目的 采用超高液相色谱-四极杆飞行时间串联质谱(UPLC-Q-TOF-MS)技术与网络药理学探讨人参黄精杏麦饮抗疲劳的药效物质及作用机制.方法 通过UPLC-Q-TOF-MS技术鉴定人参黄精杏麦饮化学成分,并利用TCMSP、Swiss Target Prediction数据库预测化学成分相关靶点;利用Disgenet、Genecards数据库检索疲劳靶点,利用韦恩图绘制平台获取共有靶点,并将信息导入Cyto-scope3.7.1 软件和STRING在线分析平台,进行网络拓扑学分析,构建药物-活性成分-关键靶点网络.最后,通过DAVID数据库进行基因本体论(gene ontology,GO)和京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and gnomes,KEGG)通路富集分析.结果 通过UPLC-Q-TOF-MS分析鉴定出35 个药物活性成分,主要为黄酮类;对药物和疾病靶标集进行拓扑分析,获得 14 个关键成分和39 个核心靶点;通过KEGG富集到癌症、流体剪切应力与动脉粥样硬化通路、PI3K-Akt、脂质与动脉粥样硬化和糖尿病并发症中的AGE-RAGE等信号通路.结论 人参黄精杏麦饮的活性成分通过作用于丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1、磷酸甘油醛脱氢酶、白细胞介素-6、肿瘤坏死因子等靶标改善机体氧化应激反应、减轻免疫介导的炎症和感染以及调控细胞增殖、分化、凋亡等多种细胞功能发挥抗疲劳作用,初步阐明人参黄精杏麦饮抗疲劳的作用,为后续深入研究提供参考.

基于炮制和配伍探究山茱萸与黄芪相关组分对糖尿病肾病大鼠血浆代谢组学的影响.SD大鼠随机分为4组,用高脂饲料联合30 mg·kg-1链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病肾病大鼠模型.采用HE、PAS和Masson染色对各组大鼠的肾脏组织切片进行病理学观察.超高效液相色谱-四极杆飞行时间串联质谱(UHPLC-Q-TOF-MS/MS)代谢组学方法研究山茱萸酒制前后与黄芪相关组分配伍给药后对糖尿病肾病大鼠血浆代谢物的影响.给予药物治疗后,糖尿病肾病大鼠的肾组织损伤情况和间质胶原纤维沉积面积均有不同程度的改善(P＜0.001).血浆代谢组学的检测结果显示,在患病大鼠中共鉴定出71种与糖尿病肾病发病机制相关的生物标志物,主要涉及亚油酸代谢,咖啡因代谢,甘油磷脂代谢,苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸生物合成,花生四烯酸代谢,苯丙氨酸代谢,视黄醇代谢,乙醚脂质代谢.经药物干预后,其中有26种发生显著性回调,以精准炮制药对(P-CG5)疗效更好.该研究从血浆代谢组学的角度阐述了 P-CG5可从苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸生物合成,苯丙氨酸代谢,咖啡因代谢等途径改善糖尿病肾病的代谢紊乱,为山茱萸与黄芪相关组分配伍在中医临床上的应用提供了理论支撑和实验依据.

目的 阐明侗药"马镫艾"(Madeng'ai,MDA)根部水提物抑制炎症的潜在药效物质及机制.方法 首先采用质谱技术对MDA水提物的化学成分进行鉴定,再利用Swiss Target Predict数据库和Omim、Disgenet及Genecards数据库分别筛选出疾病和药物靶点,取交集后获得药物-疾病共同靶点;通过软件Cytoscape 3.9.1构建"药物-成分-疾病-靶点"网络并筛选出核心组分;通过String数据库构建蛋白质-蛋白质相互作用网络(protein-protein interaction networks,PPI);使用David数据库进行基因本体论(gene ontology,GO)分析与京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)通路富集分析;最后,采用RT-qPCR和Western blot的方法在体外研究MDA水提物对几种典型炎症因子mRNA水平的影响及可能的信号通路.结果 质谱法在MDA水提物中一共鉴定出了 29种化合物,排名前五位的分别为:委陵菜酸、鞣花酸、原花青素C1、儿茶素和原花青素B1.通过数据库检索并去重后共获得104个药物-疾病共同靶点,其中TNF-α、IL-6、AKT1及ALB等可能是其核心作用靶点.GO功能富集分析一共获取到761个条目,其中与生物学过程相关的共600条,涉及到细胞组分的共52条,涉及到分子功能的共109条;KEGG通路富集分析共得到160条相关信号通路,其中包含NF-κB、MAPK、PI3K-AKT等信号通路.与正常对照组相比,模型组(LPS组)TNF-α、IL-6、IL-1 β及CCL2的含量显著升高(P＜0.05),p38、ERK及JNK的磷酸化水平显著上调(P＜0.05);与模型(LPS)组相比,MDA处理组TNF-α、IL-6、IL-1β及CCL2的含量显著降低(P＜0.05),p38、ERK及JNK的磷酸化水平显著下调(P＜0.05).结论 本研究预测了侗药MDA水提物具备多种抗炎活性成分,并且可通过MAPK等多条信号通路发挥抗炎作用.

目的:基于液质联用技术(UPLC-Q-TOF-MS)分析北青龙衣的化学成分在肺组织中的分布.方法:采用ACQUITY BEH C18(2.1 mm×100 mm,1.7μm),以水(A)-乙腈(B)分别加入0.1％甲酸进行梯度洗脱.质谱采用ESI离子源,正、负离子模式下采集数据,通过数据处理软件,依据精确质量数、同位素丰度比、谱图对比和裂解规律分析,进行化学成分推断和鉴定.结果:共鉴定出19个原型成分和7个代谢产物,包括14个萘醌类、6个二芳基庚烷类、3个黄酮类及3个三萜类成分.结论:该方法检测快速、准确,为北青龙衣抗肺癌活性成分、作用机制及代谢过程研究奠定基础.

目的 利用超高液相色谱-串联四极杆飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF/MS)技术研究北青龙衣醇提物在大鼠肝组织中化学成分分布.方法 灌胃给予北青龙衣醇提物后,采集肝组织,用含0.1％甲酸水溶液(A)-含0.1％甲酸乙腈溶液(B)为流动相进行梯度洗脱,质谱采用电喷雾离子源,以正、负2种离子模式采集数据,通过Peakview 2.0/masterview 1.0和Metabolitepilot数据分析软件,通过对比同位素丰度比、保留时间,精确母离子质量数和二级碎片鉴定北青龙衣在大鼠肝组织中成分.结果 从大鼠肝组织中鉴定了39种化学成分,包括27个原型成分和12个代谢产物,其中包含10个二芳基庚烷类,10个黄酮类,14个萘醌类,5个三萜类成分.结论 初步确定了北青龙衣醇提物在大鼠肝组织中的原型成分及代谢产物,为北青龙衣体内成分及组织分布研究提供方法学参考,并为其进一步深入研究奠定基础.

目的 研究芍药苷(Paeoniflorin,PF)在溃疡性结肠炎(Ulcerative colitis,UC)小鼠结肠组织中的动态分布,并探讨其治疗UC的途径及其作用机制.方法 C57BL/6小鼠在实验第1～7天自由饮用3％葡聚糖硫酸钠(Dextran sulfate sodium,DSS)水溶液制备UC模型,第8天,UC小鼠灌服黄芩汤(含芍药苷),采用超高效液相色谱串联四极杆飞行时间质谱仪(UPLC-Q-TOF-MS)检测芍药苷在结肠中的含量变化,检测时间点为给药0.5,1,3,12h.另取C57BL/6小鼠随机分为正常组、模型组、柳氮磺吡啶组(Sulfasalazine,SASP)和芍药苷组,每组8只.同时,SASP组(50 mg·kg-1)和芍药苷组(25 mg·kg-1)分别灌胃给药;正常组和模型组小鼠灌胃给予生理盐水,连续10 d,并记录体质量变化.实验第11天,取小鼠脾脏称质量;采用动物血细胞计数仪检测单核细胞数量;苏木素—伊红染色(HE)观察结肠形态变化;免疫组化法检测结肠和肠系膜中巨噬细胞的分布;超高分辨率激光共聚焦扫描显微镜(Confocal)检测结肠组织巨噬细胞和核苷酸结合寡聚化结构域样受体3(Nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor family,pyrin domain-containing 3,NLRP3)蛋白共定位.ELISA试剂盒检测结肠匀浆上清白细胞介素-1β(IL-1β)的含量.结果 UPLC-Q-TOF-MS检测结果表明,芍药苷在结肠中可以检测到,并且芍药苷可显著减轻小鼠结肠溃疡症状并显著促进UC小鼠体质量(P＜0.05)和脾指数恢复(P＜0.001),降低UC小鼠外周血单核细胞比例(P＜0.01).减少结肠和肠系膜中巨噬细胞浸润的数量,并通过抑制结肠巨噬细胞中NLRP3炎症小体活化进而降低结肠组织上清中IL-1β含量(P＜0.01).结论 芍药苷可以在结肠中检测到,并可改善UC小鼠病理症状,抑制肠系膜和结肠组织中巨噬细胞的浸润,抑制结肠巨噬细胞中NLRP3蛋白并抑制细胞因子IL-1β的释放.

目的 利用超高液相色谱-串联四极杆飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF/MS)联用技术对北青龙衣大鼠肾组织化学成分进行分析.方法 大鼠ig给予北青龙衣醇提物后,采集肾组织,采用Waters Acquity UPLC BEH C18色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.7 μm),流动相为0.1％甲酸的水溶液(A)-0.1％甲酸的乙腈溶液(B),梯度洗脱,质谱采用电喷雾(ESI)离子源,在正离子模式下采集数据,通过Peakview 2.0/masterview 1.0和Metabolitepilot数据分析软件,通过对比保留时间、碎片丰度比、母离子精确质量数及二级质谱图鉴定和表征北青龙衣在大鼠肾组织成分.结果 从大鼠肾组织中鉴定了24种化学成分,包括16个原型成分和8个代谢产物,其中包含12个萘醌类、5个黄酮类、3个二芳基庚烷类、4个三萜类成分.结论 初步确定了北青龙衣在大鼠肾组织中原型成分及代谢产物,为北青龙衣用药安全性和有效性提供参考,为其在大鼠体内成分及组织分布研究提供方法学借鉴.

目的:采用超高效液相色谱与串联四极杆飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF-MS)和气相色谱-质谱联用(GC-MS)技术快速鉴定小金丸中的化学成分,构建较为全面的小金丸化学成分谱,为小金丸药效物质基础研究奠定基础.方法:UPLC-Q-TOF-MS分析采用ACQUITY UPLC BEH C18(Waters,2.1 mm×100 mm,1.7μm)超高效液相柱,流动相为乙腈-0.1％甲酸水,梯度洗脱;飞行时间质谱采用正、负离子模式扫描,质谱数据以MSE模式采集.UPLC-QTOF-MS分析依据离子峰的保留时间、精确分子质量和多级质谱碎片,与文献报道数据和数据库对比,对小金丸的甲醇提取部分化学成分进行在线快速鉴定.GC-MS分析采用Agilent 19091S-433 HP-5MS 5％Phenyl Methyl Silox(Agilent,30m×250μm×0.25μm)毛细管色谱柱,载气为氮气;质谱采用EMV模式:增益因子1.00.GC-MS分析通过增强型NIST4.L标准质谱库进行检索,对小金丸中挥发性成分进行了快速鉴定.结果:从小金丸中共鉴定化学成分1 18种,主要包括生物碱类24种、有机酸12种、甾体类9种、单萜类5种、倍半萜类16种、二萜类14种、三萜类7种和苯丙素类成分5种,另外还有个别酯类、糖类、氨基酸类和杂环类化合物等.结论:UPLC-Q-TOF-MS和GC-MS方法能快捷、准确、较全面地鉴定小金丸中的化学成分,为小金丸药效物质基础研究提供科学依据,并为中药复方的成分鉴定提供了一种简单快捷的分析鉴定方法.

目的:应用代谢组学的方法观察乳腺癌患者的血清代谢产物变化规律,并将其用于发现诊断乳腺癌病情进展及治疗的生物标志物.方法:收集正常人和乳腺癌病人的血清标本,分为正常人组49例,乳腺癌组31例.经超高效液相色谱-三重四极杆-飞行时间串联质谱(UPLC/Q-TOF-MS)检测,将所得数据输入SIMCA-14.0软件,对其进行多变量统计分析.如主成分分析法(PCA)和正交偏最小二乘法判别分析(OPLS-DA)模式识别分析各代谢物的变化.结果:乳腺癌和正常组血清产物水平呈现不同的分布.结论:代谢组学方法可展示乳腺癌血清中代谢产物的变化特点,为进一步发现乳腺癌发病的生物机制奠定基础.

目的:研究荭草花有效组分在大鼠粪便和胆汁中的代谢.方法:以荭草花有效组分为研究对象,通过收集健康SD大鼠给药后的粪便和胆汁,利用超高效液相色谱串联电喷雾四极杆飞行时间质谱(ultra-high performance liquid chromatography-quadrupole time-of-flight mass spectrometry,UHPLC-ESI-Q/TOF-MS)联用技术,并结合Metabolite ToolsTM,Smart Formula及MDF(mass defect filter)等代谢产物预测、筛查技术,有效分析荭草花有效组分在大鼠粪便和胆汁中的代谢产物.结果:在大鼠体内检测出10个原形成分和25个代谢产物,其中粪便和胆汁中分别有20和22个成分(含交叉成分),代谢产物主要以槲皮素葡萄糖醛酸化、N-反式-对羟基苯乙基阿魏酰胺的氢化、甲基化代谢产物为主.结论:本课题建立了高分辨质谱分析方法,分析了荭草花有效组分在大鼠粪便和胆汁中的代谢产物,阐明了荭草花有效组分的体内代谢特征.