亚硝胺类化合物由于其结构上存在N-N=O键,容易发生异构化现象.本研究在采用HPLC法对4-(甲基亚硝胺基)-1-(3-吡啶基)-1-丁酮(NNK)进行分析时,观察到双色谱峰现象.并采用PFP色谱柱对NNK及其异构体进行有效分离,采用LC/MS二级质谱扫描确认了色谱图中2个色谱峰的分子、离子以及碎片离子均相同.同时采用NMR法对一级和二级核磁信号进行结构归属,进一步确证NNK中的杂质峰均属于同分异构体.此外,通过变温试验,采用NMR法测定了NNK的异构化比例范围;通过HPLC的变温试验,确证了 NMR的结果.本研究通过多角度试验方法验证NNK存在互变异构体的现象,有利于NNK含量的准确分析,同时为该类异构化遗传毒性杂质的检测提供了理论依据.

目的 优化即食水产制品中N-亚硝胺类化合物的前处理方法.方法 采集市售即食水产制品样品,均质后经水蒸气蒸馏,取蒸馏液加入乙醇(分散剂)、三氯甲烷(萃取剂)和3.0 g氯化钠进行分散液液微萃取(DLLME),萃取时间为10 min.离心后取下层有机相,采用气相色谱-三重四极杆质谱法(GC-MS/MS)多反应监测模式测定6种N-亚硝胺类化合物,以内标法定量.结果 6种N-亚硝胺类化合物在10.0～500 μg/L线性范围较好,相关系数均＞0.999;方法 检出限为0.05～0.6μg/kg,定量限为0.15～1.6 μg/kg;平均加标回收率为71.8％～108.9％,相对标准偏差(RSD)为1.4％～8.6％.检测市售即食水产制品样品20份,N-二甲基亚硝胺检出率最高,为90％;N-亚硝胺吡咯烷、N-二乙基亚硝胺和N-二丁基亚硝胺检出率分别为15％、10％和10％.结论 采用水蒸气蒸馏联合DLLME优化即食水产制品中N-亚硝胺类化合物的前处理方法,可满足检测要求.

目的 建立高效液相色谱-串联质谱法(HPLC-MS/MS)同时测定注射用盐酸头孢甲肟中 7 种N-亚硝胺类基因毒性杂质(N-亚硝基二甲胺、N-亚硝基二乙胺、N-亚硝基二乙醇胺、N-亚硝基-N-甲基苯胺、N-亚硝基-N-乙基苯胺、N-亚硝基二异丙胺、N-亚硝基二正丁胺).方法 色谱柱为ACE EXCEL 3 C18-AR(3 μm,100 mm×4.6 mm),流动相为 0.1%甲酸甲醇溶液(A)-0.1%甲酸(B),梯度洗脱,流速 0.6 mL·min-1,采用 APCI 离子源,以正离子、多重反应监测(MRM)模式进行检测.结果 7种N-亚硝胺类基因毒性杂质在 1～20 ng·mL-1 与峰面积线性关系良好.回收率在78.9%～89.6%,RSD均小于6.1%.检测限低于1.5 ng?g-1.样品中各杂质均未检出.结论 该方法灵敏度高、专属性强,可用于注射用盐酸头孢甲肟中7种N-亚硝胺类基因毒性杂质的质量控制.

目的 建立同时测定氯沙坦钾原料药及其制剂中6种N-亚硝胺类基因毒性杂质含量的方法.方法 采用气相色谱-串联质谱(GC-MS/MS)法测定氯沙坦钾原料药、氯沙坦钾片、氯沙坦钾胶囊、氯沙坦钾氢氯噻嗪片中N-亚硝基二甲胺(NDMA)、N-亚硝基二乙胺(NDEA)、N-亚硝基-N-乙基异丙胺(NEiPA)、N-亚硝基二异丙胺(NDiPA)、N-亚硝基二苯胺(NDPA)、N-亚硝基二丁胺(NDBA)6种N-亚硝胺类基因毒性杂质含量.色谱柱为SHIMADZU SH-L-17Sil MS毛细管柱;采用程序升温;进样口温度为250℃;进样量为1 μL;载气为氦气,流速为1 mL/min.离子源为电子轰击源,离子源温度为250℃;溶剂延迟时间为3.1 min;采集模式为多反应监测模式.结果 NDMA、NDEA、NEiPA、NDiPA、NDPA、NDBA与其相邻色谱峰之间的分离效果均良好,分离度均大于3.8;其线性范围分别为4.9～486.0、4.9～488.5、4.5～451.5、6.8～683.5、5.2～525.0、5.2～520.0 ng/mL(r≥0.999 8),定量限分别为4.86、4.88、4.52、6.84、5.25、5.20 ng/mL,检测限分别为0.97、0.98、0.90、1.37、1.05、1.04 ng/mL,重复性试验的RSD为2.2%～5.6%(n=6),精密度试验的RSD为0.5%～1.4%(n=6),稳定性试验的RSD为1.5%～3.4%(n=5),低、中、高质量浓度回收率溶液的平均加样回收率为83.4%～103.0%(RSD为1.2%～6.3%,n=3).在氯沙坦钾原料药及其制剂中均未检出6种N-亚硝胺类基因毒性杂质.结论 该法分离效果好、准确性高、灵敏、简便,可用于氯沙坦钾原料药及其制剂中6种N-亚硝胺类基因毒性杂质的检测.

目的 对水产品中N-二甲基亚硝胺气相色谱-串联质谱(GC-MS/MS)测定样品处理方法进行改进.方法 样品粉碎后,乙腈振荡提取,EMR粉末净化,冷冻离心,取上清液过0.22 μm滤膜,5 μl低温大体积进样,GC-MS/MS测定,外标法定量.结果 N-二甲基亚硝胺在1.0 μg/L～20.0 μg/L呈现良好的线性关系,相关系数(r) =0.998 8;四类水产品类样品的相对标准偏差为1.59％ ～1.99％;3个水平的加标回收率为87.9％ ～107.0％.结论 本法前处理简便,无浓缩过程,提取净化后直接上机,相对于GB 5009.26—2016水蒸汽蒸馏法,本法具有操作步骤少、称样量少、试剂用量少、前处理时间短、准确性高的特点,能够满足水产品中N-二甲基亚硝胺检测的要求.

目的 建立二乙基亚硝胺(N-nitrosodiethylamine,DEN)诱导的小鼠急性肝炎模型.方法 DEN生理盐水溶液腹腔注射雄性C57BL/6小鼠后,观察小鼠存活情况,ELISA方法检测丙氨酸转氨酶( alanine aminotransferase , ALT)、天冬氨酸转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)、白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor α,TNFα)、高尔基体跨膜糖蛋白73(Golgi protein 73,GP73)以及甲胎蛋白(alpha fetoprotein,AFP)的水平,采用免疫组化染色,对小鼠肝组织进行病理学观察.结果 腹腔注射DEN溶液的最佳剂量为100 mg/kg.与生理盐水对照组相比,注射该剂量DEN的小鼠肝组织HE染色可见进行性炎性病变、肝渐进性弥漫性坏死、肝小叶紊乱、细胞核崩解以及小血管出血;小鼠血清中的ALT、AST、IL-1β、IL-6、TNFα的水平逐渐增高,在注射后24 h达到峰值,随后均逐渐下降.结论 建立了DEN诱导小鼠急性肝炎模型,为下一步开展急性肝炎的致病机制相关研究提供了理想有效的动物模型.

目的 建立同时测定熟肉制品中9种N-亚硝胺类化合物的气相色谱-串联质谱分析方法.方法 样品采用快速基质分散净化(QuEChERS)法处理后,用HP-INNOWax石英毛细管色谱柱(30 m×0.25 mm,0.25 μm)分离,经气相色谱-串联质谱多反应监测技术进行定性及定量分析.结果 9种N-亚硝胺类化合物在0.20～50.00 μg/kg范围内线性关系良好,相关系数均＞0.997,方法检出限为0.02～0.1μg/kg.3个加标水平的平均回收率为78％～120％,相对标准偏差为3.42％～15.24％.结论 本方法准确、快速、灵敏度高,可用于熟肉制品中9种N-亚硝胺类化合物的检测.

目的 检测15种国产烤烟型卷烟主流烟雾中两种烟草特有亚硝胺和镉(Cd)的含量,并分析其与烟盒上标称的焦油含量的关系.方法 从北京某烟草专卖店随机选购15种低、中焦油含量的国产烤烟型卷烟为检测样品,利用吸烟机模拟抽吸过程并采集主流烟雾中总颗粒物,采用LC-MS/MS法检测其中烟草特有亚硝胺的含量,采用原子吸收法检测其中镉的含量,运用t检验和线性回归模型分析这两类有害物质与盒标的焦油含量之间的关系.结果 所选取的卷烟样品主流烟雾中N-亚硝基降烟碱(NNN)和4-(N-甲基亚硝胺基)-1-(3-吡啶基)-1-丁酮(NNK)的含量在低焦油(≤10 mg/cig)和中焦油(11～15) mg/cig含量卷烟组并不存在显著性差异(P＞0.05),在低焦油组其含量与焦油标称值并无显著相关关系(P＞0.05);虽然Cd的含量在中焦油组要显著高于低焦油组(P＜0.01),但在低焦油组的回归分析中Cd与焦油标称值并无显著相关关系(P＞0.05).结论 烤烟型卷烟的焦油含量低并不代表其主流烟雾中NNN、NNK和Cd的释放量低,“减害降焦”的说法缺乏科学的理论支持.

基因毒性杂质能够损伤DNA,造成DNA突变,致癌,严重危害人类健康.本文主要针对基因毒性杂质中的N-亚硝胺类化合物,介绍其毒理学研究进展以及食品、水体、烟草、药品等不同基质中检测方法的研究进展,包括毒理学作用机制、前处理方法、定量方法等,旨在为药品基质中N-亚硝胺类化合物的检测研究提供参考.

目的 建立一种吹扫捕集-气相色谱串联质谱测定水中8种N-亚硝胺物质的方法.方法 水样中加入氯化钠,吹扫捕集11分钟,目标物经DB-Wax色谱柱进入气相色谱串联质谱,在多反应监测模式(MRM)下实现定性和定量分析.结果 该方法的检出限为0.006-0.23 μg/L,两个加标浓度的平均回收率为84.0％～105％,RSD在2.1％～8.4％之间.结论 该方法精确、快速、操作简便,适用于测定水样中的8种亚硝胺类物质的残留.