目的:对一个ITGA2B基因复合杂合突变导致的遗传性血小板无力症家系进行表型及基因型研究，并探索其分子致病机制。方法:使用二磷酸腺苷、胶原、肾上腺素、花生四烯酸及瑞斯托霉素等诱聚剂进行血小板聚集试验，检测先证者及家系成员的血小板聚集率。通过流式细胞术检测血小板表面CD41（αⅡb）、CD61（β3）、CD42b（GPⅠb）的表达。采用基因测序技术进行基因鉴定。利用RT-PCR检测ITGA2B基因mRNA剪接情况，qRT-PCR检测ITGA2B基因mRNA相对水平。生物信息学分析评估突变位点的致病性及对蛋白结构和功能的影响。通过Western blot检测分析血小板总αⅡb、β3的表达。结果:除瑞斯托霉素外其他4种诱聚剂均无法使先证者血小板聚集。流式细胞术检测先证者血小板表面αⅡb的表达仅为0.25%，β3弱表达为9.76%，而GPⅠb表达相对正常，其余家系成员膜糖蛋白表达基本正常。基因测序结果显示先证者存在ITGA2B基因c.480C>G与c.2929C>T复合杂合突变，其中c.480C>G突变遗传自其母亲，c.2929C>T遗传自其父亲。RT-PCR及测序结果表明c.480C>G突变导致先证者及其母亲发生c.476G-574A（p.S160-S192）共99个碱基缺失的mRNA剪接。qRT-PCR检测发现c.2929C>T突变导致先证者及其父亲ITGA2B基因mRNA水平减低。生物信息学分析提示c.480C>G突变形成了与hnRNP A1蛋白结合序列，产生了5'SS剪接位点。αⅡb亚基的蛋白三维结构模型显示，p.S160-S192缺失的β-propeller结构域第2 blade缺失两条β链和一个α螺旋；c.2929C>T无义突变使得翻译提前终止产生p.R977-E1039缺失的截短型蛋白，包括胞质域（CD）、跨膜域（TM）以及胞外Calf-2结构域一条β链的缺失。Western blot检测先证者血小板总αⅡb表达缺失、β3的相对表达量为正常人的11.36%。结论:ITGA2B基因第4外显子c.480C>G与第28外显子c.2929C>T的复合杂合突变是本家系遗传性血小板无力症的致病原因。

遗传性血小板功能障碍(IPFD)是一种罕见的遗传性疾病，临床上以不同程度的出血倾向伴或不伴血小板减少为主要表现。以往由于实验室缺乏标准化评估体系，IPFD的诊断及分类困难，导致该类疾病的发病率可能被低估。目前，结合临床表现和实验室检测及二代测序技术，有助于及时、准确地诊断这类复杂的出血性疾病，并给予及时的病情评估及治疗指导。但目前IPFD仍无有效的靶向治疗措施。现主要介绍IPFD的诊断及治疗现状。

经典的血小板无力症是一种罕见的遗传性血小板疾病,发病率为1/50万[1-2].以常染色体隐性遗传方式遗传,多见于近亲婚配家庭.患者自幼出现轻到重度皮肤黏膜出血,女性以月经增多最为常见.血小板形态和数量正常,但对二磷酸腺苷(ADP)、花生四烯酸、凝血酶等生理诱聚剂反应低下或缺如,而对瑞斯托霉素反应正常.该病的发病机制是由于17号染色体长臂21-23位的ITGA2B或ITGB3基因突变导致血小板表面αⅡbβ3表达下降或者功能缺陷.根据αⅡbβ3质或量的改变,分为Ⅰ型(＜5％)、Ⅱ型(5％～20％)、Ⅲ型(20％～50％)和变异型(表达正常但功能缺陷).除经典血小板无力症外,还有更为罕见的特殊类型的血小板无力症.后者虽然表现为和经典血小板无力症相同的血小板聚集功能障碍,但是在遗传方式、发病机制、合并症等方面都与经典的血小板无力症具有很大的差异.本文就特殊类型的血小板无力症进行综述.

血小板无力症(glanzmann thrombasthenia,GT)是一种罕见的常染色体隐性遗传性血小板功能缺陷性疾病,血小板膜糖蛋白GPⅡb(aⅡB,CD41)和(或)GPⅢa(β,CD61)的任一突变均可致GPⅡb/Ⅲa复合物形成不稳定,而易被蛋白酶分解,使血小板对各种生理性诱聚剂反应减低或缺如[1].目前本病无特殊的治疗方案,也缺乏预防自发性出血的措施,临床以输注血液制品等对症处理为主.本病属于少见病,笔者以中医药治疗该病1例,疗效确切,现报道如下.

目的 报告一个遗传性血小板功能障碍家系并探索其分子发病机制.方法 收集该家系临床资料,采用二代高通量测序法进行遗传性血液病和血小板功能相关近600种基因突变筛查.采用RT-PCR及一代测序法检测先证者及其父母RASGRP2基因部分转录本序列.结果 该遗传性血小板功能障碍家系临床表现符合变异型血小板无力症,表现为反复皮肤黏膜严重出血,先证者血小板对多种不同浓度的生理性诱聚剂反应低下甚至缺如.先证者未检出整合素αⅡbβ3基因突变,而存在RASGRP2 IVS3-1C＞G纯合突变,其父母均为该位点杂合突变.先证者在扩增区检测出2种转录本,功能型RASGRP2蛋白对应的正常转录本未检出,其父母同时存在正常转录本及异常转录本,但以正常转录本为主.结论 RASGRP2基因IVS3-1C＞G纯合突变是导致该家系先证者发生血小板功能障碍性出血的原因.RASGRP2基因IVS3-1C＞G突变导致RASGRP2异常剪接,发挥激活Rap1的RASGRP2蛋白缺失,进而导致血小板功能障碍.本研究为国内首次报道RASGRP2基因异常导致血小板功能障碍性出血,也是国际上首次报道该突变类型.

目的 运用生物信息学软件探讨3个遗传性血小板无力症家系的分子发病机制,为体外实验提供依据.方法对3个确诊遗传性血小板无力症家系进行基因分析.采用ClustalX-2.1-win软件分析突变位点同源序列保守性;采用PolyPhen-2、PROVEAN、SIFT、MutationTaster等软件分析突变位点危害性;采用spdbv软件构建突变蛋白结构模型,分析突变位点对蛋白质结构影响.结果3个血小板无力症家系发现"新突变"为ITGA2B:c.814G>C(p.Val272Leu)、ITGA2B:c.432G>A(p.Trp144Ter)及ACTN1:c.2458A>G(p.Ile820Val).3个突变位点均在同源物种间高度保守.MutationTaster预测结果显示3个新突变均有可能致病,PolyPhen-2和PROVEAN预测结果显示ITGA2B p.Val272Leu、ACTN1 p.Ile820Val为良性的,SIFT预测结果显示ITGA2B p.Val272Leu为有害的,而ACTN1 p.Ile820Val为良性的.突变蛋白质结构分析显示ITGA2B Val272突变为Leu后,原有氢键全部消失.ITGA2B Trp144突变为Ter后形成仅剩113个氨基酸残基的截短蛋白.2个突变均引起GPⅡb分子结构改变,导致GPⅡb/Ⅲa表达减低.ACTN1 Ile820突变为Val后,仅保留Ile820与Asp822的氢键,其余氢键消失,引起ACTN1分子结构改变,影响蛋白质功能.结论ITGA2B:c.814G>C(p.Val272Leu)、ITGA2B:c.432G>A(p.Trp144Ter)、ACTN1:c.2458A>G(p.Ile820Val)突变均有较高的致病可能性.

血小板无力症是一种遗传性血小板型出血性疾病,其发病机制是由ITGA2B或ITGB3基因突变导致GPⅡb/Ⅲa复合物数量或结构异常,引起血小板聚集功能障碍.GPⅡb或GPⅢa不同结构域突变对GPⅡb/Ⅲa的生物合成、转运及功能等的影响各异.该文总结血小板GPⅡb和GPⅢa的晶体结构与功能的关系,可为今后GT发病机制的预测提供一种思路.

血小板无力症Thromboasthenia是一种鲜见的综合病征，文献中对本病的报告不多，国内文献尚未见到报告。根据我们搜集到的资料，包括最近日本报告的3例及本文报告的3例在内，见于文献报告的病例将近170例。根据血液学检查所见的不同，此综合病征又可分为很多类型。但它们在临床上的共同特点均为具有家族性的慢性出血性素质，两性均可患病，两性亦均可遗传；血液检查方面的特点为出血时间显著延长，血小板数、凝血时间及血块收缩均属正常。学者们对本病所采用的名称颇不统一，计有：遗传性出血性血小板无力症，遗传性假性血友病，体质性血小板病，家族性紫瘢，弥慢性毛细管扩张症，出血性毛细管病，遗传性出血性素质及遗传性血小板无力症等等。命名虽有很大的分歧，但由此可以看出：本病的遗传性的见解已获得一致，而本病的病因究属是血小板病变抑或是毛细管的病变却没有得到一致的认识。

血小板无力症是由于Ⅱb/Ⅲa数量或结构异常,导致血小板对多种诱聚剂反应不良的少见遗传病.本文报道1例遗传性血小板无力症患者洁治后出血不止的病例.