细胞焦亡可能是引起桥本甲状腺炎(Hashimoto's thyroiditis,HT)发病的主要原因,而中药可通过调节细胞焦亡通路降低细胞损伤、抑制免疫反应和抗氧化应激,从而发挥对甲状腺细胞的保护作用.槲皮素、木犀草素、连翘提取物、五味子素B等为治疗HT的有效中药成分,能够通过多种机制延缓细胞焦亡的进程,部分成分还可减轻由焦亡引发的免疫激活、免疫失衡和氧化应激.此外,中药复方以其多靶点、协同增效、整体调理等优点广泛用于HT的治疗.但现有研究主要聚焦于单一机制,忽略了整体分析与药物制备及临床应用标准的优化,因此将实验和临床实践结合,全面探讨中药在HT防治中的作用机制和临床应用对于深化其治疗潜力至关重要.

基于超高效液相色谱-串联四极杆飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF-MS)技术结合自建化学成分数据库,对连翘Forsythia suspensa的叶、花、果实、青翘、老翘、种子等11个部位中化学成分进行整体表征和鉴定.运用主成分分析、偏最小二乘法判别分析等化学计量学方法,评价连翘不同部位的质量属性与差异.从连翘中共推测鉴定出79个化合物,包括13个苯乙醇苷类、10个木脂素类、12个黄酮类、10个有机酸类、14个萜类及20个其他类型化合物.其中,34个化合物为连翘不同部位间差异的主要变量,且连翘叶和青翘中各成分的相对含量较高.应用脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7细胞炎症模型,评价了连翘不同部位提取物及主要成分的抗炎活性.结果显示,青翘、连翘花、连翘枝和连翘梗的提取物均具有一定的抗炎活性,且连翘酯苷A、连翘苷、连翘脂素、(+)-松脂素-β-D-吡喃葡萄糖苷等成分也具有可显著抑制NO释放的抗炎活性.该研究对连翘不同部位的化学成分进行了较全面的分析以及抗炎活性评价,为连翘的资源开发和综合利用提供参考.

目的:研究贯叶连翘Hypericum perforatum L.的化学成分及降糖活性.方法:运用硅胶柱色谱、ODS柱色谱、Sephadex LH-20 葡聚糖凝胶柱色谱以及制备HPLC等多种方法对贯叶连翘地上部分 95%乙醇提取物进行分离纯化,利用HR-ESI-MS、NMR等波谱技术对分离得到的化合物进行鉴定.通过体外α-葡萄糖苷酶活性抑制试验,测定化合物的降糖活性.结果:从贯叶连翘中分离得到 14 个化合物,分别鉴定为:北美芹素(1)、3′,4′-disenecioyl-cis-khellactone(2)、5,4′-二羟基-6,8-二甲基-7-甲氧基黄酮(3)、5,4′-二羟基-6-甲基-7-甲氧基黄酮(4)、5,7-二羟基-3-甲基色原酮(5)、5,7-二羟基-3-乙基色原酮(6)、2,4,6-三羟基苯甲酸乙酯(7)、香草醛(8)、7-hydroxy-5-methoxy-4,6-dimethylphthalidc(9)、α-生育醌(10)、豆甾醇(11)、乙酰-11-羰基-β-乳香酸(12)、阿魏酸二十六烷酯(13)、cosmo-soic acid(14).结论:其中,化合物 1～4、10、12～14 为首次从金丝桃属植物中分离得到,化合物 5～7 和 9 为首次从贯叶连翘中分离得到.化合物 3 和 4 表现出较好的 α-葡萄糖苷酶抑制活性,其 IC50 值分别为 490.3 和 549.9 μmol/L,与阳性药阿卡波糖效果(IC50=500.1 μmol/L)相当.

目的 研发治疗非重症新型冠状病毒感染(COVID-19)的中药方剂并验证其抗炎作用机制.方法 基于COVID-19患者支气管肺泡灌洗液中巨噬细胞的表达谱和新型冠状病毒(SARS-CoV-2)体外感染的肺上皮细胞表达谱分别确定了 COVID-19在这两类细胞中失调的信号通路.通过文献收集临床治疗非重症COVID-19的中药方剂102首,基于特征信号通路评价102首方剂在肺上皮细胞和巨噬细胞中的通路逆转率,并根据中医理论确定"基础方".通过临床常用方剂总结得到治疗非重症COVID-19的常用药,结合《中华人民共和国药典》中药筛选结果得到COVID-19中药方剂研发的"药物池".通过靶向转录组获得每味药物对信号通路的调控作用,以逆转COVID-19失调的信号通路为目标展开计算,基于中药智能组方方法采用穷举法和平行运算进行组方得到若干个候选复方,参考中医专业经验最终得出治疗非重症COVID-19的守正创新方.采用RT-qPCR法检测该组方醇提物对脂多糖(LPS)处理的RAW264.7细胞中白细胞介素1b(IL1b)、C-X-C基序趋化因子配体2(Cxcl2)、C-X-C基序趋化因子配体10(Cxcl10)、C-C基序趋化因子配体2(Ccl2)、一氧化氮合成酶2(Nos2)和前列腺素内过氧化物合成酶2(Ptgs2)mRNA的表达,对抗炎效果进行验证.结果 在巨噬细胞和肺上皮细胞中,确定了 COVID-19相关的各34条失调信号通路.基于失调信号通路和中药靶向转录组,对临床治疗非重症COVID-19的102首中药复方的功效进行评估,结果显示银翘散合平胃散在巨噬细胞及肺上皮细胞上的通路逆转率分别为91.18％和100％,效果最佳;且该复方具有疏风清热、解毒化湿的功效,符合COVID-19风热夹湿的病机,故选用银翘散合平胃散作为守正创新方研发的基础方.利用中药智能组方方法结合中医专业经验对银翘散合平胃散进行加减化裁,得到守正创新方翘蒡术皮饮.该方逆转了巨噬细胞和肺上皮细胞上COVID-19相关全部失调信号通路,逆转率均为100％.翘蒡术皮饮中的君药连翘、豨莶草和牛蒡子可下调多条与病毒感染、免疫及损伤增值相关的信号通路.RT-qPCR结果表明,与模型组比较,翘蒡术皮饮组下调了 LPS 诱导 RAW264.7 细胞中的 IL1b、Tnf、Cxcl2、Cxcl1O、Ccl2、Nos2 和 Ptgs2 mRNA表达(P＜0.05或P＜0.01).结论 基于靶向转录组、中医专业经验和人工智能研发得到治疗非重症COVID-19的翘蒡术皮饮,该方剂的乙醇提取物在细胞炎症模型上能够抑制多种促炎基因的表达.

为研究临床常用中药白芷中的化学成分,本实验利用各种色谱分离技术,结合核磁共振波谱对分离得到的单体化合物进行结构鉴定,结果从白芷乙醇提取物中共鉴定出18个非香豆素类化合物,分别为甘草素(1)、柚皮素(2)、橙皮素(3)、柚皮素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(4)、橙皮素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(5)、柚皮苷(6)、新橙皮苷(7)、柚皮芸香苷(8)、3-羟基-5,6,7,8,3',4'-六甲氧基黄酮醇3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(9)、开环异落叶松脂醇(10)、松脂素单甲基醚-β-D-葡萄糖苷(11)、连翘苷(12)、牛蒡子苷(13)、(-)-松脂醇-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(14)、金钱草碱(15)、1-H-咪唑并[4,5-d]哒嗪-2-胺(16)、咖啡酸乙酯(17)、咖啡酸甲酯(18).除化合物15外,其他17个化合物均为首次从白芷中分离得到,对所有化合物进行抗炎活性筛选,结果表明化合物3和18对zymosan诱导中性粒细胞释放超氧化物具有一定的抑制作用,IC50分别为77.8±2.4 μmol/L和44.7±13.5 μmol/L;化合物1和18对LPS诱导的小鼠巨噬细胞RAW 264.7的NO产生有一定抑制活性,IC50分别为44.7±4.1 μmol/L和94.5±1.9 μmol/L.

目的 研究半边旗Pteris semipinnata的化学成分.方法 综合应用硅胶、Sephadex LH-20凝胶、ODS、大孔树脂、MCI Gel柱色谱和半制备高效液相色谱法分离纯化,并通过NMR和HR-ESI-MS法鉴定结构.结果 从半边旗全草甲醇提取物中共分离20个化合物,分别鉴定为芹菜素(1)、芹菜素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(2)、芹菜素-7-O-β-D-龙胆二糖苷(3)、芹菜素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖-4'-O-α-L-吡喃鼠李糖苷(4)、异佛莱心苷(5)、木犀草素(6)、木犀草苷(7)、木犀草素-7-O-β-D-龙胆二糖苷(8)、槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(9)、山柰酚-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(10)、芦丁(11)、表没食子儿茶素(12)、松脂素-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(13)、连翘苷(14)、岩白菜素(1S)、原儿茶酸(16)、反式咖啡酸(17)、没食子酸(18)、β-谷甾醇(19)、β-胡萝卜苷(20).结论 化合物3、5、12、13、15～18为首次从该属植物中分离得到,化合物2～5、8～13、15～20为首次从该植物中分离得到.

目的 对连翘Forsythia suspensa的化学成分进行研究.方法 通过大孔吸附树脂、Sephadex LH-20、反相HPLC等多种色谱进行分离纯化,根据理化性质和波谱数据进行结构鉴定.结果 从连翘的50％乙醇提取物中分离得到2个化合物,分别鉴定为(2R,3S)-3-(4-羟基-3-甲氧基苯)-3-甲氧基丙烷-1,2-二醇(1)和2-甲基己烷-1,2,3,6-四醇(2).结论 化合物1为新立体构型化合物,化合物2为新化合物,分别命名为(2R,3S)-forsythiayanoside D和连翘己四醇.

目的 建立UHPLC/QTOF法下连翘提取物HPLC指纹图谱.方法 采用液相-四级杆串联高分辨飞行时间质谱(UHPLC/QTOF)法进行成分鉴定,连翘提取物分析采用Zorbax SB-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm)流动相乙腈-0.1％甲酸溶液梯度洗脱;柱温为30℃;体积流量1.0 mL/min;检测波长280 nm.结果 14批样品指纹图谱中有20个共有峰,相似度均大于0.95.并鉴定出9个峰,分别为连翘酯苷E、suspensaside C、咖啡酸、连翘酯苷、芦丁、异连翘酯苷A、连翘酯苷、连翘酚、连翘苷.结论 该方法稳定、准确、重现性好,同时提供的信息较多,可用于连翘提取物的整体质量控制,对终产品痰热清注射液的质量控制具有重要意义.

目的 研究圣·约翰草提取物片(ESJWT)对短暂电击所致创伤后应激障碍(PTSD)模型小鼠行为的影响,并探讨ESJWT防治PTSD的可能性.方法 48只雄性C57BL/6小鼠随机分为正常对照组、模型组、舍曲林(15 mg·kg-1)和ESJWT(25 mg·kg-1)治疗组,每组12只;除正常对照组外其余各组小鼠连续2 d给予不可逃避的足底电击(0.8 mA,持续10 s,间隔10 s,每天15次),实验前1 h药物处理组小鼠分别ig给予盐酸舍曲林和ESJWT,每天1次,持续18 d.第3,8和15天测量小鼠僵住时间百分比和粪便量,于第16,17和18天依次对小鼠进行旷场实验、高架十字迷宫实验和爬梯实验.行为学实验结束后用ELISA测定小鼠血清去甲肾上腺素(NE)和5-羟色胺(5-HT)含量.结果 与正常对照组相比,模型组小鼠僵住时间百分比和粪便量显著增加(P<0.01),进入旷场中央区域的次数和时间均显著降低(P<0.01),进入高架十字迷宫开臂的次数和时间均显著降低(P<0.01),爬梯实验中小鼠爬梯次数无显著性差异,但站立次数明显增加(P<0.01),提示PTSD模型制备成功.与模型组相比,舍曲林和ESJWT均能有效改善上述模型小鼠PTSD样行为(P<0.05,P<0.01),其中ESJWT治疗组小鼠在条件恐惧环境下粪便量较模型组显著减少(P<0.01).各组小鼠血清NE和5-HT含量均无显著性差异.结论 ESJWT可有效改善PTSD模型小鼠的恐惧和焦虑等行为,有可能用于PTSD治疗.

为了探讨补充连翘提取物后对力竭运动后大鼠体内抗氧化能力和肌肉损伤的影响,我们选择了60只雄性大鼠为研究对象,随机分成4组:控制组(C组)、力竭运动组(E组)、连翘组(F组)和连翘运动组(FE组),每组15只.连翘每天以每千克体重40 mg/kg剂量进行喂食,为期4周,力竭运动于最后1周进行跑步机适应,隔天以渐增式力竭运动跑至力竭.我们采用双因素方差分析来检验连翘补充与力竭运动对SD大鼠血液中肌酸激酶、乳酸脱氢酶、丙二醛、超氧歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶活性的影响.结果发现,力竭运动组的肌酸激酶、乳酸脱氢酶、丙二醛活性显著高于控制组,超氧歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶活性则显著低于控制组(p＜0.05).连翘运动组乳酸脱氢酶、丙二醛活性皆显著低于力竭运动组(p＜0.05),超氧歧化酶活性则显著高于力竭运动组(p＜0.05),肌酸激酶和谷胱甘肽过氧化物酶则无显著差异(p＞0.05),说明补给连翘能有效防止力竭运动导致超氧歧化酶活性的降低和乳酸脱氢酶与丙二醛活性升高的情况,有助于增强大鼠体内的抗氧化能力,减缓因力竭运动导致氧化伤害和肌肉损伤的情况.我们的研究为连翘在力竭运动损伤保护中的应用提供了一定的帮助.