目的:建立硫酸吗啡及其制剂杂质谱分析的超高效液相色谱法(UHPLC法).方法:使用ACQUITY UPLC HSS C18(100 mm × 2.1 mm,1.8 μm)色谱柱,以 0.101％庚烷磺酸钠溶液(用 50％磷酸溶液调节pH至2.6)和甲醇为流动相,梯度洗脱,柱温35 ℃,流速0.3 mL·min-1,检测波长230 nm.结果:本方法可实现磷酸可待因(杂质A)、伪吗啡(杂质B)、东罂粟碱(杂质C)、10-羟基吗啡(杂质D)、吗啡酮(杂质E)、吗啡氮氧化物(杂质F)和14-羟基吗啡酮(杂质G,基因毒性杂质)之间及其他相邻杂质之间的良好分离,UHPLC的使用,大大减少了分析时间和有机溶剂甲醇的消耗量,更为绿色环保.结论:该方法首次将硫酸吗啡各已知杂质和14-羟基吗啡酮在UHPLC条件下同时分离,专属性良好,并用校正因子法对原料药和制剂中的7个已知杂质进行准确定量,且可同时测定硫酸吗啡原料药及其制剂硫酸吗啡缓释片中的有关物质,为原料药的选择和制剂工艺的控制提供技术依据.

目的 采用GC-MS/MS法建立一种同时测定阿加曲班中N-亚硝基二甲胺(NDMA)和N-亚硝基二乙胺(NDEA)含量的方法.方法 以 Agilent DB-WAX UI(30 m×0.25 mm×0.25μm)气相色谱柱分离,离子源为电子轰击电离源(EI),在多反应离子监测(MRM)模式下检测,按外标法建立标准曲线测定阿加曲班中两种杂质的含量.结果 NDMA和NDEA分别在19.20～128.00 ng·mL-1和5.36～35.73 ng·mL-1与峰面积线性关系良好;NDMA和NDEA的定量限分别为19.20ng·mL-1和5.36 ng·mL-1,检测限分别为6.40 ng·mL-1和1.79 ng·mL-1.NDMA和NDEA低、中、高浓度的平均回收率分别为110.2％、107.8％、107.2％(RSD为 3.2％,n=3)和 114.7％、107.3％、107.6％(RSD为 5.6％,n=3).结论 该方法操作简单,能够有效测定阿加曲班中NDMA和NDEA的含量.

目的 评价布美他尼杂质N-亚硝基布美他尼的体内致突变风险和肝细胞DNA损伤风险.方法 SD大鼠随机分为6组,分别为:溶媒对照组(溶媒为0.5%羧甲基纤维素钠),N-亚硝胺布美他尼100、300、1 000 mg·kg-1 剂量组,阳性对照组1[N-乙基-N-亚硝基脲(ENU),40 mg·kg-1]、阳性对照组 2[甲磺酸乙酯(EMS),200 mg·kg-1].2 个阳性对照组均为每组 6 只动物,其余每组 12 只动物.大鼠连续14 d经口灌胃给予受试物N-亚硝胺布美他尼.首次给药后约14 d和约 28 d后采集外周血用于Pig-a基因突变率检测,末次给药后约 3 h取肝细胞开展彗星试验.结果 试验期间给予N-亚硝基布美他尼未导致异常临床症状和动物体重及摄食量改变.100、300、1 000 mg·kg-1 剂量组动物肝细胞平均tail%DNA值(平均数/中位数)分别为2.90±0.38/2.34±0.46、3.58±0.27/2.87±0.51、3.45±0.59/2.21±1.44,与溶媒对照组相应数值相比未见差异,且无明显剂量效应相关性.首次给药后14 d,100、300、1 000 mg·kg-1 剂量组动物平均RBCCD59-和RETCD59-百万分之发生率(RBCCD59-百万分之发生率/RETCD59-百万分之发生率)分别为2.9±1.6/1.2±0.8、2.8±2.4/1.3±1.5、2.4±1.0/1.3±1.5;首次给药后28 d,100、300、1 000 mg·kg-1 剂量组动物RBCCD59-百万分之发生率/RETCD59-百万分之发生率分别为5.1±1.5/2.2±0.6、4.3±1.5/3.5±3.6、4.8±2.4/2.5±2.7.上述数值与相同时间点溶媒对照组相比均未见差异,且经统计学分析未见剂量效应相关性.结论 连续经口给予N-亚硝基布美他尼 14 d,SD大鼠的最大耐受量高于1 000 mg·kg-1,未检出外周血基因突变风险和肝细胞DNA损伤风险.研究数据可为药品中遗传毒性杂质的合理监管和含N-亚硝基杂质药物的安全使用提供数据支持.

目的 本研究利用药源性斑马鱼胃肠道毒性反应模型,比较分析头孢唑林及其杂质F和杂质A诱导的胃肠道毒性反应及其机制.方法 荧光显微镜下活体观测头孢唑林、杂质F和杂质A对斑马鱼幼鱼胃肠道排空过程的影响,评价其毒性反应,比较分析3种化合物结构与毒性关系;利用RNA-seq技术分析3种化合物胃肠道毒性反应机制的差异;利用分子对接模拟分析3种化合物与胆汁盐外排蛋白(BSEP)蛋白结合亲和力.结果 杂质F胃肠排空能力明显大于头孢唑林,杂质A的胃肠排空能力明显小于头孢唑林,MMTD结构是头孢唑林导致胃肠道毒性反应的主要毒性功能基团;RNA-seq分析发现杂质F处理组分别与头孢唑林和杂质A处理组相比较具有45个共同呈显著差异的基因,主要显著富集在矿物质吸收通路和胆汁分泌通路中,其中abcb11b基因的表达与胃肠道毒性反应呈明显相关;分子对接结果显示杂质F与斑马鱼BSEP的亲和力高于头孢唑林,头孢唑林的结合亲和力高于杂质A.结论 临床中头孢唑林钠的胃肠毒性反应可能与产品中杂质F有关,通过药物和杂质与BSEP蛋白结合的亲和力可以评估头孢唑林杂质引起的胃肠道毒性反应的差异,可为头孢唑林钠的生产工艺评估和质量控制提供理论依据.

目的 评价国内上市的注射用头孢唑钠整体的质量状况.方法 按照法定标准检验结合探索性研究,包括对产品的有关物质、聚合物、残留溶剂、2-巯基苯并噻唑、成盐率等关键质量属性的考察,综合评价产品的质量及现行质量标准对产品质量的可控性.结果 抽取的238批样品,按法定标准检验,合格率为100.0％.探索性研究结果表明,法定标准在杂质控制、聚合物测定等方面存在一定不足;个别企业样品醋酸残留超出限度;部分企业样品检出基因毒性杂质2-巯基苯并噻唑;不同企业样品成盐率无明显差异.结论 国内上市的注射用头孢唑肟钠总体质量较好;现行标准需进一步统一和提高,建议完善有关物质等检测方法;建议生产企业关注工艺中"醋酸"的残留及2-巯基苯并噻唑的潜在风险.

目的:研究头孢曲松及其杂质对斑马鱼肝脏的毒性.方法:选用受精后72h的野生型斑马鱼和肝脏特异性荧光标记的转基因斑马鱼作为实验动物.分别用不同浓度的(0、1、2、5 mmol/L)头孢曲松和杂质A、B、C、D,以及不同浓度的(0、0.1、0.5、1 mmol/L)杂质E处理两种幼鱼2 d后,观察幼鱼肝脏形态和肝脏荧光强度;采用整体油红O染色观察野生型斑马鱼肝脏脂肪含量变化;进一步利用转录组测序技术对各受试物处理组斑马鱼进行转录组测序,筛选差异表达基因,并进行信号通路富集分析.结果:活体观察显示,与对照组比较,头孢曲松及其杂质A和C主要使斑马鱼幼鱼肝脏区扩大或荧光强度增强(P<0.05或0.01),杂质B、D和E主要使幼鱼肝脏区减小或荧光强度减弱(P<0.05或0.01).整体油红O染色显示头孢曲松及其杂质均能导致斑马鱼肝脏脂肪堆积.头孢曲松给药组利用转录组测序筛选出差异表达基因共735个,杂质A组共237个,杂质C组共237个.KEGG通路分析提示各受试物组差异表达基因主要富集通路不同.头孢曲松差异基因主要富集于代谢通路和卟啉等通路中;杂质A组差异基因主要富集于色氨酸代谢等信号通路;杂质C组差异基因主要富集于钙信号通路等信号通路.结论:头孢曲松及其杂质A、B、C、D和E可导致不同程度斑马鱼肝功能发生变化,并造成肝脏组织损伤.

目的 建立磷酸西格列汀原料药及制剂中基因毒性杂质Nitroso-STG-19(NTTP)的超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)检测方法.方法 色谱柱为Eclipse Plus C18 RRHD(3.0 mm×150 mm,1.8 μm),以含0.1%甲酸的水溶液为流动相A,0.1%甲酸的乙腈溶液为流动相B,梯度洗脱,流速为 0.35 mL·min-1,柱温为 30℃,进样器温度为10℃,进样体积为5 μL.采用多反应监测(MRM)模式,对磷酸西格列汀原料药及制剂中的NTTP进行定量检测.结果 NTTP在 0.54～53.93 ng·mL-1范围内具有良好的线性关系.检测限和定量限分别为 0.02 ng·mL-1和0.08 ng·mL-1.原料药及制剂在低、中、高 3 个浓度的平均加样回收率范围(n=3)分别为 105.43%～107.21%(RSD≤3.2%)及 115.03%～120.20%(RSD≤3.6%).应用该方法对12 批原料药及3 批制剂中的NTTP进行检测,结果显示均有检出.结论 该方法灵敏度高、专属性强,可用于测定磷酸西格列汀原料药及制剂中的NTTP,可为磷酸西格列汀原料药及制剂的质量控制提供参考.

目的 建立UPLC-MS/MS法测定酮咯酸氨丁三醇中的基因毒性杂质2-[4-苯甲酰基-1-(2-氯乙基)-1H-吡咯-2-基]乙酸乙酯.方法 色谱柱采用ACQUITY BEH C18柱(2.1 mm×50 mm,1.7 μm),流动相为0.1％甲酸溶液-乙腈(60∶40),等度洗脱.采用电喷雾电离源(ESI),正离子模式采集,多反应监测(MRM)模式.结果 2-[4-苯甲酰基-1-(2-氯乙基)-1H-吡咯-2-基]乙酸乙酯在0.0771～1.5410 ng·mL-1内与峰面积线性关系良好,平均回收率在104.4％～108.2％,RSD均小于5％.定量限与检测限分别为0.0771、0.0231 ng·mL-1.结论 建立的方法准确、简便、快速、灵敏度高、专属性强,能有效测定酮咯酸氨丁三醇中2-[4-苯甲酰基-1-(2-氯乙基)-1H-吡咯-2-基]乙酸乙酯的含量,为酮咯酸氨丁三醇的质量控制提供参考.

目的 优化多潘立酮片有关物质检测方法,并与原研药进行有关物质一致性评价研究.方法 采用资生堂MGC18(4.6mm×250 mm,5μm)色谱柱,流动相为甲醇-0.5％乙酸铵溶液-0.5％乙酸铵溶液(用冰乙酸调节pH值为4.5),梯度洗脱,流速为1.0 mL·min-1,检测波长为285 nm,柱温为35 ℃.已知杂质为加校正因子的自身对照法,未知杂质为不加校正因子的自身对照法.取62批样品置于温度40 ℃、相对湿度75％条件下放置6个月,分别于第1、3、6个月取样测定有关物质.结果 在建立的色谱条件下,主峰与已知杂质峰及其他未知杂质峰分离良好,各已知杂质的线性关系良好,回收率为93.15％～107.53％.62批次样品中,有42批次样品中检出基因毒性杂质1-(3-氯丙基)-1,3二氢苯并咪唑-2-酮(杂质G),其他单个杂质量均≤0.16％,杂质总量≤ 0.45％.在加速6个月过程中,所有样品杂质A、杂质C均有增大趋势,其他杂质无明显变化.结论 该方法灵敏度高,专属性好,可用于多潘立酮片中有关物质的分析研究.

目的 建立高效液相色谱-串联质谱法(HPLC-MS/MS)同时测定注射用盐酸头孢甲肟中 7 种N-亚硝胺类基因毒性杂质(N-亚硝基二甲胺、N-亚硝基二乙胺、N-亚硝基二乙醇胺、N-亚硝基-N-甲基苯胺、N-亚硝基-N-乙基苯胺、N-亚硝基二异丙胺、N-亚硝基二正丁胺).方法 色谱柱为ACE EXCEL 3 C18-AR(3 μm,100 mm×4.6 mm),流动相为 0.1%甲酸甲醇溶液(A)-0.1%甲酸(B),梯度洗脱,流速 0.6 mL·min-1,采用 APCI 离子源,以正离子、多重反应监测(MRM)模式进行检测.结果 7种N-亚硝胺类基因毒性杂质在 1～20 ng·mL-1 与峰面积线性关系良好.回收率在78.9%～89.6%,RSD均小于6.1%.检测限低于1.5 ng?g-1.样品中各杂质均未检出.结论 该方法灵敏度高、专属性强,可用于注射用盐酸头孢甲肟中7种N-亚硝胺类基因毒性杂质的质量控制.