目的:探讨人表皮生长因子受体-2(human epidermal growth factor receptor 2，HER2)蛋白的哪种结构域更适合激发赫赛汀抗体依赖的细胞介导的细胞毒性(antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity，ADCC)效应。方法:真核表达五种包含HER2胞外段不同结构域的蛋白，即HER2-Fc、HER2-His、T23-561-Fc、T276-T652-Fc、T276-T652-His。通过十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis，SDS-PAGE)对蛋白相对分子质量及纯度进行检测。酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)检测这些蛋白与赫赛汀的结合能力。自然杀伤(natural killer，NK)细胞活化实验比较这五种蛋白增强赫塞汀ADCC效应的能力差异。结果:成功获得纯度较高的蛋白。ELISA结果显示HER2-Fc，HER2-His和T276-T652-His都表现出较好的结合能力，T276-T652-Fc结合较差，T23-561-Fc则完全不结合。此外，HER2-Fc、HER2-His、T276-T652-Fc、T276-T652-His、T23-561-Fc的EC50值分别为0.16、0.17、0.16、0.15、1.12。NK细胞活化实验结果显示HER2-Fc和T276-T652-His能显著增强赫赛汀刺激NK细胞脱颗粒和分泌干扰素-γ(interferon-γ，IFN-γ)的效应，HER2-Fc组CD107a表达量最高可达61.50%，IFN-γ的分泌可达38.10%。T276-T652-His组CD107a的表达最高可达63.00%，IFN-γ的分泌可达43.10%，与HER2-Fc作用相当。该效应呈浓度梯度依赖性，蛋白低浓度0.5 μg/mL时，赫赛汀的ADCC效应降低，且组间差异有统计学意义( t值分别为4.21、4.24、6.51、3.17、3.44、3.05、3.34、2.82、8.55、11.52、4.50、2.96、5.58、6.03、3.77、4.42， P值均<0.05)。 结论:验证了T276-T652-His具有增强赫赛汀ADCC功能的作用，且与HER2-Fc相当，为后续将HER2蛋白用于肿瘤免疫治疗研究打下了基础。

目的 制备赫赛汀靶向载阿霉素/印度墨水(DOX-ink-HER-NBs)多功能分子探针,评估其在乳腺癌动物模型成像诊断及治疗中的应用价值.方法 通过薄膜水化、碳二亚胺法制备DOX-ink-HER-NBs多功能纳米造影剂,检测其基本物理特性.通过激光共聚焦显像及流式细胞术检测靶向纳米分子探针体外靶向乳腺癌细胞能力.选取6周龄雌性BALB/c裸鼠构建乳腺癌移植瘤模型.将18只移植瘤裸鼠随机分为靶向组(DOX-ink-HER-NBs)、非靶向组(DOX-ink-NBs)和对照组(PBS),每组6只,通过尾静脉分别注射200μl DOX-ink-HER-NBs混悬液、DOX-ink-NBs混悬液、PBS,应用超声诊断仪及光声成像系统观察分子探针在裸鼠体内超声、光声双模态显像情况.通过激光共聚焦对组织冰冻切片的显像,观察分子探针在肿瘤组织内的分布.对18只移植瘤裸鼠尾静脉注射200μl DOX-ink-HER-NBs、DOX-ink-NBs、PBS,配合超声辐照,每3天注射治疗一次,持续治疗7次,观测分子探针抑制移植瘤生长的效果.结果 DOX-ink-HER-NBs分子探针粒径约(621.23±42.56)nm,电位约(-25.34±2.56)mV.流式细胞结果显示靶向组的体外寻靶率较非靶向组、对照组高[(71.64±9.32)％vs(16.99±4.84)％、(9.29±3.15)％],差异均有统计学意义(P均<0.0001).裸鼠移植瘤体内实验结果表明,与非靶向组和对照组相比,靶向分子探针能够大量聚集在肿瘤组织细胞周围.靶向组移植瘤部位的超声造影信号强度显著强于非靶向组及对照组[(60.33±4.51)dB vs(15.67±4.04)dB、(7.00±2.00)dB],差异均有统计学意义(P均<0.0001).与非靶向组及对照组比较,靶向组移植瘤的光声信号显像明显[(0.8567±0.0950)a.u.vs(0.3233±0.0950)a.u.、(0.1033±0.0153)a.u.],差异均有统计学意义(P=0.0002、<0.0001).与非靶向组和对照组相比,靶向组肿瘤抑制率最高[(62.93±6.96)％vs(22.73±8.05)％、(18.33±15.88)％],差异均有统计学意义(P=0.0043、0.0026).结论 本研究成功制备了DOX-ink-HER-NBs多功能分子探针.在赫塞汀的介导下纳米分子探针可聚集于靶组织,实现乳腺癌的超声及光声双模式分子成像,同时协同发挥抗肿瘤效应,为乳腺癌的分子诊断和可视化靶向治疗及疗效评估提供了新的思路.

目的:探讨HER-2在结肠癌中的表达情况及体外抗HER-2治疗对结肠癌细胞生物学活性的影响.方法:培养5株结肠癌细胞,RT-PCR法检测各株细胞中HER-2中表达情况,将曲妥珠单抗(赫塞汀)作用于HER-2高表达株HT-29细胞,MTT、凋亡实验、侵袭实验分别检测抗HER-2治疗对结肠癌细胞生物学活性的影响.结果:HER-2在部分结肠癌患者中高表达,且与肿瘤的浸润程度、是否有淋巴结转移及肿瘤TNM分期有关;Kaplan-Meier生存分析表明,HER-2高表达影响患者总体生存率,多因素分析表明TNM分期、HER-2表达是影响结肠癌患者预后的独立影响因素;HER-2在各结肠癌细胞中有不同程度的表达,抗HER-2药物能抑制肿瘤细胞生长,促进其凋亡并降低其侵袭性.结论:HER-2在少部分结肠癌患者中有高表达,HER-2检测及抗HER-2治疗可能改善患者的预后.