[目的]运用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱串联质谱(UHPLC-QE-MS)技术分析橘荔散结丸醇提物的化学成分,并探讨其对子宫肌瘤细胞增殖的抑制作用及机制.[方法](1)以UHPLC-QE-MS技术分析橘荔散结丸醇提物化学成分.(2)培养原代人子宫肌瘤细胞.采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)测定不同浓度橘荔散结丸醇提物处理不同时间后的细胞增殖抑制率,并筛选后续实验中其2个高、低浓度.实验分为空白对照组,二甲基亚砜(DMSO)组,米非司酮组及橘荔散结丸醇提物高、低浓度组,分别给予相应处理后,采用流式细胞术检测细胞周期,Western Blot或定量聚合酶链反应(qPCR)法分别检测细胞Wnt/糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路关键蛋白Wnt 5b、GSK-3β、p-GSK-3β、β-catenin、表皮生长因子受体(EGFR)和基质金属蛋白酶2(MMP2)的蛋白、mRNA表达水平.[结果]鉴别橘荔散结丸醇提物主要化学成分91个,橘荔散结丸醇提物冻干粉与中成药橘荔散结片主要化学成分共有22个.橘荔散结丸醇提物各浓度组细胞增殖抑制率均大于空白对照组(P<0.05);橘荔散结丸醇提物高、低浓度组及米非司酮组G0/G1期细胞数均大于空白对照组,而G2/M期细胞数小于空白对照组(P<0.05);橘荔散结丸醇提物高、低浓度组及米非司酮组Wnt 5b、β-catenin、EGFR、MMP2蛋白、mRNA表达水平均低于与空白对照组(均P<0.05),而GSK-3β蛋白及mRNA表达水平与空白对照组无显著性差异(P>0.05).[结论]UHPLC-QE-MS技术分离橘荔散结丸醇提物化学成分众多,主要成分具有氧化应激调节作用;橘荔散结丸醇提物可有效抑制子宫肌瘤细胞增殖,其分子机制与抑制Wnt/GSK-3β/β-catenin信号通路关键蛋白表达,进而干预子宫肌瘤细胞微环境氧化应激反应有关.

目的:运用超高效液相串联四极杆-静电场轨道阱高分率质谱分析技术分析鉴定痔血安合剂的化学成分,以及小鼠灌胃后主要入血成分.方法:取健康雄性C57/BL6J小鼠9只,分为空白组(3只)和痔血安合剂组(6只),空白组灌胃超纯水,痔血安合剂组按27.2mL·kg-1剂量灌胃痔血安合剂,分别在给药后1,3 h各处理3只,收集血清,采用蛋白沉淀的方法进行样品前处理.色谱分离采用Acquity UPLC BEH C18色谱柱(100 mm× 2.1 mm,1.7 μm),以0.1％甲酸水溶液-甲醇为流动相体系,梯度洗脱.质谱采用正负离子一级全扫描/数据依赖二级扫描模式(Full MS/dd-MS2),一级全扫描设置分辨率70 000,二级设置分辨率17 500,隔离窗口 1 m/z,归一化碰撞能量(NCEs)为10％、20％和40％采集原方及血清样本数据.经Xcalibur 3.0软件获取色谱保留时间以及母离子和碎片离子信息,通过对照品比对、文献参考相关等成分检测信息,实现对痔血安合剂化学成分及入血原型的鉴定.结果:该研究从痔血安合剂中共鉴定出207种化学成分,包括黄酮类84种、萜(皂苷)类41种、生物碱类16种、有机(酚)酸类26种、苯酞类13种、色原酮类9种、苯乙醇苷类4种、香豆素类4种、木酯素类3种、苯丙素类2种及其他类5种.小鼠口服痔血安合剂后血清中检测到52种原型成分.结论:高分辨质谱方法快速鉴定了痔血安合剂化学成分及主要入血成分,可为痔血安合剂效应物质的解析及作用机制研究提供部分参考.

目的 运用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱串联质谱(UHPLC-QE-MS)技术分析橘荔散结丸的药物成分,围绕核因子-κB(NF-κB)信号通路探讨橘荔散结丸诱导子宫肌瘤细胞凋亡的炎症机制.方法 ①采用UHPLC-QE-MS技术分析橘荔散结丸化学成分.②培养原代人子宫肌瘤细胞,免疫组化法进行鉴定.实验分为 5 组,空白组常规培养,基质组加入0.05%DMSO培养,米非司酮组加入1×10-5mol/L米非司酮含药液培养,橘荔散结丸高、低浓度组分别加入2 mg/mL和1 mg/mL橘荔散结丸含药液培养.采用流式细胞术检测子宫肌瘤细胞凋亡率,采用Western blot法检测子宫肌瘤细胞中IKKα、IKBα、p-IKBα、p65、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)蛋白表达情况,采用qPCR技术检测子宫肌瘤细胞中IKKα、IKBα、p65、TNF-α、IL-6 mRNA表达量.结果 鉴别橘荔散结丸主要化学成分 91 个,冻干粉与中成药间共有22 个.米非司酮组和橘荔散结丸高、低浓度组子宫肌瘤细胞早期凋亡率和晚期凋亡率均明显高于空白组和基质组(P均<0.05),且米非司酮组、橘荔散结丸高浓度组早期凋亡率和晚期凋亡率均明显高于橘荔散结丸低浓度组(P均<0.05),橘荔散结丸高浓度组早期凋亡率明显高于米非司酮组(P<0.05).橘荔散结丸高浓度组和米非司酮组子宫肌瘤细胞中IKKα、p-IKBα、p65、TNF-α蛋白相对表达量均明显高于空白组和橘荔散结丸低浓度组(P均<0.05),且橘荔散结丸高浓度组和米非司酮组子宫肌瘤细胞中IL-6 蛋白相对表达量均明显高于空白组(P均<0.05);橘荔散结丸高浓度组子宫肌瘤细胞中p-IKBα、p65、IL-6 蛋白相对表达量均明显低于米非司酮组(P均<0.05).米非司酮组、橘荔散结丸高浓度组、橘荔散结丸低浓度组子宫肌瘤细胞中 IKKα、IKBα、p65、IL-6 mRNA相对表达量和米非司酮组、橘荔散结丸高浓度组TNF-α mRNA相对表达量均明显高于空白组(P均<0.05);橘荔散结丸高浓度组和米非司酮组IKBα、p65、IL-6 mRNA相对表达量均明显高于橘荔散结丸低浓度组(P均<0.05).结论 橘荔散结丸化学成分具有抗炎免疫调节作用,其治疗子宫肌瘤分子机制与干预肌瘤细胞微环境炎症反应密切相关.

目的 采用高效液相色谱串联高分辨质谱法建立无创检测角质层神经酰胺(Cer)种类及其他脂类的分析方法.方法 本实验选取4例健康人,应用氰基丙烯酸酯黏贴法取角质层皮肤样品,鉴定角质层神经酰胺种类,采用thermo Q-Exactive四极杆-静电场轨道阱高分辨FT质谱,Ultimate3000高效液相色谱仪,BEH C18(100 ×2. lmm,1.7μm)色谱柱,柱温40℃,流动相 A = 60:40 ACN/H20 + 10mmol/L NH4HC02,0.1％ HC02H;B = 90:10 IPA/ACN + 10mmol/L NH4HC02,0.1％ HC02H.反向色谱柱,流速为0.3mL/min,梯度洗脱.质谱检测中采用电喷雾离子源(ESI),Full Mass ddMS2模式,一级分辨率70 000,二级分辨率17 500.数据采集后用全流程脂质分析软件(LipidSearch)进行数据分析.结果 实验对4个皮肤样品进行12种目标神经酰胺亚类半定量过程,可看出Q Exactive均能提到峰,且响应强度在105～107之间.对样品分别进行了正离子和负离子采集,Lipid Search软件进行搜库,除目标脂质外,正离子鉴定出高达300种以上其他脂质结果,以神经酰胺类和甘油三酯类为主;负离子鉴定出30种以上,均为神经酰胺类.结论 Q Exactive超高分辨液质联用及Lipid Search脂质组学软件可鉴定出表皮12亚类神经酰胺及其他脂质,高效灵敏,为后期健康或皮损表皮神经酰胺及其他脂类的定量分析奠定了基础,提供了简单快速的方法.

目的 应用超高效液相串联-四极杆静电场轨道阱质谱(UHPLC-Q-Orbitrap)联用技术,分析荷叶中的化学成分.方法 采用Thermo Scientific Hypersil GOLD aQ(2.1 mm×100 mm,1.9 μm)色谱柱和0.1％甲酸乙腈溶液(A)-0.1％甲酸水溶液(B)为流动相系统进行梯度洗脱;应用电喷雾离子源搭配静电场轨道阱(orbitrap)检测器正负离子模式检测荷叶中的化学成分.结果 根据一级高分辨率质谱精确质荷比数据、二级高分辨率质谱碎片离子、Thermo Scientific中药成分数据库和mzCloud网络数据库并结合文献报道,从荷叶中共分析鉴定了53个化学成分,其中包括黄酮类21个,生物碱类13个,萜类5个,香豆素类3个,氨基酸类3个,木脂素类2个,其他类成分6个.结论 应用UHPLC-Q-Orbitrap联用技术结合Thermo Scientific推出的中药成分数据库和mzCloud网络数据库的数据处理软件Compound Discoverer,利用Mass Frontier对数据进行辅助解析,可以较为全面地阐明荷叶中的化学成分,为进一步研究荷叶的全面质量控制方法、体内吸收和代谢过程以及药效物质基础提供科学依据.

超高效液相色谱串联四极杆静电场轨道阱质谱(UPLC-Q-Exactive Orbitrap MS)技术是近几年发展起来的新型液质联用技术,具有分辨率高、质量精度好、定性和定量能力强等特点.该技术已广泛应用于化学药品、食品、农副产品和化妆品等领域,同时在中药分析领域也展现出了极大的应用前景.该文从中药成分分析、中成药及保健品非法添加物的筛查和中药代谢组学分析三个方面,就近几年UPLC-Q-Exactive Orbitrap MS技术在中药分析中的应用进行综述.

目的 基于超高效液相色谱和高分辨质谱建立同时检测莫西沙星中5种亚硝胺类基因毒性杂质的定量分析方法.方法 采用ACE Excel 1.7 C18-PFP(100 mm×2.1 mm,1.7 μm)色谱柱,0.1％甲酸水-甲醇为流动相,0.3 mL·min-1的流速进行梯度洗脱.采用四极杆高分辨静电场轨道阱质谱在电喷雾正离子条件下运用平行反应监测模式对5种亚硝胺类化合物进行定量检测.结果 5种亚硝胺类基因毒性杂质的定量限均≤0.5 ng·mL-1.NPYP、NEMA和NDEA的标准曲线在1.0～100 ng·mL-1(NPIP和NDBA为0.1～100 ng·mL-1)呈良好线性关系(R2≥0.998).该方法在盐酸莫西沙星药物中的回收率为93.1％～114.1％,RSD为0.7％～4.6％.结论 本方法结果准确、灵敏度高、重复性好,适用于盐酸莫西沙星中亚硝胺类基因毒性杂质的含量检测.

目的:建立超高效液相串联-四极杆静电场轨道阱质谱(UPLC-Q-Orbitrap)与多种数据解析方式对玉竹化学成分进行快速鉴定,为进一步阐明其药效物质基础和全面质量控制提供参考.方法:采用Thermo Scientific Hypersil GOLD aQ(2.1 mm×100 mm,1.9μm)色谱柱在0.1％甲酸乙腈溶液(A)-0.1％甲酸水溶液(B)流动相中进行梯度洗脱;以电喷雾离子源搭配静电场轨道阱(Orbitrap)检测器正负离子模式对玉竹中的化学成分进行检测.根据一级高分辨率质谱精确质荷比数据、二级高分辨率质谱碎片离子、Thermo Scientific中药成分数据库和mzCloud网络数据库并结合文献报道,对化学成分进行鉴定.结果:从玉竹中共分析鉴定了37个化学成分,其中包括生物碱类9个,黄酮类8个,氨基酸类4个,糖苷类3个,木脂素类2个,萜类1个,有机酸类1个,其他类成分9个.结论:应用液质联用结合数据库对玉竹进行全成分分析,可为进一步研究玉竹的全面质量控制方法、体内吸收和代谢过程以及药效物质基础提供了科学依据.