目的:探讨应用转染重组大鼠血小板衍生生长因子-BB (rrPDGF-BB)基因的大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）对于牵张成骨的治疗效果。方法:2019年10月至2020年6月,选取48只幼年SD大鼠培养出48瓶BMSCs,其中24瓶使用慢病毒转染rrPDGF-BB基因；同时随机选取雄性成年SD大鼠72只,制作大鼠右侧股骨牵张成骨模型,将大鼠平均分为3组,分别在各组牵张间隙注射PBS(空白对照组)、未干预的BMSCs（阴性对照组）和转染rrPDGF-BB基因的大鼠BMSCs（实验组）,随后用影像学和组织学染色方法等评价该实验结果。将数据进行统计学分析, P<0.05为差异有统计学意义。 结果:培养的大鼠BMSCs长势良好,第3代BMSCs低表达CD34（0.1%）和CD45（2.8%）、高表达CD29（95.1%）,和文献描述的BMSCs表型一致；转染基因后,发现绿色荧光的表达随着转染时间的延长而逐渐增强,证实转染成功；制作大鼠股骨牵张成骨模型后,经过14 d牵张,所有大鼠达到预期牵张距离；在2、4、8周不同时间点观察,股骨标本大体观察,实验组牵张间隙可见连续性骨痂,硬度、颜色接近正常骨组织,牵张间隙活动度较差,低于空白对照组；X线片提示,实验组牵张间隙新生骨痂更多,骨髓腔较对照组提前再通；Micro-CT检查提示,实验组愈合较好,离断端已连接,矢状面可见骨髓腔再通；标本Micro-CT参数表明,实验组骨小梁厚度（0.297±0.005）mm、骨小梁数量（1.663±0.032）mm、骨体积分数（59.832±2.187）%和骨密度（0.586±0.014）g/cm 3最大,实验组骨小梁分离度（0.399±0.051）mm最小,各组之间差异有统计学意义（ P<0.05）；苏木精-伊红（HE）染色和VEGF免疫组化染色证实,实验组较空白对照组更早、更多形成血管及软骨细胞。8周时实验组镜下可见新生骨痂连接成片,骨髓腔有再通趋势,腔内可见大量红细胞。 结论:研究结果表明注射rrPDGF-BB基因转染的BMSCs可能促进大鼠牵张区新骨的形成,缩短新生骨痂的矿化时间,促进牵张成骨区域新生骨的成熟。

目的 探讨肉苁蓉苯乙醇总苷(phenylethanol glyco-sides from cistanche tubuiosa,CPhGs)脂质体对大鼠肝星状细胞(HSC-T6)凋亡的影响及其抗肝纤维化的相关分子机制.方法 培养HSC-T6,取生长状态良好的对数生长期细胞用于实验,采用重组大鼠血小板衍生生长因子BB(rrPDGF-BB)刺激HSC-T6,构建体外肝纤维化模型.MTT法测定CPhGs脂质体(29.45、14.72、7.36 mg·L-1)对HSC-T6增殖的影响;AnnexinV-FITC/PI细胞凋亡双染试剂标记后,流式细胞仪检测CPhGs脂质体不同浓度组的细胞凋亡率;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测 α-SMA、Collagen I、CollagenⅢmRNA的表达水平;Western blot法检测CPhGs脂质体对p-JNK蛋白表达的影响.结果 不同浓度CPhGs脂质体均可抑制rrPDGF-BB诱导的HSC-T6的增殖;CPhGs脂质体(29.45、14.72 mg·L-1)组凋亡率明显升高;qRT-PCR结果显示,CPhGs脂质体不同浓度组均可下调α-SMA、Collagen I、CollagenⅢmRNA水平的表达,并能降低p-JNK蛋白的表达.结论 CPhGs脂质体能抑制大鼠HSC-T6的增殖并诱导其凋亡,其作用可能与抗肝纤维化有关.

目的:探讨毛蕊花糖苷对血小板衍生生长因子BB(PDGF-BB)诱导的大鼠肝星状细胞(HSC)活化、迁移、胶原沉积、纤维化作用的影响,并进一步探讨其对ERK1/2、Akt信号通路表达的影响.方法:HSC细胞分为毛蕊花糖苷(1.5、3.0、6.0 mg/L)组[重组大鼠PDGF-BB(rrPDGF-BB)预处理24h后,不同浓度的毛蕊花糖苷干预],PDGF-BB组(rrPDGF-BB预处理24h,无毛蕊花糖苷干预),对照组(无rrPDGF-BB预处理,无毛蕊花糖苷干预);分别采用划痕实验检测细胞迁移能力,ELISA法检测Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)含量,Western blot检测纤维化HSC活化标志物α-SMA蛋白、凋亡效应分子caspase-3,及ERK1/2、Akt信号通路相关蛋白的表达水平.结果:与对照组比较,PDGF-BB组能促进HSC的迁移(P＜0.01),毛蕊花糖苷(1.5、3.0、6.0 mg/L)组能明显抑制HSC的迁移(P＜0.01),且毛蕊花糖苷抑制HSC的迁移有明显的剂量依赖性(r=0.894,P=0.038);随着受试物浓度的增加,Col-Ⅰ分泌呈现降低趋势,其中毛蕊花糖苷6 mg/L组抑制胶原产生的作用效果最明显(P＜0.01);毛蕊花糖苷(1.5,3.0,6.0 mg/L)组能够抑制α-SMA蛋白的表达、激活caspase-3的活性,使ERK1/2、P-ERK1/2、Akt、P-Akt蛋白表达明显降低,且测定蛋白的表达在毛蕊花糖苷各剂量组间也呈现一定的剂量-效应关系(0.826＜r＜0.997,P＜0.01).结论:毛蕊花糖苷可抑制rrPDGF-BB诱导的HSC的活化、迁移和纤维化作用,其机制可能与毛蕊花糖苷激活caspase-3,阻断ERK1/2、Akt信号通路,抑制HSC中细胞外基质过度沉积及胶原形成有关.

目的:体外评价不同浓度人重组血小板衍生生长因子BB(recombinant human platelet derived growth factor-BB,rhPDGF-BB)对糖尿病大鼠骨髓基质干细胞(BMSCs)迁移的影响,以及基质细胞衍生因子(stromal cell-derived factor 1,SDF-1)和其G蛋白偶联受体CXCR4调控作用的相关机制,为rhPDGF-BB应用于临床糖尿病患者相关骨修复再生治疗提供理论基础.方法:建立链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠动物模型.体外培养糖尿病大鼠BMSCs,作为对照组.采用Transwell小室趋化模型,以浓度0、10、50、100 ng/mL rhPDGF-BB作用BMSCs,检测其体外趋化作用;定时定量RCR检测BMSCs SDF-1、CXCR4mRNA的表达变化,筛选出药物最佳作用浓度:应用PI3K/Akt抑制剂,反向证实rhPDGF-BB对BMSCs的SDF-1、CXCR4表达的调节作用.采用SPSS 17.0软件包对数据进行统计学分析.结果:链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠,1周后选取大鼠尾静脉血糖浓度高于16.7 mmol/L者为建模成功大鼠.与糖尿病大鼠的BMSCs相比,rhPDGF-BB促进糖尿病大鼠BMSCs的迁移,50 ng/mL rhPDGF-BB为促进糖尿病大鼠BMSCs迁移的最佳作用浓度,PI3K/Akt抑制剂明显抑制糖尿病大鼠BMSCs的迁移.结论:rhPDGF-BB促进糖尿病大鼠BMSCs的迁移,并通过SDF-1/CXCR4轴,调节糖尿病大鼠BMSCs的迁移.

目的 探讨肉苁蓉苯乙醇总苷(CPhGs)脂质体对重组大鼠血小板衍生生长因子-BB(rrPDGF-BB)诱导的大鼠肝星状细胞(HSC)增殖作用的影响及其抗肝纤维化的相关分子机制.方法 取生长状态良好的对数生长期HSC用于实验,置于CPhGs脂质体浓度为117.79、58.90、29.45、14.72、7.36、3.68、1.84、0.92和0.46 mg/L的完全培养液,求出半数抑制浓度(IC50);rrPDGF-BB刺激后,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定29.45、14.72、7.36 mg/LCPhGs脂质体对HSC增殖的影响;采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、工型胶原、ATF-2 mRNA的表达水平;采用Western blot法检测CPhGs脂质体对p-p38蛋白表达的影响.结果 (1)对细胞增殖的影响:对不同时间点结果分析显示,与Normal组比较,细胞培养48 h时,rrPDGF-BB组HSC细胞明显增多;CPhGs脂质体各剂量组抑制rrPDGF-BB诱导的HSC增殖作用,培养48 h效率最高;对不同浓度结果分析显示,与rrPDGF-BB组比较,不同浓度CPhGs脂质体组均可抑制rrPDGF-BB诱导的HSC-T6的增殖.(2) qRT-PCR结果:CPhGs脂质体各剂量组间比较,随CPhGs脂质体药物浓度增大,α-SMA、工型胶原和ATF-2 mRNA水平显著下降,差异有统计学意义(P＜0.05),其中以CPhGs脂质体29.45 mg/L组抑制效果最明显.(3) Western blot分析结果:p-p38蛋白的表达水平在CPhGs脂质体不同浓度组表达均下降,差异有统计学意义(P＜0.05);CPhGs脂质体各剂量组间比较,p-P38蛋白随CPhGs脂质体干预剂量增大,表达水平显著下降(P＜0.05).结论 CPhGs脂质体能抑制rrP-DGF-BB诱导的大鼠HSC增殖,从而起到抗肝纤维化的作用.

目的 研究芦荟多糖对糖尿病足溃疡大鼠创面愈合的影响及相关机制.方法 采用腹腔注射1％链脲佐菌素(STZ)60 mg·kg-1的方法构建糖尿病大鼠模型,另选取15只大鼠为空白组,腹腔注射等量柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液;糖尿病大鼠模型构建成功后制备糖尿病足溃疡创面模型.将糖尿病足溃疡大鼠随机分为模型组、实验组和对照组,各15只.实验组于创面外敷浸湿10％芦荟多糖溶液的纺纱,对照组外涂重组牛碱性成纤维细胞生长因子,空白组和模型组外敷浸湿生理盐水的纺纱,每日换药2次,直至创面完全愈合.观察各组糖尿病大鼠创面愈合情况,用酶联免疫吸附法测定糖尿病足溃疡大鼠血清碱性成纤维因子(bFGF)、血小板衍生生长因子-BB(PDGF-BB)及白细胞介素-1(IL-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;用蛋白质印迹(WB)法检测创面组织Wnt/β-catenin蛋白表达.结果 治疗后14 d,空白组、模型组、实验组和对照组糖尿病足溃疡大鼠的创面愈合率分别为(95.46±2.14)％,(65.15±2.48)％,(89.45±3.15)％,(85.46±2.75)％,与模型组比较,其他各组差异均有统计学意义(P<0.05).与空白组相比,模型组大鼠血清bFGF、PDGF-BB水平降低,而血清IL-1、TNF-α水平升高(均P<0.05);与模型组比较,实验组和对照组血清bFGF、PDGF-BB水平升高,而血清IL-1、TNF-α水平降低(均P<0.05).治疗后14 d,空白组、模型组、实验组和对照组大鼠创面组织R-脊椎蛋白3(Rspo3)蛋白表达量分别为1.15±0.21,0.45±0.14,0.89±0.12,0.96±0.10;糖原合成激酶-3β(GSK-3β)蛋白表达量分别为0.24±0.03,1.16±0.34,0.49±0.05,0.52±0.12;β-连环素(β-catenin)蛋白表达量分别为0.99±0.10,0.36±0.05,0.67±0.04,0.82±0.06,与模型组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05).结论 芦荟多糖可降低糖尿病足溃疡大鼠血清炎性因子水平,升高生长因子水平,同时可调控Wnt/β-catenin通路蛋白表达进而促进大鼠创面愈合.

该研究探讨了成纤维细胞生长因子9(fibroblast growth factor 9,FGF9)在肺动脉高压(pulmonary arterial hypertension,PAH)及肺血管平滑肌细胞表型转化中的作用.建立野百合碱(monocrotaline,MCT)诱导的大鼠肺动脉高压模型,Western blot检测大鼠肺组织中FGF9的表达情况.血小板衍生生长因子-BB(platelet-derived growth factor BB,PDGF-BB)诱导肺动脉平滑肌细胞(pulmonary artery smooth muscle cells,PASMCs)表型转化,Western blot检测PASMCs中FGF9的表达情况.重组人成纤维细胞生长因子9(recombinant human fibroblast growth factor 9,rhFGF9)干预PASMCs,通过划痕实验检测细胞迁移能力,Western blot检测细胞表型相关蛋白[α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、骨桥蛋白(osteopontin,OPN)]、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)及血小板衍生生长因子受体β(platelet-derived growth factor receptor β,PDGFR-β)的表达水平.siRNA抑制FGF9后,Western blot检测PASMCs表型与PCNA蛋白水平.结果显示,大鼠肺组织及PASMCs中FGF9的表达显著降低(P＜0.05);PDGF-BB下调PDGFR-β与收缩表型标志物α-SMA的表达(P＜0.05),同时上调PCNA与合成表型标志物OPN的表达(P＜0.05),且细胞的迁移能力增加;rhFGF9抑制PDGF-BB诱导的细胞表型转化和细胞迁移,而不影响PCNA与PDGFR-β的表达;下调FGF9可降低α-SMA(P＜0.05)的表达,而PCNA与OPN的表达无显著改变,即下调FGF9后,平滑肌细胞的收缩表型发生改变.总之,rhFGF9抑制PDGF-BB诱导的平滑肌细胞表型转化和迁移,下调FGF9能改变平滑肌细胞的收缩表型,提示FGF9可能参与肺动脉高压的病理过程.

目的:探究血府逐瘀合剂对血小板衍生生长因子(PDGF)-BB诱导的血管平滑肌细胞增殖、迁移及磷脂酰肌醇3-激酶/丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶/糖元合成酶激酶3β/β-连环蛋白(PI3K/AKT/GSK-3β/β-catenin)信号通路的影响.方法:利用重组鼠PDGF-BB体外刺激大鼠胸大动脉平滑肌细胞A7R5诱导增殖、迁移模型,分为6组:对照组、PDGF-BB组、低剂量血府逐瘀合剂+PDGF-BB组、高剂量血府逐瘀合剂+PDGF-BB组、PI3K激活剂+PDGF-BB组、PI3K激活剂+高剂量血府逐瘀合剂+PDGF-BB组,CCK-8法检测A7R5细胞增殖活力;流式细胞术检测A7R5细胞周期;细胞划痕实验检测A7R5细胞迁移情况;免疫印迹检测A7R5细胞增殖、迁移相关蛋白及PI3K/AKT/GSK-3β/β-catenin信号通路相关蛋白.结果:与对照组比较,PDGF-BB组A7R5细胞增殖率、迁移面积、S期比例,PCNA、cyclin D1、MMP9蛋白及p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-GSK-3β/GSK-3β、胞核β-catenin/总β-catenin蛋白比值显著增加,G0/G1期比例、E-cadherin蛋白显著减少(P<0.05);与PDGF-BB组比较,低、高剂量血府逐瘀合剂+PDGF-BB组A7R5细胞增殖率、迁移面积、S期比例,PCNA、cyclin D1、MMP9蛋白及p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-GSK-3β/GSK-3β、胞核β-catenin/总β-catenin蛋白比值显著减少,G0/G1期比例、E-cadherin蛋白显著增加,且高剂量血府逐瘀合剂+PDGF-BB组优于低剂量血府逐瘀合剂+PDGF-BB组(P<0.05);与高剂量血府逐瘀合剂+PDGF-BB组比较,PI3K激活剂+高剂量血府逐瘀合剂+PDGF-BB组A7R5细胞增殖率、迁移面积、S期比例,PCNA、cyclin D1、MMP9蛋白,p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-GSK-3β/GSK-3β、胞核β-catenin/总β-catenin蛋白比值显著增加,G0/G1期比例、E-cadherin蛋白显著减少(P<0.05).结论:血府逐瘀合剂可抑制PDGF-BB诱导的血管平滑肌细胞增殖、迁移,可能通过抑制PI3K/AKT/GSK-3β/β-catenin信号通路而实现.