目的:探讨脓毒症小鼠中性粒细胞对T淋巴细胞（T细胞）功能的影响以及CD80/细胞毒性T淋巴细胞抗原-4（CTLA-4）途径在其中发挥的作用。方法:①体内实验：将6～8周龄雄性C57BL/6小鼠按照随机数字表法分为假手术组（Sham组， n＝20）、Sham+CTLA-4抗体处理组（Sham+aCTLA-4组， n＝20）、盲肠结扎穿孔术（CLP）致脓毒症模型组（CLP组， n＝30）和CLP+CTLA-4抗体处理组（CLP+aCTLA-4组， n＝30）。采用CLP制备小鼠脓毒症模型；Sham组不对盲肠进行结扎和穿孔，余操作同CLP组；CTLA-4抗体处理组分别于术后6 h、24 h腹腔注射CTLA-4抗体50 μg。术后48 h，Sham组、Sham+aCTLA-4组随机取6只小鼠，CLP组和CLP+aCTLA-4组随机取14只小鼠检测脾脏T细胞活化指标CD69的表达；并取脾脏、骨髓和外周血，应用流式细胞仪检测中性粒细胞表面CD80的表达；采用免疫荧光法和流式细胞仪检测脾脏T细胞表面CTLA-4的表达。各组其余小鼠用于观察术后96 h生存情况。②体外实验1：提取健康小鼠骨髓中性粒细胞，分别用LPS（1 mg/L）刺激4、8、12 h，每个时间点设置加入等量磷酸盐缓冲液（PBS）的对照组，检测各时间点CD80的表达。③体外实验2：提取健康小鼠脾脏T细胞，分为PBS对照组、LPS组（LPS终浓度1 mg/L）、中性粒细胞组和中性粒细胞+LPS组，后两组建立中性粒细胞与T细胞共培养模型后再给予相应处理，检测T细胞表面CTLA-4的表达；以上述4组为对照，再分别设置CTLA-4抗体处理组（CTLA-4抗体终浓度50 mg/L），48 h后采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测细胞上清液中白细胞介素-2（IL-2）水平。 结果:①体内实验结果：与Sham组比较，CLP组脾脏、骨髓、外周血中性粒细胞表面CD80表达均上调，T细胞表面CTLA-4表达明显增加〔（9.98±0.84）%比（3.48±0.64）%， P<0.05〕，说明脓毒症时中性粒细胞可能通过CD80/CTLA-4途径影响T细胞功能。与CLP组比较，CTLA-4抗体可明显提高CLP小鼠96 h累积生存率（56.25%比18.75%， P<0.05），增加T细胞表面CD69的表达，说明CTLA-4抗体可能会促进脓毒症时T细胞活化，并提高生存率。②体外实验结果：随LPS刺激时间延长，中性粒细胞表面CD80表达较PBS对照组明显增加，并呈一定时间依赖性〔4 h：（6.35±0.40）%比（3.41±0.40）%，8 h：（8.57±0.64）%比（3.09±0.27）%，12 h：（19.83±1.06）%比（5.16±0.36）%，均 P<0.05〕。与PBS对照组比较，单纯LPS刺激对CD4 +/CD8 + T细胞表面CTLA-4的表达没有明显影响，而与中性粒细胞共培养后CTLA-4的表达明显增加〔CD4 +：（4.92±0.30）%比（3.33±0.25）%，CD8 +：（4.26±0.21）%比（2.53±0.66）%，均 P<0.05〕，与LPS刺激的中性粒细胞共培养后CTLA-4表达的增加趋势则更加明显〔CD4 +：（6.34±0.50）%比（3.33±0.25）%，CD8 +：（6.21±0.41）%比（2.53±0.66）%，均 P<0.05〕。在PBS对照组和LPS组中，CTLA-4抗体对T细胞分泌IL-2无明显影响。与PBS对照组比较，与中性粒细胞共培养能抑制T细胞分泌IL-2（ng/L：1 938.00±68.45比2 547.00±218.00， P<0.05），与LPS刺激后中性粒细胞共培养则抑制作用更明显（ng/L：1 073.00±34.39比2 547.00±218.00， P<0.05）；而CTLA-4抗体的加入可部分恢复IL-2的分泌。说明中性粒细胞在促进T细胞表面CTLA-4表达后，可能通过减少IL-2生成来介导T细胞功能抑制。 结论:脓毒症时中性粒细胞可介导T细胞功能障碍，而CD80/CTLA-4途径在其中发挥了重要作用。拮抗CTLA-4后，脓毒症小鼠生存率和T细胞功能明显改善，这可能会成为脓毒症免疫治疗的新方法。

目的:观察耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）脓毒症患者外周血自然杀伤（NK）细胞亚群和功能，探讨基质金属蛋白酶（MMP）对MRSA脓毒症患者NK细胞功能的影响。方法:选择2017年1月至2018年6月本科收治的MRSA脓毒症患者21例和健康对照者（NC）11例，分离外周血单个核细胞（PBMC），流式细胞术检测NK细胞亚群比例。通过检测PBMC与靶细胞共培养体系中CD107a、CD69、CD16的表达评估NK细胞功能。分选NK细胞，实时定量PCR法检测MMP mRNA，使用MMP抑制剂刺激NK细胞，检测共培养体系中CD107a变化。组间比较采用成组 t检验或配对 t检验。 结果:总NK细胞比例在NC和MRSA脓毒症患者之间的差异无统计学意义（ P>0.05），MRSA脓毒症患者CD56brightCD16-NK细胞[（5.36±1.02)% vs (4.30±0.89)%]和CD56-CD16+NK细胞[（24.04±2.92）% vs （9.70±1.54）%]升高（ P<0.05），CD56dimCD16+NK细胞（71.22±13.03）% vs （87.64±7.05%）]降低（ P<0.01）。NK细胞通过不同受体介导相应靶细胞杀伤后，MRSA脓毒症患者NK细胞中CD107a[（33.55±3.84）% vs （25.34±6.20%）]和CD69[（14.96±1.47%） vs （18.80±1.49）%]比例低于NC（ P<0.01），CD16 MFI[（247.1±50.31） vs （189.4±57.54）]高于NC（ P<0.01）。MMP-1/2/3/9 mRNA在MRSA脓毒症患者NK细胞中的相对表达量升高（ P<0.01）。抑制MRSA脓毒症患者NK细胞MMP使CD107a比例升高[（33.67±8.03%） vs （25.87±6.23）%， P=0.018]。 结论:MRSA脓毒症患者存在NK细胞亚群失衡和功能衰竭，这可能与MMP诱导的抗体依赖细胞介导的毒性作用降低有关。

目的:探讨顺铂对胃癌SGC-7901细胞程序性死亡因子配体1（PD-L1）表达及淋巴细胞调控胃癌细胞增殖功能的影响。方法:将胃癌SGC-7901细胞用不同浓度顺铂（0、0.5、1.0、2.0和4.0 mg/L）处理，MTT检测SGC-7901细胞的增殖情况；流式细胞术检测SGC-7901细胞表面PD-L1的表达情况。将顺铂预处理前后的SGC-7901细胞与活化的淋巴细胞进行共孵育，共分为三组：A组为单独淋巴细胞；B组为未经顺铂处理的SGC-7901与淋巴细胞共孵育；C组为经顺铂处理的SGC-7901与淋巴细胞共孵育。流式细胞术检测各分组中CD 4+和CD 8+T细胞的凋亡情况；抗体依赖细胞介导的细胞毒性作用（ADCC）法计算SGC-7901细胞的溶解率。 结果:MTT检测结果显示，不同浓度顺铂处理SGC-7901细胞48 h后，顺铂抑制SGC-7901细胞的增殖效应呈浓度依赖性（ F=128.35， P<0.05）；SGC-7901细胞分别经0、0.5、1.0、2.0和4.0 mg/L顺铂处理后，细胞表面PD-L1的表达均上调，且超过1.0 mg/L顺铂处理又开始下降（ F=477.79， P<0.05）；顺铂处理SGC-7901细胞后与淋巴细胞共孵育，可增加CD 4+和CD 8+ T细胞的凋亡率（ F=524.98、122.47， P<0.05）；效应细胞外周血单个核细胞与靶SGC-7901细胞共孵育时，顺铂可介导外周血单个核细胞对SGC-7901细胞的杀伤活性，即有ADCC效应，且顺铂可减弱该杀伤活性（ t=15.961， P<0.05）。 结论:顺铂可能通过诱导胃癌SGC-7901细胞PD-L1的表达，抑制外周血单个核细胞对胃癌SGC-7901细胞的杀伤活性，减弱胃癌细胞的死亡。

目的:观察斑秃患者外周血自然杀伤（NK）细胞亚群和白细胞介素18（IL-18）变化，评估IL-18对NK细胞活性的调控。方法:收集2019年12月至2021年1月在山西省人民医院就诊的67例斑秃患者和25例健康志愿者，分离外周血单个核细胞（PBMC）和血浆，采用流式细胞仪检测PBMC中NK细胞亚群比例，酶联免疫吸附试验检测血浆IL-18水平。使用重组人IL-18刺激PBMC，建立PBMC与721.221细胞、K562细胞、P815-Ab细胞共培养体系，检测NK细胞中CD107a表达细胞比例和CD16表达细胞荧光强度，评估NK细胞功能。组间比较采用 t检验或配对 t检验。 结果:斑秃组CD56 +CD16 -NK细胞比例（8.12% ± 3.14%）低于对照组（10.78% ± 4.08%， t = 3.33， P = 0.001），CD56 +CD16 +NK细胞比例（46.08% ± 15.21%）高于对照组（32.14% ± 10.45%， t = 4.22， P < 0.001），CD56 -CD16 +NK细胞比例（28.81% ± 8.65%）与对照组（27.09% ± 7.62%）比较差异无统计学意义（ t = 0.88， P = 0.383）。斑秃组血浆IL-18水平（112.0 ± 23.72 pg/ml）高于对照组（99.34 ± 15.15 pg/ml， t = 2.48， P = 0.015）。斑秃组NK细胞与721.221细胞、K562细胞和P815-Ab细胞共培养后表达CD107a细胞比例（9.53% ± 1.70%、5.15% ± 1.35%、6.50% ± 1.64%）均高于对照组（5.00% ± 1.17%、4.40% ± 1.09%、5.13% ± 1.36%，均 P < 0.05）。P815-Ab细胞刺激后，斑秃组CD16阳性NK细胞荧光强度（151.10% ± 59.30%）低于对照组（221.90% ± 93.56%， t = 4.31， P < 0.001）。IL-18刺激后，与721.221细胞共培养的NK细胞CD107a表达比例高于未刺激组（14.47% ± 2.67%、9.93% ± 1.94%， t = 6.00， P < 0.001）；与K562细胞和P815-Ab细胞共培养的NK细胞CD107a表达比例与未刺激组比较差异无统计学意义（ P > 0.05）。 结论:斑秃患者IL-18通过增加自然杀伤毒性受体介导的细胞毒性，增强NK细胞活性。

目的:探讨和比较人CD55(hCD55)转基因猪外周血单个核细胞(PBMC)表面表达的hCD55对兔补体和人补体依赖的细胞毒(CDC)的抑制效果。方法:选择来自同一品系的3头α1，3-半乳糖转移酶基因敲除猪(GTKO)。其中两头猪转入了hCD55基因。根据三头猪PBMC表面hCD55表达水平，分为GTKO、hCD55低表达(GTKO/hCD55 Low)和hCD55高表达(GTKO/hCD55 High)猪。将3头猪的PBMC分别与灭活补体的混合人血清(20例份)孵育后，流式细胞仪检测兔补体或人补体依赖的细胞毒以及猪PBMC的抗体(IgM和IgG)结合水平。 结果:3头猪PBMC与人血清异种抗体的结合无明显差异。兔补体和人补体对GTKO猪PBMC的细胞毒均较高，分别为98.97%±0.50%和82.73%±3.20%。与GTKO组相比，低表达hCD55对兔补体依赖的细胞毒无明显抑制作用97.07%±2.25%比98.9%±0.50%， P＝0.2267)，而高表达hCD55对兔补体依赖的细胞毒有轻度的抑制作用(81.70%±5.86%比98.9%±0.50%， P＝0.0355)。不同的是，低表达hCD55对人补体依赖的细胞毒有显著的抑制作用(23.83%±3.53%比82.73%±3.20%， P<0.0001)；高表达hCD55对人补体依赖的细胞毒较低表达hCD55有进一步抑制作用(2.79%±0.45%比82.73%±3.20%， P＝0.009)，使之达到阴性对照组水平。低表达或高表达hCD55对人补体介导CDC的抑制作用均优于对兔补体介导CDC的抑制作用。 结论:相较于传统使用兔补体的CDC技术，使用商品化标准人补体的CDC技术评价GTKO/hCD55基因工程猪细胞表面hCD55对受者补体激活的调节作用具有明显优势。本研究对在异种移植走向临床后，建立能有效评估hCD55功能的CDC实验体系提供了实验依据。

目的:探讨人表皮生长因子受体-2(human epidermal growth factor receptor 2，HER2)蛋白的哪种结构域更适合激发赫赛汀抗体依赖的细胞介导的细胞毒性(antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity，ADCC)效应。方法:真核表达五种包含HER2胞外段不同结构域的蛋白，即HER2-Fc、HER2-His、T23-561-Fc、T276-T652-Fc、T276-T652-His。通过十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis，SDS-PAGE)对蛋白相对分子质量及纯度进行检测。酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)检测这些蛋白与赫赛汀的结合能力。自然杀伤(natural killer，NK)细胞活化实验比较这五种蛋白增强赫塞汀ADCC效应的能力差异。结果:成功获得纯度较高的蛋白。ELISA结果显示HER2-Fc，HER2-His和T276-T652-His都表现出较好的结合能力，T276-T652-Fc结合较差，T23-561-Fc则完全不结合。此外，HER2-Fc、HER2-His、T276-T652-Fc、T276-T652-His、T23-561-Fc的EC50值分别为0.16、0.17、0.16、0.15、1.12。NK细胞活化实验结果显示HER2-Fc和T276-T652-His能显著增强赫赛汀刺激NK细胞脱颗粒和分泌干扰素-γ(interferon-γ，IFN-γ)的效应，HER2-Fc组CD107a表达量最高可达61.50%，IFN-γ的分泌可达38.10%。T276-T652-His组CD107a的表达最高可达63.00%，IFN-γ的分泌可达43.10%，与HER2-Fc作用相当。该效应呈浓度梯度依赖性，蛋白低浓度0.5 μg/mL时，赫赛汀的ADCC效应降低，且组间差异有统计学意义( t值分别为4.21、4.24、6.51、3.17、3.44、3.05、3.34、2.82、8.55、11.52、4.50、2.96、5.58、6.03、3.77、4.42， P值均<0.05)。 结论:验证了T276-T652-His具有增强赫赛汀ADCC功能的作用，且与HER2-Fc相当，为后续将HER2蛋白用于肿瘤免疫治疗研究打下了基础。

目的:通过体外T细胞识别自体树突状细胞(dendritic cell，DC)加工递呈的乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)特异性抗原，探讨靶向HBV-C、E、X基因的细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocytes，CTLs)对体外靶细胞的特异性杀伤效应。方法:利用基因重组技术分别将HBV-C、HBV-E、HBV-X三种抗原负载至腺相关病毒(adeno-associated virus，AAV)上，获得重组腺相关病毒(recombinat adeno-associated virus，rAAV)。通过Ficoll法分离得到外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells，PBMC)，经HBV-C-rAAV、HBV-E-rAAV、HBV-X-rAAV分别转染单核细胞并诱导分化为成熟DC。上述DC分4组，分别为阴性对照组(未转染组)和HBV-C-rAAV/DC、HBV-E-rAAV/DC、HBV-X-rAAV/DC组(转染组)。通过流式细胞术检测rAAV的转染率，并检测DC表面的标志分子和DC分泌的细胞因子白细胞介素(interleukin，IL)-10、IL-12。将体外培养的T细胞分别与未转染组DC、HBV-C-rAAV/DC、HBV-E-rAAV/DC、HBV-X-rAAV/DC混合，利用混合淋巴细胞反应收获CTLs，利用流式细胞术检测CTLs表面的标志分子以及分泌的细胞因子干扰素-γ(interferon-γ，IFN-γ)，并用 3H-TdR掺入法检测T细胞的体外增殖能力。通过 51Cr释放实验计算CTLs对靶细胞的杀伤率。 结果:对照组和转染组(HBV-C-rAAV/DC、HBV-E-rAAV/DC、HBV-X-rAAV/DC)中，HBV抗原阳性的DC比例分别为2.80%、85.12%、96.63%、98.42%。转染组中表达CD80的DC比例分别是55.26%、58.25%、59.63%，表达CD83的比例分别是43.19%、48.73%、40.01%，表达CD86的比例分别是95.46%、96.74%、83.62%，分泌IL-12的比例分别是47.60%、52.50%、69.20%。经转染组DC诱导产生的T细胞亚群中，CD8 +CD69 +T细胞的比例分别为33.10%、31.50%、30.00%，CD4 +CD25 +T细胞的比例分别为11.89%、8.77%、10.87%，分泌IFN-γ的比例分别为44.65%、45.16%、45.16%，T细胞体外增殖力(cpm值)分别为19 351、19 070、26 428。经转染组DC诱导产生CTLs对HBV抗原阳性的原代肝癌细胞(hepatoma cancer cells，HCC)组的杀伤率分别为61.18%、56.93%、65.05%，对HBV抗原阴性的宫颈癌细胞组的杀伤率分别为4.62%、3.69%、4.34%，对HCC+HBV抗体封闭组的杀伤率分别为34.90%、27.39%、30.66%，对HCC+主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex，MHC)-Ⅰ类分子抗体封闭组的杀伤率分别为17.83%、21.47%、23.71%。转染组DC诱导产生的CTLs能有效杀死HBV抗原阳性的靶细胞，在抗原表达下降后，其杀伤能力显著减弱，MHC-Ⅰ类分子的缺失也会导致CTLs杀伤能力的明显降低。 结论:健康人外周血中分离出的单核细胞和淋巴细胞，可在体外通过特定细胞因子的诱导、携带不同HBV基因片段的rAAV的转染和细胞共培养，最终获得HBV特异性杀伤能力显著增强的CTLs，且该类T细胞具有很强的细胞增殖能力，有利于持续杀伤靶细胞；CTLs对靶细胞的杀伤作用依赖于HBV抗原和MHC-Ⅰ类分子的表达。

在过去40年里,单克隆抗体作为治疗性生物制品已在肿瘤学、血液学、自身免疫性疾病以及感染性疾病中发挥了重大作用.目前上市的治疗性单克隆抗体基本是免疫球蛋白G(IgG)类抗体,而近年来人们发现免疫球蛋白A(IgA)似乎也能发挥等同的作用,其独特的结构和体内分布、介导抗体依赖的细胞介导的细胞毒性作用(antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity,ADCC)时招募不同于IgG的效应细胞以及参与免疫系统调节都表明了IgA抗体有望成为新型治疗性抗体.本文就IgA的生物学特性、在疾病中的应用以及作为治疗性抗体现阶段存在的一些技术限制进行综述.

自然杀伤(Natural kill,NK)细胞是一种固有免疫淋巴样细胞(Innate lymphoid cell,ILP),是除T细胞、B细胞之外的第三大类淋巴细胞,其特征是无需抗原预先致敏即可快速反应产生非特异性杀伤效果.NK细胞通过分泌穿孔素、颗粒酶、细胞因子和趋化因子等使靶细胞凋亡,还可表达Fc受体(CD16),介导抗体依赖的细胞介导的细胞毒性作用(Antibody-dependent cell-medicated cytotoxicity,ADCC).随着年龄增长免疫系统出现功能减退,NK细胞启动适应性免疫应答障碍,不能调动有效免疫反应等生理现象,导致与衰老有关疾病如感染和肿瘤等发生.本文就NK细胞亚群在整个生命周期中的生物学变化来探讨NK细胞与机体衰老的关系,为NK细胞的临床应用打下基础.

抗体偶联药物(ADC)是一类通过连接头将细胞毒药物连接到单克隆抗体的靶向生物制剂,以单克隆抗体作为载体将小分子细胞毒药物以靶向方式高效地运输至目标细胞中.ADC与抗原阳性肿瘤细胞结合,通过特异性抗体介导途径进入肿瘤细胞内,在溶酶体和蛋白水解酶的作用下,ADC发生裂解,释放出细胞毒药物破坏微管蛋白等结构诱导细胞凋亡.另外,ADC还可以发挥"旁观者效应",进入邻近肿瘤细胞或破坏肿瘤微环境介导肿瘤细胞死亡.当肿瘤细胞表面特异性抗原是激酶受体或是参与肿瘤细胞生长、分化和增殖等信号转导的分子时,ADC中的抗体部分与之结合后,便可阻滞抗原受体下游信号转导通路,抑制肿瘤细胞增殖;同时,ADC也可通过抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用及补体依赖的细胞毒作用诱导细胞死亡.相对于传统的细胞毒药物,ADC使得其负载的细胞毒药物具有了选择性分布的特点,在细胞内高效释放毒性成分的同时降低了对非靶点细胞的杀伤作用,有效提高了治疗的获益风险比.在乳腺癌领域,曲妥珠单抗-美坦新(T-DM1)是第一个获批上市的靶向人表皮生长因子受体2(HER-2)的ADC,用于HER-2阳性乳腺癌的临床治疗.目前,全球范围内除T-DM1外,曲妥珠单抗-德鲁替康和戈沙妥珠单抗也获批用于乳腺癌治疗,还有100多种ADC正处在研究中.从早期乳腺癌到晚期乳腺癌,ADC在乳腺癌的治疗中的作用越来越重要,乳腺癌的治疗格局也因之而发生改变.文章就近年来ADC应用于乳腺癌治疗的进展进行综述.