目的 探讨金复康口服液联合吉非替尼对肺腺癌H1975 细胞有氧糖酵解的影响.方法 首先采用CCK-8 法检测不同浓度金复康口服液和吉非替尼对H1975 细胞增殖的影响;然后实验分为空白组、吉非替尼组、金复康口服液组和联合用药组,采用 2-NBDG荧光探针和乳酸测试盒分别检测各组细胞葡萄糖摄取能力及乳酸生成量,酶活性试剂盒检测细胞中糖酵解关键限速酶[己糖激酶(HK)、磷酸果糖激酶(PFK)、丙酮酸激酶(PK)]的活性,Western blot法检测细胞中己糖激酶2(HK2)、P型磷酸果糖激酶(PFKP)、M2 型丙酮酸激酶(PKM2)蛋白表达情况,JC-1、DCFH-DA荧光探针分别检测细胞线粒体膜电位和活性氧(ROS)水平.结果 金复康口服液对H1975 细胞的生长抑制作用呈时间和剂量依赖性增强,差异均有统计学意义(P均＜0.05);与不同浓度吉非替尼单独作用48h比较,相应浓度吉非替尼联合金复康口服液作用后的H1975 细胞增殖抑制率均更高(P均＜0.05).各给药组细胞葡萄糖相对摄取量与空白组比较差异均无统计学意义(P均＞0.05);各给药组细胞乳酸生成量均明显低于空白组(P均＜0.05),且联合用药组明显低于吉非替尼组和金复康口服液组(P 均＜0.05);吉非替尼组 PFK、PK 活性,金复康口服液组HK、PFK活性,联合用药组HK、PFK、PK活性均明显低于空白组(P均＜0.05),且金复康口服液组与联合用药组HK、PFK活性均明显低于吉非替尼组(P均＜0.05).金复康口服液组和联合用药组HK2、PFKP、PKM2 蛋白相对表达量及吉非替尼组PFKP蛋白相对表达量均明显低于空白组(P均＜0.05),且金复康口服液组和联合用药组HK2、PFKP、PKM2 蛋白相对表达量均明显低于吉非替尼组(P均＜0.05).与空白组比较,各给药组细胞线粒体膜电位明显下降,ROS明显增加,且联合用药组细胞线粒体膜电位下降和ROS增加更明显.结论 金复康口服液能通过抑制有氧糖酵解途径,降低细胞线粒体膜电位,促进ROS产生,增加H1975 细胞对吉非替尼的敏感性.

目的:研究金复康口服液(JFK)诱导人非小细胞肺癌细胞A549凋亡的作用机制.方法:取对数生长期的人非小细胞肺癌细胞A549,随机分为空白组和药物组,采用溴化四甲基偶氮(MTT)比色法,考察不同质量浓度JFK(0.3,1.5,3,7.5,15,30 g·L-1)对A549细胞体外增殖能力的影响.通过平板克隆形成实验考察JFK对A549细胞平板克隆形成的影响,利用流式细胞仪考察JFK对A549细胞凋亡的影响;蛋白免疫印迹法(Western blot)考察JFK对裂解DNA修复酶(cleavedPARP),活化型半胱天冬酶-3(actived Caspase-3),Wnt/β-联蛋白(β-catenin),细胞周期蛋白D1(cyclinD1)的蛋白表达及对促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路和蛋白激酶B(Akt)信号通路的影响,实验中设置空白组和药物组,药物组为A549细胞加入15,30 g·L-1JFK,分别干预24 h,30 min.结果:JFK在1.5～30 g·L-1呈质量浓度依赖性的抑制A549细胞外增殖(P＜0.01).JFK抑制A549细胞的平板克隆形成在15～30 g·L-1,其中JFK 30 g·L-1时抑制A549细胞的平板克隆最显著(P＜0.01).与空白组比较,JFK 15 ～30 g·L-1可提高Annexin V和PI双阳细胞率,诱导A549细胞凋亡(P＜0.05),且呈浓度依赖性提高cleaved PARP和actived Caspase-3的蛋白表达,并抑制β-catenin和cyclinD1在蛋白水平的表达(P＜0.05,P＜0.01).JFK上调MAPK信号通路中JNK和p38的蛋白磷酸化水平(P＜0.05),同时下调Akt信号通路中Akt在T308和S473的位点磷酸化水平(P＜0.05).结论:金复康口服液抑制人非小细胞肺癌细胞A549的体外增殖、平板克隆的形成并诱导其凋亡,部分通过调控JNK/p38/MAPK信号通路和Akt信号通路,抑制β-catenin和cyclinD1,同时提高凋亡相关蛋白cleaved PARP和actived Caspase-3的表达.

目的:研究金复康口服液联合吉西他滨对气阴两虚型非小细胞肺癌患者的疗效和血清MMP-9水平的影响.方法:选取符合纳入标准的120例气阴两虚型非小细胞肺癌患者作为研究对象,随机分为对照组和治疗组,每组60例.对照组给予吉西他滨,治疗组给予金复康口服液联合吉西他滨.比较两组患者临床疗效、血压情况、雌激素水平和不良反应发生情况.结果:治疗后,治疗组的有效率和临床获益率显著高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);治疗组FACT-L评分下降率显著低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);治疗组中医证候有效率显著高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);两组患者MMP-9水平均显著优于治疗前,差异具有统计学意义(P<0.05);且治疗组患者改善程度高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05).治疗组患者不良反应发生率显著低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05).结论:金复康口服液联合吉西他滨治疗气阴两虚型非小细胞肺癌,具有较好的治疗效果,并且能够改善患者生活质量和中医证候,安全性好,值得在临床上推广应用.

目的 研究金复康口服液联合注射用培美曲塞二钠治疗非小细胞肺癌的临床疗效.方法 选取2016年1月—2018年1月南京市胸科医院诊治的120例非小细胞肺癌患者作为研究对象,采用随机对照表法将患者分为对照组和治疗组,每组各60例.对照组静脉滴注注射用培美曲塞二钠500 mg/m2,静脉输注10 min以上;治疗组患者在对照组治疗的基础上口服金复康口服液,30 mL/次,3次/d.21 d为1个疗程,两组均持续治疗2个疗程.观察两组患者的临床疗效,同时比较两组治疗前后的生活质量(QOL)评分、KPS评分、无进展生存期(PFS)、总生存期(OS)和免疫功能指标水平.结果 治疗后,对照组和治疗组的客观缓解率和疾病控制率比较差异无统计学意义.治疗后,两组患者QOL和KPS评分均显著升高,同组治疗前后比较差异具有统计学意义(P<0.05);且治疗后治疗组QOL评分和KPS评分显著高于对照组,两组比较差异具有统计学意义(P<0.05).治疗后,治疗组患者PFS和OS显著长于对照组,两组比较差异具有统计学意义(P<0.05).治疗后,两组患者CD3+、CD4+、NK和CD4+/CD8+水平显著升高,同组治疗前后比较差异具有统计学意义(P<0.05);且治疗后治疗组免疫功能指标水平显著高于对照组,两组比较差异具有统计学意义(P<0.05).结论 金复康口服液联合注射用培美曲塞二钠治疗非小细胞肺癌具有较好的临床疗效,能够改善患者生活质量,提高免疫功能,且安全性较高,具有一定临床推广应用价值.

目的 基于网络药理学分析金复康口服液治疗非小细胞肺癌机制.方法 通过建立化学成分、靶点、疾病数据库,进行主要活性成分和靶标筛选,并对其进行多层次复杂网络分析、GO及KEGG通路富集分析.结果 金复康口服液中筛选出85个满足类药性评估的主要活性化合物,以及130个复方的主要作用靶标.多层次网络模型分析显示,复方网络与疾病网络具有较好的节点相似性;生物功能的富集分析显示,与疾病显著共关联的信号通路主要有PI3K-Akt信号通路、TNF信号通路、催乳激素信号通路及凋亡信号通路等7条通路.结论 网络药理学可从整体上揭示金复康口服液治疗非小细胞肺癌的作用机制,并为该制剂二次开发及基础研究提供依据.

目的 观察富氢水、中成药(金复康口服液)或两者协同干预对胆管癌成瘤的影响.方法 实验分为四组:对照组(n=10),富氢水组(n=10),金复康口服液组(n=5)和富氢水+金复康口服液组(n=5).对照组予以成年SD雄性大鼠自由饮用含有硫代乙酰胺(300 mg/L)水,实验组在饮用含硫代乙酰胺水的同时,分别经胃灌注适量富氢水、金复康口服液、富氢水+金复康口服液,20周处死所有大鼠,肉眼和显微镜下观察肝成瘤情况.结果 9只可评价对照组大鼠在第20周时均形成肉眼以及镜下可见的肿瘤100％(9/9),而富氢水干预组7只大鼠可评价,肝肿瘤发生率为57.1％(4/7),金复康口服液干预组大鼠肝内肿瘤的成瘤率为40％(2/5),富氢水联合金复康口服液干预组大鼠肝内成瘤率为0(0/5).结论 富氢水+金复康口服液的协同作用能够成功阻断大鼠肝内胆管癌的发生.

目的 观察辨证辨病结合的Ⅲb～Ⅳ期非小细胞肺癌中医治疗方案的临床疗效.方法 采用多中心、前瞻性、随机、对照的研究方法,将2015年10月至2017年1月收治的89例气阴两虚型Ⅲb～Ⅳ期非小细胞肺癌患者分为治疗组(予中医综合治疗方案)44例、对照组(予单独化疗治疗)45例.对照组予含铂两药化疗.治疗组在对照组的基础上,口服金复康口服液合软化汤,治疗2个周期后对患者进行定期随访.主要指标为近期疗效、生存质量、中医症状改善情况、免疫功能等.结果 在瘤灶控制率方面,治疗组的靶病灶客观缓解率29.55％、疾病控制率95.46％,对照组客观缓解率2.00％、疾病控制率73.1％,治疗组显著优于对照组(P＜0.05);在体力状况评分方面,治疗组患者的KPS评分提高18例,稳定25例,下降1例,对照组提高1例,稳定29例,下降15例,治疗组较对照组有明显的改善(P＜0.05);在临床证候积分的改善方面,治疗组积分变化显效5例,有效27例,无效12例,对照组积分变化显效1例,有效5例,无效39例,治疗组的中医证候疗效优于对照组(P＜0.05).结论 金复康口服液合软化汤联合化疗可以稳定及缩小病灶,提高患者生活质量,改善气阴两虚型晚期肺癌化疗患者临床症状,具有较好的安全性.金复康口服液合软化汤联合化疗治疗气阴两虚型Ⅲb ～Ⅳ期非小细胞肺癌是一种行之有效的治疗方法.

目的 研究金复康口服液对人肺腺癌PC9细胞及耐药PC9/R细胞的吉非替尼增敏作用及机制.方法 金复康口服液20 mg/mL联合不同浓度的吉非替尼(40、20、10、5、2μmol/L)作用于PC9/R细胞,CCK-8法检测细胞增殖;培养PC9、PC9/R细胞,分为对照组、金复康口服液组、吉非替尼组、联合用药组,流式细胞术检测PC9、PC9/R细胞周期和凋亡.在BALB/c裸鼠右前肢腋窝皮下接种PC9/R细胞建立裸鼠移植瘤模型,观察金复康口服液联合吉非替尼的体内抑瘤作用;对AKT、p-AKT、PTEN、PDCD4蛋白表达的影响和对miRNA-21表达的影响.结果 与吉非替尼(2、5、10、20 μmol/L)组比较,吉非替尼(2、5、10、20 μmol/L)+金复康口服液(20 mg/mL)组的PC9/R细胞抑制率显著增加(P＜0.01);与吉非替尼组比较,联合用药可以通过显著增加早期凋亡细胞比例诱导PC9及PC9/R细胞凋亡,并使PC9、PC9/R细胞停滞在DNA合成前期,从而抑制细胞增殖,差异均具有统计学意义.体内实验表明,与吉非替尼组比较,联合用药显著抑制裸鼠PC9/R移植瘤的生长(P＜0.05),且能显著降低裸鼠PC9/R组织p-AKT表达(P＜0.05),增强PTEN、PDCD4的表达(P＜0.05),联合用药组裸鼠PC9/R瘤组织miRNA-21的表达显著降低(P＜0.05).结论 金复康口服液能提高人肺腺癌PC9/R细胞对吉非替尼的敏感性,其作用的可能机制为通过降低miRNA-21的表达从而增强PTEN、PDCD4的表达以抑制AKT通路活性.

目的 中药制剂金复康口服液治疗肺癌的临床疗效已得到肯定,但机制尚不清楚.本研究探讨金复康口服液含药血清抑制肺癌淋巴管新生方向,探究其抑制肿瘤转移的分子学机制.方法 将20只SD大鼠随机分为金复康口服液高剂量组[15 g/(kg·d)]、中剂量组[10 g/(kg· d)]、低剂量组[5 g/(kg·d)]和Control组(生理盐水),每组5只.IL-4+为使用白细胞介素4(interhukin 4,IL-4)刺激的RAW264.7细胞,IL-4-为无任何刺激干预的RAW264.7细胞.流式细胞术分析其细胞表面CD206表达来检测RAW264.7细胞极化成M2型的情况.根据含药血清将共培养模型分为高剂量组、中剂量组、低剂量组、Control组和Blank组(不加舍药血清),Elisa法检测共培养模型下室培养基中血管内皮生长因子-C/D(vascular endothelial growth factor C/D,VEGF-C/D)蛋白含量;蛋白质印迹法检测下室Lewis细胞中VEGF-C/D的含量;实时q-PCR检测下室Lewis细胞中VEGF-C/D基因表达量.采用Graphpad prism for Mac(Version 8.1.1)、image J、FlowJo(Version 10.4)对数据进行统计分析.结果 M2型RAW264.7表型鉴定,CD206表达率IL4+为(58.45±1.45)％和IL-4-为(1.98±0.18)％,t=102.25,P＜0.001.Elisa检测VEGF-C含量,高剂量组(2 866.07±70.97)pg/mL相对于Control组(3 252.97±94.51)pg/mL明显下降(t=5.47 P＜0.01),VEGF-D高剂量组(58.43±17.3)pg/mL相对于Control组(117.7±7.3) pg/mL明显下降,t=5.47,＜0.01;蛋白质印迹法检测Lewis细胞中VEGF-C含量,高剂量组(0.11±0.015)％相对于Control组(0.34±0.028)％明显下降(t=12.54,P＜0.001),VEGF-D高剂量组(0.38±0.037)％相对于Control组(0.071±0.022)％明显下降,t=12.43,P＜0.001;q-PCR测定Lewis细胞高剂量组中VEGF-C基因表达量(0.61±0.095)％相对于Control组(3.89±0.44)％明显下降(t=12.59,P＜0.001),VEGF-D高剂量组(0.23±0.025)％相对于Control组(1.78±0.09)％明显下降,t=28.55,P＜0.001.成管实验中高剂量组共培养模型下室中的培养基干预的HLEC细胞在Matrigel Matrix胶中形成管腔结构的数量明显减少.结论 金复康口服液含药血清能够通过调控Lewis细胞合成VEGF-C/D,减少肺癌淋巴管新生从而达到抑制肿瘤转移.

目的:观察金复康口服液对Lewis肺癌小鼠肿瘤微环境中程序性死亡受体1(PD-1)、配体(PD-L1)表达及相关免疫因子的影响.方法:采用Lewis肺癌细胞株培养移植法建立肺癌荷瘤小鼠模型,而后随机分为模型组、中药低、中、高剂量组每组8只;实验第1天开始中药低、中、高剂量组小鼠分别按15、30、60 g/(kg·d)灌胃给药,模型组按照等量生理盐水给药,1次/d,连续给药14 d;称取各组小鼠的瘤质量,计算抑瘤率;荧光定量PCR检测荷瘤小鼠肿瘤组织中PD-1和PD-L1的mRNA,Western blot法检测肿瘤组织PD-1、PD-L1的蛋白表达水平,HE染色观察肺组织,同时ELISA法检测血清中免疫因子IFN-γ和IL-12表达量.结果:与模型组比较,金复康口服液中、高剂量组能够抑制肺癌移植瘤生长,抑瘤率分别是36.35％和28.59％;金复康口服液中、高剂量组能明显降低肿瘤组织PD-1、PD-L1 mRNA含量,抑制PD-1、PD-L1蛋白表达;HE染色显示中、高剂量组肺组织形态完整,未见明显癌巢;中剂量组明显增加血清中IFN-γ和IL-12的含量.结论:金复康口服液对肺癌移植瘤的生长有一定抑制作用,机制可能与降低肿瘤微环境中PD-1、PD-L1水平并增加血清中免疫因子IFN-γ和IL-12的含量有关.