目的:探讨季铵化壳聚糖-重组组织因子途径抑制物（rTFPI）复合物对大鼠碾压撕脱皮瓣的影响。方法:采用实验研究方法。采用离子交联法制备季铵化壳聚糖-rTFPI复合物溶液，用扫描电子显微镜观察复合物形态并测量其直径，用酶联免疫吸附测定（ELISA）法测定并计算复合物中rTFPI的包封率和复合物载药率（样本数为3），采用ELISA法测定放置0、10、30、45、60、90、120、240 min时溶液中rTFPI浓度（观察rTFPI释放情况）并计算其半衰期（样本数为3）。取24只6周龄雄性SD大鼠，按照随机数字表法分为磷酸盐缓冲液（PBS）组、单纯季铵化壳聚糖组、单纯rTFPI组和季铵化壳聚糖-rTFPI组（每组6只），大鼠背部均制备蒂部位于双侧髂棘连线上、从肌膜表面掀起的碾压撕脱皮瓣，原位缝合后即刻及术后1、2、3 d分别注射1次相应试剂治疗。术后1、3、7 d观察皮瓣大体变化；术后7 d，测量皮瓣成活面积并计算皮瓣成活率；将皮瓣平均分为蒂部、近段、中段、远段，用激光散斑血流成像仪检测皮瓣近段、中段、远段组织血流灌注情况；切取皮瓣中段组织行苏木精-伊红染色，观察组织结构变化和炎症细胞浸润情况，计数每100倍视野中栓塞血管和新生血管。对数据行单因素方差分析和LSD检验。结果:季铵化壳聚糖-rTFPI复合物呈不规则球形结构，直径为150~200 nm；复合物中rTFPI的包封率为（88.7±2.1）%，复合物的载药率为（2.83±0.09）%。季铵化壳聚糖-rTFPI复合物溶液中rTFPI浓度随放置时间延长而逐渐增加，90 min时释放基本稳定，半衰期为（651±36）min。术后1 d，单纯季铵化壳聚糖组大鼠皮瓣远段变黑比较明显；术后3 d，单纯rTFPI组和季铵化壳聚糖-rTFPI组大鼠皮瓣远段结痂、坏死较另外2组轻；术后7 d，各组大鼠皮瓣坏死界限清晰。术后7 d，单纯rTFPI组和季铵化壳聚糖-rTFPI组大鼠皮瓣成活率分别为（63±7）%、（73±5）%，较PBS组的（41±3）%和单纯季铵化壳聚糖组的（52±7）%显著升高（ P<0.05）；季铵化壳聚糖-rTFPI组大鼠皮瓣成活率较单纯rTFPI组明显升高（ P<0.05）。术后7 d，各组大鼠皮瓣均有血流灌注；单纯季铵化壳聚糖组大鼠皮瓣近段组织血流灌注值以及单纯rTFPI组和季铵化壳聚糖-rTFPI组大鼠皮瓣近段、中段、远段组织血流灌注值明显高于PBS组（ P<0.05或 P<0.01），单纯rTFPI组大鼠皮瓣远段组织血流灌注值以及季铵化壳聚糖-rTFPI组大鼠皮瓣中段和远段组织血流灌注值明显高于单纯季铵化壳聚糖组（ P<0.05或 P<0.01），季铵化壳聚糖-rTFPI组大鼠皮瓣中段组织血流灌注值明显高于单纯rTFPI组（ P<0.01）。术后7 d，PBS组和单纯季铵化壳聚糖组大鼠皮瓣中段组织中炎症细胞浸润较多，细胞水肿明显；与前面2组相比，单纯rTFPI组和季铵化壳聚糖-rTFPI组大鼠皮瓣中段组织炎症程度显著降低，栓塞血管数明显减少（ P<0.05或 P<0.01），新生血管数明显增多（ P<0.05或 P<0.01）；与单纯rTFPI组比较，季铵化壳聚糖-rTFPI组大鼠皮瓣中段组织中新生血管数显著增多（ P<0.05）。 结论:通过季铵化壳聚糖装载rTFPI能够起到缓释rTFPI的效果；季铵化壳聚糖-rTFPI复合物较单纯rTFPI能够进一步改善大鼠碾压撕脱皮瓣的血流灌注，提高皮瓣成活率。

组织因子途径抑制物（tissue factor pathway inhibitor，TFPI）是组织因子诱导的凝血过程的负性调节物之一。TFPI主要由微血管内皮细胞合成，可直接抑制因子Xa，并与因子Xa结合反馈抑制因子Ⅶa／组织因子复合物。在许多疾病诸如播散性血管内凝血（DIC）、缺血性心脏病、糖尿病、肝肾功能衰竭、晚期癌症等皆有升高，并在一定程度上与疾病的严重程度与预后相关。此外，随着重组TFPI的成功制备、动物实验的肯定结果及研究工作的不断完善，其在DIC、抗凝、溶栓和血友病治疗方面具有广阔的应用前景。

目的:探讨组织因子途径抑制物2(TFPI-2)对心房成纤维细胞和心房肌细胞功能的影响及相关分子机制.方法:采用ELISA法检测15例心房颤动(AF)患者和15名正常对照血清TFPI-2水平.分离、培养并鉴定SD乳鼠心房成纤维细胞和心房肌细胞.通过CCK-8实验检测0、50、100、200μg/L重组TFPI-2蛋白(rTFPI-2)处理24、48 h对心房成纤维细胞增殖能力的影响.采用Transwell小室实验检测100μg/L rTFPI-2处理24 h对心房成纤维细胞迁移能力的影响,采用Annexin V-FITC/PI双染法检测rTFPI-2处理48 h对心房成纤维细胞和心房肌细胞凋亡的影响,采用Western blot法检测细胞中相关蛋白的表达.结果:AF患者血清TFPI-2水平低于正常对照(P<0.05).成功分离、培养SD乳鼠心房成纤维细胞和心房肌细胞并鉴定.rTFPI-2可抑制心房成纤维细胞增殖、迁移,并促进其凋亡(P<0.05),但rTFPI-2不增加心房肌细胞凋亡(P>0.05).rTFPI-2下调心房成纤维细胞p-Erk1/2及MMP-9和MMP-2表达,上调PARP表达(P<0.05),但对心房肌细胞PARP表达无显著影响(P>0.05);rTFPI-2抑制两种细胞Ⅲ型、Ⅰ型胶原表达(P<0.05).结论:TFPI-2可抑制心房成纤维细胞增殖和迁移,促进心房成纤维细胞凋亡,但不增加心房肌细胞凋亡,TFPI-2能抑制两种细胞胶原合成;TFPI-2具有抑制心房纤维化的潜在价值.

[目的]探究组织因子途径抑制物(TFPI)对大鼠心肌缺血再灌注(I/R)及心肌细胞缺氧复氧(H/R)损伤的影响,并从心肌细胞凋亡的变化探索其机制.[方法]在体内实验中,通过SD大鼠心脏原位结扎法可逆阻断前降支建立大鼠心肌I/R模型.将大鼠随机分为对照组、I/R组和I/R+rTFPI(重组TFPI)组,再灌注后3天采用HE染色观察大鼠心肌组织形态学变化,TTC染色法评估心肌梗死区范围,扫描透射电镜观察心肌超微结构损伤情况,Western blot法检测各组大鼠心肌组织中Bcl-2、Bax和cleaved Caspase-3蛋白的表达.在体外实验中,采用胰酶消化法及差速贴壁法培养SD乳鼠原代心肌细胞,用MIC101系统模拟心肌细胞I/R损伤,缺氧2 h、复氧12 h后建立体外心肌细胞H/R模型.将心肌细胞分为对照组、H/R组和H/R+rTFPI(10 μg/L)组,用CCK-8法检测心肌细胞活力,TUNEL法检测心肌细胞凋亡率,Western blot法检测心肌细胞中Bax、Bcl-2及cleaved Caspase-3蛋白的表达水平.[结果]体内实验中,成功建立大鼠在体心肌I/R模型.HE染色结果显示I/R组较对照组心肌细胞坏死程度加重,I/R+rTFPI组较I/R组心肌细胞坏死程度减低;TTC染色示I/R+rTFPI组较I/R组心肌梗死范围减少了39.76％(P＜0.05);扫描透射电镜观察显示I/R组凋亡及损伤程度较对照组加重,I/R+rTFPI组凋亡及损伤较I/R组减轻;Western blot结果示,再灌注3天后I/R组心肌组织Bcl-2的表达较对照组降低了 53.43％(P＜0.05),Bax和cleaved Caspase-3的表达较对照组分别增加了 29.05％和73.25％(P＜0.05),而I/R+rTFPI组Bcl-2的表达水平较 I/R 组升高了 55.01％(P＜0.05),Bax 和 cleaved Caspase-3 的表达水平较 I/R 组分别降低了 13.77％和 24.25％(P＜0.05).在体外实验中,CCK-8检测结果显示H/R组细胞活力较对照组下降了 29.70％(P＜0.05),H/R+rTFPI组细胞活力较H/R组升高了 19.77％(P＜0.05).TUNEL结果显示H/R组较对照组凋亡率增加了 56.76％,H/R+rTFPI组细胞凋亡率较H/R组降低了 24.55％(P＜0.05).Western blot结果示,H/R组细胞Bcl-2表达较对照组降低了 46.92％,Bax表达较对照组增加了 41.90％(P＜0.05),cleaved Caspase-3表达较对照组升高了 2.68倍(P＜0.05);H/R+rTFPI 组 Bcl-2 表达较 H/R 组增加了 28.24％(P＜0.05),Bax 及 cleaved Caspase-3 表达较 H/R 组分别降低了 26.34％和57.60％(P＜0.05).[结论]TFPI可显著拮抗心肌I/R和心肌细胞H/R损伤,此效应与其抑制心肌细胞凋亡有关.