测鸡视网膜中L/M视蛋白和视紫红质蛋白的表达。结果:2月龄时鸡照射30-min组视网膜中丙二醛质量摩尔浓度高于正常对照组,差异有统计学意义( P<0.05),4月龄时激光照射6-min组和照射30-min组丙二醛质量摩尔浓度均高于正常对照组,差异均有统计学意义( P=0.026、0.003),7月龄时所有激光照射组鸡视网膜中丙二醛质量摩尔浓度均高于正常对照组,差异均有统计学意义( P=0.038、0.032、<0.01)。7月龄时激光照射30-min组鸡视网膜中SOD比活性和视紫红质蛋白相对表达量均低于正常对照组[SOD:(140.20±5.99)(nmol/s·mg)与(160.57±3.13)(nmol/s·mg);视紫红质蛋白:0.392±0.065与0.566±0.072],差异均有统计学意义(均 P<0.05)。OCT检查显示,照射3-min组、照射6-min组和照射30-min组6个月内鸡视网膜相对面积及形态与正常对照组相比无明显差别;组织病理学检查显示各照射组鸡视网膜厚度均接近正常对照组,TUNEL染色显示各组鸡视网膜细胞排列整齐,未发现TUNEL阳性染色细胞。 结论:实验鸡眼接受650 nm半导体激光照射时,用2 mW的功率每日照射6 min持续6个月不引起明显光损伤;每日照射30 min持续6个月引起视网膜中自由基含量增高和视紫红质减少,提示存在光损伤。
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编辑人员丨1周前
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光遗传学消除转子治疗心房颤动可行性探讨
编辑人员丨1周前
转子作为近年来关于心房颤动(房颤)研究的热门话题,被认为是纤维性颤动的驱动灶。光遗传学是一种结合离子通道和光的有利特性,允许以非电压门控方式来定量调节细胞电生理的新技术。本文对光遗传学和转子的相关特性进行综述,意在通过两者的联系探讨光遗传学消除转子治疗房颤的可行性。
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编辑人员丨1周前
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糖尿病通过下调GPX4引起视网膜光感受器细胞的损伤及其机制
编辑人员丨1周前
目的:探讨糖尿病视网膜光感受器中谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)的表达变化,及其与视网膜光感受器细胞损伤的有关机制。方法:收集2018—2021年武汉市红十字会同济医院遗体(器官)捐献登记及眼角膜接收站8名年龄匹配男性遗体捐献者眼后段组织,其中非糖尿病捐献者和糖尿病捐献者各4名,分别作为对照组和糖尿病组。选取健康SPF级8周龄雄性C57BL/6小鼠14只,采用随机数表法将小鼠随机分为糖尿病组和对照组,每组7只,其中糖尿病组小鼠按照50 mg/kg剂量腹腔内注射链脲佐菌素,连续5 d,对照组不做特殊处理。将小鼠光感受器细胞661W分为晚期糖基化终末产物(AGEs)组和对照组,其中AGEs组采用100 μg/ml AGEs处理24 h模拟糖尿病损伤,对照组不做特殊处理。采用苏木精-伊红染色法观察各组人及小鼠视网膜光感受器细胞外节形态;采用免疫荧光染色法观察人及小鼠视网膜中胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、视紫红质(Rhodopsin)和GPX4表达;采用Western blot法检测小鼠视网膜中GFAP、Rhodopsin和GPX4的表达及661W细胞中GPX4的表达;采用细胞计数试剂盒8(CCK8)法检测各组661W细胞活力;采用TBA法检测小鼠视网膜及细胞中丙二醛(MDA)浓度;采用羟胺法检测小鼠视网膜及细胞中超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果:苏木精-伊红染色结果显示,与对照组比较,糖尿病组人和小鼠视网膜光感受器细胞外节变形或断裂。GFAP荧光信号主要出现在人和小鼠内层视网膜,着染细胞为梭形或多角形,与胶质细胞形状吻合,糖尿病组视网膜中GFAP荧光信号较对照组增强。Rhodopsin仅在光感受器细胞外节层表达,边界清晰,GPX4在全视网膜均有表达,光感受器细胞外节层信号较强;糖尿病组Rhodopsin和GPX4荧光信号较对照组减弱。糖尿病组人和小鼠GFAP相对表达量均明显高于对照组,Rhodopsin和GPX4相对表达量均明显低于对照组,差异均有统计学意义(均 P<0.05)。AGEs组细胞活力值明显低于对照组,差异有统计学意义( t=13.490, P<0.001)。AGEs组GPX4蛋白相对表达量为0.42±0.12,明显低于对照组的1.00±0.04,差异有统计学意义( t=9.041, P<0.001)。糖尿病组小鼠视网膜组织和AGEs组细胞中MDA浓度高于对照组,SOD活性值低于对照组,差异均有统计学意义(均 P<0.05)。 结论:糖尿病能降低视网膜光感受器细胞中GPX4水平,引起氧化-抗氧化系统失衡,可能是糖尿病引起视网膜光感受器细胞损伤的机制。
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编辑人员丨1周前
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S1PR1在免疫细胞迁移中的作用
编辑人员丨1周前
1磷酸鞘氨醇受体1(sphingosine-1- phosphate receptor1 ,S1PR1)是G蛋白偶联受体(G protein-coupled receptors,GPCR)视紫红质亚家族的典型成员。在过去的十几年中,研究者进行了大量研究以探索S1PR1在血管生成、免疫细胞增殖和迁移、神经系统代谢以及肿瘤生长和转移中的作用。其中,S1PR1对免疫细胞的迁移至关重要。研究认为各种组织之间的1磷酸鞘氨醇(sphingosine-1- phosphate,S1P)浓度梯度可促进T细胞从次淋巴器官到淋巴和血液循环的S1PR1依赖性迁移,此时参与的B细胞由骨髓向脾脏边缘区的迁移。因此,了解S1P受体作用的最新进展以及相关药物的治疗潜力将为相关疾病的发生发展及个体化治疗提供重要的理论依据。
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编辑人员丨1周前
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枸杞子-丹参诱导穆勒细胞重编程治疗视网膜色素变性的实验研究
编辑人员丨2024/7/20
探讨滋阴活血明目药对枸杞子-丹参(Lycii Fructus-Salviae Miltiorrhizae Radix,LFSMR)抑制穆勒细胞(Müller cell,MC)胶质化,促进MC重编程转分化为视网膜神经细胞治疗视网膜色素变性(retinitis pigmentosa,RP)的效应及机制.将 12只C57 小鼠作为正常对照组,48 只转基因RP(rd10)小鼠随机分为模型组、阳性对照组和LFSMR低、高剂量组,每组 12 只.HE染色检测视网膜病理改变,视网膜电图检测视网膜功能,眼底光学相干断层扫描检测视网膜厚度并进行眼底照相,激光散斑灌注成像检测视网膜局部血流,数字PCR检测视网膜神经细胞相关基因表达,免疫荧光法检测视网膜神经细胞相关蛋白表达.LFSMR可明显改善rd10 小鼠视网膜病理改变;LFSMR可明显增加小鼠视网膜a波和b波振幅;LFSMR可显著增加小鼠视网膜厚度;LFSMR可明显恢复RP病变过程小鼠眼底损伤;LFSMR可显著提升RP病变过程小鼠视网膜血流量;LFSMR可显著抑制RP发病过程胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)mRNA表达,上调性别决定域Y链蛋白 2(sex determining region Y box protein 2,SOX2)、双链复合蛋白 6(paired box protein 6,Pax6)、视紫红质(rhodopsin)、蛋白激酶C-α(protein kinase C-α,PKCα)、突触融合蛋白(syntaxin)、胸腺细胞抗原1.1(thymic cell antigen 1.1,Thy1.1)mRNA表达;LFSMR可显著抑制GFAP蛋白表达,提升SOX2、Pax6、rhodopsin、PKCα、syntaxin、Thy1.1 蛋白表达.LFSMR可逆转rd10 小鼠视网膜病理改变,改善视网膜功能和眼底表现,增加视网膜厚度,提升视网膜局部血流量,发挥治疗RP的效应.LFSMR的作用机制可能与抑制穆勒细胞胶质化,促进穆勒细胞重编程转分化为各类视网膜神经细胞有关.
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编辑人员丨2024/7/20
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细菌光谱检测方法与分子机制的研究进展
编辑人员丨2023/10/21
细菌是人类最常见的致病源之一,不仅严重危害人类健康和公共卫生安全,还带来了巨额的医疗支出.快速而准确的细菌检测对细菌感染的治疗具有重要的意义.光谱检测方法不但可以快速实时地获得细菌的分类、含量以及功能状态等信息,而且具有操作简单、非侵入性的优势,在细菌检测领域具有巨大的潜力.本文介绍了拉曼光谱、太赫兹光谱、可见光和近红外光光谱、荧光光谱在细菌检测方面的研究与应用,并对可见光和近红外光光谱的分子机制——光靶点,包括含有视网膜发色团的细菌视紫红质(CBCRs)、带有四吡咯发色团的拟菌植物色素、带有对香豆酸发色团的光活性黄蛋白(PYP)、带有黄素单核苷酸(FMN)的光氧压力(LOV)结构域、带有黄素腺嘌呤二核苷酸(FAD)发色团的隐色剂和含有FAD的蓝光感应域等进行了阐述.最后,针对现有细菌光谱检测技术的优缺点提出了细菌检测技术的优化策略,希望对细菌的光谱检测研究提供帮助.
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编辑人员丨2023/10/21
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神经胶质细胞对平行记忆形成的调节
编辑人员丨2023/9/23
神经胶质细胞的活动可以影响学习和记忆的储备和效率.本研究采用小脑依赖水平光动力反应运动学习小鼠模型,研究在线训练期间短期记忆(STM)的形成和离线休息期间长期记忆(LTM)的形成.研究显示,在线和离线学习效果的差异很大.STM早期形成较好者的LTM形成往往受到抑制,而没有明显急性训练效果的STM形成较晚者常常在离线学习中有明显提高.含有LRRC8A的阴离子通道可释放谷氨酸.在星形胶质细胞(包括小脑伯格曼胶质细胞)中特异性地条件性敲除LRRC8A导致STM形成的完全丧失,而在休息期间LTM形成仍然存在.在线训练期间,通过通道视紫红质-2或古菌红素-T(ArchT)对神经胶质细胞的活性进行光遗传学调控,可分别导致STM形成的增强或抑制.STM和LTM可能在在线训练期间同时触发,但LTM在离线期的后期才表达.STM似乎并不稳定,在线培训期间的形成的记忆并没有在LTM中出现.此外,我们发现在休息期间,胶质细胞ArchT的光活化导致LTM形成的增加.这些数据表明STM的形成和LTM的形成是平行的独立过程.可以根据胶质细胞的反应来决定策略的重点是STM还是LTM.
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编辑人员丨2023/9/23
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家鸡似G蛋白偶联受体119基因的克隆与组织表达分析
编辑人员丨2023/8/6
G蛋白偶联受体119(GPR119)是A型视紫红质G蛋白偶联受体家族成员.在哺乳动物中,该基因高表达于胰腺β细胞和PP细胞以及小肠组织的内分泌L细胞,参与胰岛素释放调节.本文以家鸡Gallus gallus小肠cDNA为模板,首次克隆到似GPR119新基因,将其命名为cGPR119b基因.结果显示:cGPR119b基因的cDNA全长954 bp,编码具317个氨基酸的前体蛋白.将家鸡GPR119b前体蛋白氨基酸序列与绿头鸭Anas platyrhynchos、绿海龟Chelonia mydas、西部锦龟Chrysemys picta bellii和火鸡Meleagris gallopavo的序列进行比对,分别具有79.9%、61.0%、62.3%、95.5%的相似度.利用反转录PCR和RACE技术,家鸡GPR119b的5'-UTR亦获分离,该片段678 bp.本研究亦采用实时荧光定量PCR探究cGPR119b基因的组织表达,发现其在大脑、肝脏、肾脏、卵巢、精巢、垂体、胰腺、皮肤、脂肪、肺、十二指肠、空肠、回肠、盲肠、直肠等组织中有表达,其中,在肝脏、肾脏、盲肠和精巢的表达量较高,在胰腺、皮肤、脂肪和肺组织中仅有微量表达.本研究为进一步探究cGPR119b基因在家鸡中的生理功能奠定了基础.
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编辑人员丨2023/8/6
