近年来,近视屈光手术不断进步发展,飞秒激光小切口角膜基质透镜取出术(small incision lenticule ex-traction,SMILE)自 2011 年问世以来,已经逐渐成为目前最主流的屈光手术方式.相比于过往的屈光手术方式,SMILE术有着许多不可替代的优点,如:最小侵入性、无瓣、能最大限度地保留完整角膜形态、促进角膜神经纤维更快愈合、更好的生物力学强度和更少的干眼症发生率等优点.但从过往研究发现SMILE手术术后早期视力及视觉质量的恢复较缓慢,这对SMILE术后患者早期的日常生活及用眼造成影响.故研究影响全飞秒术后早期的视力及视觉质量的潜在因素,也成了医患所共同关注的焦点.

背景:角膜修复材料可修复角膜损伤,这种产品在进入临床试验之前需要评估其有效性,但现阶段尚缺乏标准化的有效性评估方法.目的:建立并验证兔角膜真菌感染模型和角膜移植实验方法.方法:取新西兰大白兔12只,建立左眼角膜真菌感染模型(实验组),右眼作为正常对照.模型建立2周后,左眼进行脱细胞猪角膜基质移植,移植后定期进行裂隙灯显微镜、角膜厚度、眼压、共聚焦显微镜及光学相干断层成像等检测,评估角膜修复材料透明度、上皮愈合程度、水肿程度、角膜新生血管程度、角膜修复材料融解程度;移植后3,6,12个月,进行角膜病理组织观察.结果与结论:①实验组移植后1个月时角膜厚度明显增高,移植3-6个月时角膜厚度开始稳定,1年时趋于稳定,趋向于正常眼;②实验组眼压始终接近于正常眼;③光学相干断层成像显示,移植后7 d,角膜修复材料与植床贴合良好;移植后6个月上皮覆盖完整,移植区植片厚度较为均一;移植后1年恢复情况趋于正常眼;④共聚焦显微镜显示,移植后1个月时,移植区材料均匀;移植后6个月时,移植区有少量细胞迁入;移植后1年时,上皮细胞密度增大,移植区有迁入细胞,但少于正常眼;⑤移植后1年,角膜修复材料几近完全透明,可认为此角膜修复材料治疗感染性角膜溃疡有效;未发生排斥反应,表明该角膜修复材料的治愈性良好;⑥移植后3个月,大量基质细胞迁移至角膜角膜替代物中,移植区域胶原纤维排列整齐、致密,无明显瘢痕及降解现象;移植后6个月时,移植区域已基本恢复至正常角膜状态;移植后1年,移植区域已恢复至正常角膜状态,生物相容性很好;⑦结果表明,实验建立的兔角膜真菌感染模型和角膜移植实验方法可作为评价此类角膜材料有效性的动物模型和方法.

目的 比较脱细胞猪角膜基质与新鲜角膜组织作为植片的深板层角膜移植手术治疗感染性角膜溃疡的临床疗效.设计回顾性病例系列.研究对象 2015年11月～2016年9月在北京佑安医院就诊的10例病变深度未累及后弹力层的感染性角膜溃疡患者.方法 回顾性分析气泡辅助下的深板层角膜移植手术资料,其中使用脱细胞猪角膜基质材料和新鲜角膜组织材料治疗的患者各5例.比较两组患者术后1年最佳矫正视力(LogMAR)、眼压、球镜度、角膜平均曲率、散光度、角膜内皮细胞数、角膜厚度、眼轴长度、角膜共聚焦显微镜表现、角膜透明度以及植片的生存情况.主要指标 术后1年患者的最佳矫正视力(LogMAR)、眼压、球镜度、角膜平均曲率、散光度、角膜内皮细胞数、角膜厚度、眼轴长度、角膜共聚焦显微镜表现、角膜透明度以及植片的生存情况.结果 在随访期间,两组所有植片均保持透明,植片生存率为100％.术后1年,脱细胞角膜基质组和新鲜角膜组的视力分别为0.53±0.21和0.33±0.06(P=0.184),眼压分别为(8.00±2.00)mmHg和(10.33±0.58)mmHg(P=0.124),球镜度分别为(-4.50±4.21)D和(-1.25±0.75)D(P=0.258),角膜平均曲率分别为(47.59±5.40)D和(44.51±1.87)D(P=0.403),散光度分别为(-5.52±1.97)D和(-5.14±1.66)D(P=0.812),内皮细胞数分别为(1272.67±387.63)个/mm2和(1550.33±232.69)个/mm2(P=0.347),角膜厚度分别为(439.33±67.86)μm和(534.00±14.42)μm(P=0.077),眼轴长度分别为(23.53±0.91)mm和(23.55±1.56)mm(P=0.981).角膜共聚焦显微镜显示,脱细胞猪角膜基质组的角膜上皮细胞可以完全覆盖植片,基底细胞和翼状细胞形态和密度与新鲜角膜组织接近,但在基底细胞下方可见高反光的沉着物,基质层细胞的密度明显低于新鲜角膜组织,并且在内皮细胞与深基质层之间仍可见脱细胞纤维排列.结论 脱细胞猪角膜基质具有良好的生物相容性,当缺乏新鲜角膜材料时,用于替代治疗感染性角膜溃疡可以取得满意的效果.

目的 探究米诺环素对大鼠角膜碱烧伤炎症反应的调控机制.方法 将40只SD大鼠随机分为4组(n=10),分别为正常对照组、模型组、0.1％米诺环素组和0.5％米诺环素组.采用角膜贴敷氢氧化钠(NaOH)滤纸法构建中度角膜(右眼)碱烧伤动物模型,正常对照组以蒸馏水替代;0.1％米诺环素组和0.5％米诺环素组于建模24 h后予以0.1％、0.5％米诺环素滴眼液滴眼,1滴/次,4次/d,连续滴药14 d,对照组和模型组以生理盐水替代.记录各组大鼠角膜混浊程度、炎症指数和中性粒细胞计数,采用HE染色观察角膜组织病理变化,酶联免疫吸附(ELISA)检测大鼠房水中白介素(IL-6、IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量,Western blot检测角膜组织中血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、核转录因子-κB(NF-κB)、Toll样受体(TLR-2、TLR-4)的表达.结果 与对照组相比,模型组角膜混浊程度评分炎性指数、中性粒细胞计数、房水中IL-6、IL-1β及TNF-α水平、角膜组织中VEGF、MMP-2、NF-κB、TLR-2、TLR-4的表达均显著上升(P＜0.05).米诺环素干预后,角膜碱烧伤大鼠水肿基本消失,混浊程度明显减轻,瞳孔隐约可见,新生血管数量明显较少;HE染色显示,角膜上皮愈合,水肿基本消退,胶原纤维排列相对整齐,有极少数新生血管生成;且角膜混浊程度评分、炎性指数、中性粒细胞计数、房水中IL-6、IL-1β及TNF-α水平、角膜组织中VEGF、MMP-2、NF-κB、TLR-2、TLR-4的表达均显著下降(P＜0.05),但两种浓度米诺环素组上述改变差异无显著性(P＞0.05).结论 米诺环素对大鼠角膜碱烧伤有一定的治疗作用,可能与下调炎症反应、抑制新生血管生成有关,但0.1％米诺环素和0.5％米诺环素的作用无显著差异.

背景:寻找替代角膜供体的材料是临床上治疗真菌性角膜溃疡的研究热点.目的:观察生物工程角膜和人供体角膜治疗真菌性角膜溃疡的临床疗效.方法:选择2016年10月至2017年2月北部战区总医院收治的真菌性角膜溃疡患者44例(44眼),随机分2组:生物工程角膜组(n=22)采用脱细胞猪角膜基质材料进行板层角膜移植治疗,人供体角膜组(n=22)采用人供体角膜材料进行板层角膜移植治疗.随访12个月,观察两组感染控制率、视力、角膜植片透明度、角膜上皮化时间、并发症等情况.试验已通过北部战区总医院医学伦理委员会批准[K(2018)05号].结果与结论:①两组感染控制率比较差异无显著性意义(91％,91％,P>0.05);②两组术后视力随时间延长逐渐改善,人供体角膜组术后12个月的矫正视力视力优于生物工程角膜组(P<0.05);③人供体角膜组术后1,3,6个月的角膜植片透明度优于生物工程角膜组(P<0.05),两组术后12个月的角膜植片透明度无差异(P>0.05);④两组角膜植片上皮愈合时间比较差异无显著性意义[(6.6±2.0),(6.7±1.9)d,P>0.05];⑤两组角膜上皮愈合延迟、角膜植片排斥反应、新血管长入、原病复发等并发症发生率比较差异无显著性意义,生物工程角膜组角膜植片溶解发生率高于人供体角膜组(32％,8％,P<0.05);⑥结果表明,采用生物工程角膜行板层角膜移植治疗真菌性角膜溃疡的临床效果显著、安全性高、预后较好.因此在无人供体角膜的情况下,生物角膜可作为板层角膜移植的材料用于治疗真菌性角膜溃.

目的 通过动物实验初步观察应用多柔比星对准分子激光角膜切削术(photorefrac-tive keratectomy,PRK)术后角膜上皮下混浊(Haze)的影响,评估其抑制PRK术后Haze的有效性和安全性,旨在探讨PRK术中多柔比星替代丝裂霉素C应用的可行性.方法 新西兰白兔10只(20眼),其中右眼为多柔比星治疗的实验组,左眼为丝裂霉素C治疗的对照组,两组兔眼均行PRK激光切削校正-8.00 D后,分别用0.2 g·L-1多柔比星或0.2 g·L-1丝裂霉素C的棉片处理,分别于术后1 d、1周、2周、3周、4周在裂隙灯下观察角膜上皮愈合及Haze情况.结果 术后1周,两组所有兔眼角膜上皮均已完全愈合.实验组3眼术后1 d即出现角膜基质片状炎性浸润灶,其中2眼治疗后角膜基质炎性浸润灶消退,另1眼形成浅层斑翳;实验组其余7眼及对照组10眼均未见Haze.结论 多柔比星虽然可能引起角膜基质非感染性炎症反应,但在抑制PRK术后细胞增殖方面或具有与丝裂霉素C类似效果.

目的 制作角膜基质透镜修复兔角膜缺损的动物模型,观察其与缺损角膜的生物相容性,探讨其在角膜组织损伤修复中的机制及作用,为寻求角膜组织替代物提供理论基础.方法 甘油冷冻保存角膜基质透镜[来源于新疆军区总医院临床治疗近视的飞秒激光微小切口角膜基质透镜切除术(SMILE)].新西兰白兔30只,分为2组,各15只.A组:用2 mm ×3 mm ×3 mm滤纸模型制作全层角膜缺损模型后,用角膜基质透镜填塞于角膜缺损处,行角膜裂伤清创缝合.B组:用2 mm×2 mmx2 mm滤纸模型制作全层角膜缺损模型后,用角膜基质透镜填塞于角膜缺损处,行角膜裂伤清创缝合.于缝合术后1 d、1周、1个月、2个月、3个月行眼前段照相、眼前节相干光断层成像术(OCT)、裂隙灯观察角膜裂伤愈合情况、眼表炎症反应.于3个月行Pentacam眼前节分析仪、角膜地形图检查,过量麻醉药物处死动物,取其角膜行病理组织检查.结果 制作兔角膜缺损修复模型,A组行角膜裂伤缝合时难度较大,术后有伤口渗漏、虹膜前粘连10只眼(66.7％)、角膜新生血管侵入11只眼(73.3％)等并发症发生,B组裂伤处角膜基质透镜间粘附不是太紧密,但6只眼(40.0％)以角膜瘢翳、9只眼(60.0％)以角膜白斑愈合,角膜组织组织逐渐透明,角膜曲率相对平整,拆线后无角膜裂伤陊开等严重的并发症发生,效果良好.B组角膜裂伤修复模型制作成功者,观察3个月后HE染色发现修复处角膜结构略紊乱,部分角膜有新生血管侵入,细胞增多;前节OCT显示角膜层间有间隙形成,但角膜曲率平整,角膜地形图显示仍有散光.结论 对于2mmx3mm x3 mm的角膜全层缺损患者行角膜基质透镜缝合较为困难,但对于2 mm x2 mm ×2 mm的全层角膜缺损、填塞的角膜基质透镜逐渐透明,与角膜组织融合紧密,角膜曲率相对平整,其通过提供纤维支架及细胞扩增分化形式修复角膜,可应用于角膜组织缺损的替代物,并为二期手术治疗奠定基础.

一例59岁男性患右眼结膜日光性角化病,行结膜、浅层巩膜病损扩大切除联合全飞秒激光切除的角膜基质透镜瓣移植,术后7个月效果满意.角膜透镜瓣替代角膜材料是治疗眼表肿物组织缺损修补的供选择的方法.

背景 大泡性角膜病变是导致角膜盲的主要原因,前房注射有功能的内皮细胞替代病变内皮可以有效解决供体来源缺乏的问题.目的 构建兔保留后弹力层的改良式大泡性角膜病变模型,评价前房注射兔原代角膜内皮细胞的治疗效果.方法 选取2.5 ～ 3.0 kg新西兰大白兔18只,利用自行设计的硅胶针制备兔改良式大泡性角膜病变模型,右眼为手术眼,按随机数字表法分为对照(Con)组和实验(CEC)组,对照组前房注射100 μL无细胞DMEM培养液 + Y27632,实验组前房注射100 μL兔原代角膜内皮细胞(106个) + Y27632.分别于注射后1 d、4 d、7 d、14 d裂隙灯照相,用前节OCT评价兔角膜混浊程度和角膜厚度.注射后14 d取角膜组织行茜素红和苏木精-伊红染色观察角膜病理学改变.结果 注射后1 d、4 d、14 d两组角膜厚度差异无统计学意义;CEC组在第7天时可达到临床治愈(角膜厚度＜500 μm),各组间角膜厚度差异有统计学意义(P＜0.05).14 d后病理学观察CEC组角膜各层结构完整,基质纤维排列更为紧密,六边形内皮细胞形态规则.结论 改良式大泡性角膜病变模型制备方法简单可靠,兔原代角膜内皮细胞前房注射治疗有效,为细胞注射疗法转化运用提供了临床前研究结果和合适的动物模型.

单纯疱疹病毒基质型角膜炎是引起角膜盲的主要原因之一,目前以局部使用糖皮质激素联合口服抗病毒药物治疗为主.传统治疗存在生物利用度低、药物不良反应等缺点,因此亟需寻找替代药物、开发新剂型.环孢素A和他克莫司等免疫抑制剂疗效明显、不良反应少,可能是糖皮质激素的潜在替代品.α干扰素联合阿昔洛韦可缩短病程,而单独使用效果有限.基质再生剂具有新的抗病毒机制,值得进一步研究.此外,纳米载体递送系统,如脂质体、纳米胶束、立方液晶纳米粒,由于能够增强药物角膜穿透性和延长药物释放,在治疗基质型单纯疱疹性角膜炎方面具有巨大潜力.