目的:探究银杏内酯B对小鼠缺血性脑卒中后神经功能恢复及Wnt/β-连环蛋白（β-catenin）通路的影响。方法:选取C57/BL6系实验小鼠55只，留取10只作为假手术组，其余45只小鼠构建缺血性脑卒中模型，最终有40只完成建模，将其随机分为模型组、短程给药（GB1w）组、长程给药（GB2w）组、长程给药＋拮抗剂（GB2w＋PRI-724）组，每组各10只。模型组大脑中动脉栓塞（MCAO）术后无药物干预；GB1w组MCAO术后1周内鼻饲银杏内酯B（10 mg/kg）0.1 ml；GB2w组MCAO术后2周内鼻饲银杏内酯B（10 mg/kg）0.1 ml；GB2w＋PRI-724组MCAO术后2周内鼻饲银杏内酯B（10 mg/kg）0.1 ml，且第8～14天银杏内酯B给药前3 h，给予选择性拮抗剂PRI-724 20 mg/d。比较各组的神经功能评分、转棒上行走实验评分、转化生长因子-β1（TGF-β1）、成纤维细胞生长因子4（FGF4）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、超氧化物歧化酶（SOD）、Wnt、β-catenin和糖原合成酶激酶-3β（GSK-3β）表达的变化情况。结果:与假手术组相比，模型组、GB1w组、GB2w组和GB2w＋PRI-724组的神经功能评分、转棒上行走实验评分、FGF4、TNF-α、IL-6和MDA水平及GSK-3β表达上升，TGF-β1、GSH-Px和SOD水平及Wnt、β-catenin表达下降，差异均有统计学意义（均 P<0.001）；与模型组相比，GB1w组、GB2w组和GB2w＋PRI-724组的TGF-β1、GSH-Px和SOD水平及Wnt、β-catenin表达上升，神经功能评分、转棒上行走实验评分、FGF4、TNF-α、IL-6和MDA水平及GSK-3β表达下降，差异均有统计学意义（均 P<0.001）；与GB1w组相比，GB2w组和GB2w＋PRI-724组的TGF-β1、GSH-Px和SOD水平及Wnt、β-catenin表达上升，神经功能评分、转棒上行走实验评分、FGF4、TNF-α、IL-6和MDA水平及GSK-3β表达下降，差异均有统计学意义（均 P<0.001）；与GB2w组相比，GB2w＋PRI-724组的神经功能评分、转棒上行走实验评分、FGF4、TNF-α、IL-6和MDA水平及GSK-3β表达上升，TGF-β1、GSH-Px和SOD水平及Wnt、β-catenin表达下降，差异均有统计学意义（均 P<0.001）。 结论:银杏内酯B可有效改善缺血性脑卒中小鼠神经功能，且可能与Wnt/β-catenin通路相关。

目的:探究银杏内酯B （GB）调控miR-24-3p对人牙周膜干细胞增殖和成骨分化的影响。方法:体外分离培养人牙周膜干细胞，使用10、25、50 μmol/L GB处理细胞；按照脂质体法将anti-miR-NC、anti-miR-24-3p转染细胞内；将miR-NC、miR-24-3p转染细胞内，用50 μmol/L GB处理。用MTT检测细胞增殖。将各组细胞进行成骨诱导后，试剂盒检测ALP活性；Western blot检测PCNA、Osx、OPN和OCN蛋白表达；RT-qPCR检测miR-24-3p表达水平。两组间比较采用独立样本t检验，多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD-t检验。结果:GB呈剂量依赖性增加人牙周膜干细胞增殖活性[48 h：（0.52 ± 0.05、0.64 ± 0.05、0.80 ± 0.08比0.33 ± 0.05）；72 h：（0.72 ± 0.05、0.85 ± 0.04、1.08 ± 0.11比0.51 ± 0.06）]、ALP活性（0.45 ± 0.06、0.75 ± 0.08、1.12 ± 0.08比0.27 ± 0.05）、PCNA （0.41 ± 0.05、0.57 ± 0.06、0.78 ± 0.06比0.26 ± 0.04）、Osx （0.45 ± 0.06、0.68 ± 0.05、0.79 ± 0.03比0.33 ± 0.04）、OPN（0.56 ± 0.06、0.75 ± 0.05、0.92 ± 0.06比0.42 ± 0.05）、OCN蛋白表达（0.48 ± 0.05、0.59 ± 0.04、0.76 ± 0.08比0.30 ± 0.06），降低miR-24-3p表达水平（0.35 ± 0.04、0.52 ± 0.06、0.87 ± 0.06比1.00 ± 0.09）（P均< 0.05）。干扰miR-24-3p可增加48、72 h时人牙周膜干细胞增殖活性[（0.57 ± 0.06比0.35 ± 0.04）、（0.90 ± 0.10比0.47 ± 0.06）]、ALP活性（0.68 ± 0.05比0.30 ± 0.04）、PCNA （0.47 ± 0.05比0.29 ± 0.04）、Osx （0.50 ± 0.04比0.35 ± 0.04）、OPN （0.62 ± 0.05比0.39 ± 0.03）、OCN蛋白表达（0.75 ± 0.07比0.42 ± 0.06） （P均< 0.05）。与GB+miR-NC比较，GB+miR-24-3p干预的细胞48、72 h的OD值[（0.67 ± 0.05比0.82 ± 0.07）、（0.84 ± 0.05比1.10 ± 0.09）]、ALP活性（0.56 ± 0.04比1.15 ± 0.15）、PCNA （0.46 ± 0.06比0.79 ± 0.07）、Osx（0.52 ± 0.03比0.80 ± 0.05）、OPN （0.63 ± 0.04比0.91 ± 0.09）、OCN蛋白表达（0.45 ± 0.06比0.78 ± 0.08）降低（P < 0.05）。结论:GB可能通过降低miR-24-3p促进人牙周膜干细胞增殖和成骨分化。

目的 观察银杏二萜内酯葡胺(GDLM)治疗急性脑梗死患者外周血T细胞亚群的改变,并通过小鼠体内实验观察其对T细胞亚群的影响.方法 选取2018-2019年兰州大学第一医院神经内科收治的急性脑梗死患者80例,根据接受治疗方案的不同分为观察组和对照组.两组患者均接受标准治疗,观察组加用GDLM治疗.比较两组患者临床疗效和卒中量表评分(NHISS)、血清C反应蛋白(CRP)水平、外周血Th17细胞水平变化.将C57B/L6雄性小鼠分为PBS组和GDLM两组,分别给予腹腔注射PBS或GDLM,第5、10天分析小鼠脾、引流淋巴结细胞中Th17细胞的改变.结果 治疗前,两组患者NIHSS评分及血清CD4+T细胞基线水平之间的差异无统计学意义(P>0.05);治疗后,两组患者CD4+T细胞均较治疗前无明显变化,但血清CRP水平、CD4+IL-17A+T细胞(Th17细胞)均较治疗前降低(P<0.05);治疗后,观察组NIHSS评分低于对照组(P<0.05).注射后第5天,GDLM组小鼠脾CD4+CD44lowCD62Lhigh T细胞显著增加,差异有统计学意义(P<0.05),到第10天,GDLM组CD4+CD44lowCD62Lhigh T细胞仍略高于对照组.注射后5天,GDLM组小鼠脾Th17细胞表现出降低趋势,第10天时则明显低于对照组(P<0.05).结论 GDLM治疗急性脑梗死效果显著,其机制可能是通过调节患者外周血T细胞亚群水平,抑制T细胞活化,抑制Th17细胞分化进而改善神经功能障碍.

为研究银杏内酯B对食管癌细胞增殖和凋亡的作用及相关机制,采用体外培养人食管癌OE19细胞,将其分为对照组(不做干预)、低/中/高剂量试验组(分别加入6.25、12.50、25.00 μmol/L银杏内酯B)、银杏内酯B组(12.50 μmol/L银杏内酯B)、阳性药物组(4 mg/L顺铂)、抑制剂组[12.50 μmol/L银杏内酯B+10.00 μmol/L Janus激酶2/转录激活因子3(JAK2/STAT3)通路抑制剂AG490]、激活剂组(12.50 μmol/L银杏内酯B+0.50 μmol/L JAK2/STAT3通路激活剂Colivelin),干预24 h后,采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)、5-乙炔基-2'脱氧尿嘧啶核苷(EdU)法、Hoechst 33258染色法、实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和蛋白免疫印迹(WB)法检测细胞的活力、增殖率、凋亡率及相关因子的表达水平.结果显示,与对照组相比,中/高剂量试验组与阳性药物组的细胞活力降低(P<0.05),因此,本研究选择有显著差异且较低浓度的12.50 μmol/L银杏内酯B作为银杏内酯B组进行后续试验.与对照组相比,银杏内酯B组和阳性药物组细胞的增殖率、Cyclin D1的mRNA和蛋白质、p-JAK2、p-STAT3蛋白的表达水平降低,凋亡率、Caspase-3的mRNA和蛋白质的表达水平升高(P<0.05).与银杏内酯B组相比,抑制剂组各指标变化进一步增强(P<0.05),激活剂组则显著逆转了上述指标的变化(P<0.05).银杏内酯B能够通过下调JAK2/STAT3信号通路抑制OE19细胞的增殖,促进食管癌细胞凋亡.本研究揭示了银杏内酯B新抗癌机制,为食管癌的研究提供了理论依据.

目的 探讨银杏叶提取物(EGb 761)联合多奈哌齐对阿尔茨海默病(AD)模型大鼠的协同作用及其机制.方法 取雄性SD大鼠72 只,随机分为正常组(等体积生理盐水)、假手术组(等体积生理盐水)、模型组(等体积生理盐水)、多奈哌齐组(25 mg/kg)、EGb 761组(50 mg/kg)和联合组(多奈哌齐 25mg/kg+EGb 761 50mg/kg),各 12 只.腹膜内注射水合氯醛 300 mg/kg麻醉,将聚集的Aβ25-35(10μL)以 1μL/min的速率注入大鼠双侧海马,以复制AD大鼠模型.建模成功后,各组大鼠均灌胃相应药物或生理盐水,每天 1 次,共2 个疗程(每个疗程 10 d,间隔 3d).采用Morris水迷宫实验评估大鼠的认知和记忆能力;采用TUNEL染色法,观察大鼠海马神经细胞凋亡情况,并计算凋亡指数;采用酶联免疫吸附法检测大鼠血清乙酰胆碱酯酶(AChE)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)水平;采用Western blot法检测大鼠海马组织中核因子(NF)-κB通路相关蛋白p-IKKα,p-IκBα,p-NF-κB表达水平.结果 与模型组比较,各给药组大鼠Morris水迷宫实验第 6 天逃避潜伏期均大幅缩短,第 7 天各给药组大鼠在象限Ⅰ中穿越平台的次数及耗时百分比均显著增加;各给药组大鼠海马神经细胞阳性数量均显著减少,凋亡指数均显著降低(P<0.05);各给药组大鼠AChE和MDA水平均显著降低,SOD水平显著升高(P<0.05);各给药组大鼠NF-κB通路相关蛋白p-IKKα,p-IκBα,p-NF-κB的表达水平均显著升高(P<0.05);且联合组上述指标变化均更显著(P<0.05).结论 EGb 761 联合多奈哌齐可协同改善AD模型大鼠的记忆能力,其机制可能与减少海马神经细胞NF-κB通路激活后的细胞凋亡有关.

目的 探究银杏内酯B调控缺血性脑卒中恢复期小鼠的脑内T细胞生物学特性及T细胞与胶质细胞间的作用机制.方法 选取36只成年C57BL/6小鼠,随机分为假手术组(Sham组)、对照组(PBS组)和银杏内酯B组(GB组).Sham组仅给予假手术处理;PBS组和GB组均采用线栓法制备大脑中动脉栓塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)损伤即缺血性脑卒中模型,并于损伤后连续14 d分别鼻饲等体积的PBS和银杏内酯B溶液.采用转棒实验及神经功能评分法评估3组小鼠的神经功能变化;并于实验第15天取PBS组和GB组小鼠脑损伤区及周边皮层、胼胝体及纹状体的新鲜组织,采用单细胞测序方法评估该区域中T细胞及其亚群的生物学特性,并进一步探索T细胞、小胶质细胞和少突胶质细胞之间的相互作用及机制.结果 与Sham组相比,PBS组和GB组小鼠的神经功能评分均显著上升(P＜0.001),掉落前运动时程均显著降低(P＜0.001);与PBS组相比,GB组在缺血性脑损伤后5、10、15 d的神经功能评分有下降趋势,掉落前运动时程有上升趋势,尤其15 d时的掉落前运动时程显著上升(P＜0.05).与PBS组相比,GB组小鼠在脑损伤后15 d时脑内T细胞增殖活性显著升高(P＜0.05),增殖性T细胞数量及脂质代谢水平均显著上调(P＜0.05),所有T细胞的细胞外基质重塑显著增多(P＜0.05);同时,GB组小鼠脑内T细胞与小胶质细胞、少突胶质细胞之间的相互作用以及小胶质细胞自身、小胶质细胞与少突胶质细胞之间的相互作用均显著增强,主要表现为CD74与巨噬细胞迁移抑制因子(macrophage migration inhibitory factor,MIF)、集落刺激因子 1 受体(colony stimulating factor 1 receptor,CSF1R)与集落刺激因子 1(colony stimulating factor 1,CSF1)的相互作用增强(P＜0.05),但T细胞的炎性水平与PBS组相比均无显著差异.结论 采用线栓法MCAO损伤手术可成功构建小鼠缺血性脑卒中疾病模型.银杏内酯B可能通过调控小鼠脑内T细胞生物学特性及其与胶质细胞间的互作关系,促进小鼠脑损伤后的神经功能恢复.

目的 研究银杏内酯B(ginkgolide B,GB)对血小板活化的抑制作用,以及基于该抑制作用对血小板和肠癌HCT-116细胞间作用的影响.方法 采用不同浓度GB(5、15、30 μmol/L)处理健康志愿者全血或血小板,通过血栓弹力图(Thromboelastogram,TEG)检测GB对血小板二磷酸腺苷(Adenosine diphosphate,ADP)、花生四烯酸(arachidonic acid,AA)途径的抑制率,采用流式细胞术检测GB对凝血酶和ADP激活血小板后CD62P和PAC-1表达的影响,通过细胞划痕试验观察GB对血小板与HCT-116细胞作用24、48 h后细胞迁移的影响,通过细胞黏附试验观察GB对血小板与HCT-116细胞黏附情况的影响.结果 (1)TEG试验结果显示,随着GB浓度增加,AA抑制率均显著增加且呈剂量依赖(P＜0.001),与对照组相比差异均有统计学意义(P＜0.001);药物组与空白对照组相比,ADP抑制率均显著增加且呈剂量依赖,差异均有统计学意义(P＜0.001).(2)流式细胞术检测结果显示,凝血酶和ADP激活血小板后药物组的CD62P与PAC-1阳性率随着药物浓度升高而降低且呈剂量依赖性(P＜0.001),凝血酶激活途径的药物5 μmol/L组的PAC-1阳性率低于对照组,差异无统计学意义(P＞0.05),ADP激活途径的药物5 μmol/L组的CD62P阳性率、5 μmol/L和15 μmol/L组的PAC-1阳性率均低于对照组,差异无统计学意义(P＞0.05),余各浓度组与对照组相比差异均有统计学意义(P＜0.01).(3)划痕试验结果显示,不同浓度药物组的24、48 h细胞迁移率分别较凝血酶组与ADP组降低,且差异有统计学意义(P＜0.01),15μmol/L组的24、48 h细胞迁移率明显低于5 μmol/L组,差异具有统计学意义(P＜0.05),30 μmol/L组迁移率低于15 μmol/L组,但差异无统计学意义(P＞0.05).(4)黏附试验结果显示,活化的血小板可增强其与肿瘤细胞之间的黏附作用,但药物组各组的黏附率均低于阳性组,且随着药物浓度增加黏附率随之降低.结论 GB可通过AA途径及ADP途径抑制血小板活化,进而抑制血小板与HCT-116肿瘤细胞的黏附以及血小板促肿瘤细胞迁移的能力.

目的 观察银杏二萜内酯葡胺(GDLG)治疗超时间窗急性缺血性脑卒中(AIS)的效果,并探讨其对患者血清Toll样受体4(TLR4)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路因子水平的影响.方法 选取2020年1月至2023年1月郑州大学第一附属医院收治的170例超时间窗AIS患者作为研究对象,采用电脑随机数表法分为对照组和研究组各85例.对照组患者给予常规治疗,研究组患者在常规治疗基础上给予GDLG治疗,均持续治疗两周.比较两组患者的治疗效果、治疗前、治疗1周、2周后脑血流灌注指标[脑血容量(CBV)、脑血流量(CBF)、平均通过时间(MTT)]、血清神经损伤标志物[基质金属蛋白酶抑制物-1(TIMP-1)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、半乳糖凝集素-3(Galectin-3)]、TLR4/NF-κB信号通路因子(TLR4、NF-κB)水平、神经功能、日常生活能力,统计比较两组治疗期间不良反应及治疗后第3个月预后情况.结果 研究组患者的治疗总有效率为95.29%,明显高于对照组的84.71%,差异有统计学意义(P＜0.05);治疗1周、2周后,研究组患者的CBF分别为(82.69±12.54)mL/100 g、(85.17±12.36)mL/100 g,明显高于对照组的(77.01±11.86)mL/100 g、79.24±12.10)mL/100 g,CBV分别为(6.84±1.22)mL/(100 g·min)、(7.01±1.28)mL/(100 g·min),明显高于对照组的(6.05±1.17)mL/(100 g·min)、(6.19±1.23)mL/(100 g·min),MTT分别为(9.16±1.73)s、(8.92±1.65)s,明显低于对照组的(10.02±1.85)s、(9.84±1.71)s,差异均有统计学意义(P＜0.05);治疗1周、2周后,研究组患者的血清NSE水平分别为(13.75±2.81)μg/L、(12.24±2.59)μ g/L,明显低于对照组的(16.29±3.68)μg/L、(15.36±3.42)μg/L,TIMP-1水平分别为(72.26±16.73)ng/mL、(68.19±14.84)ng/mL,明显低于对照组的(83.51±18.20)ng/mL、(79.81±15.72)ng/mL,Galectin-3水平分别为(4.12±1.04)ng/mL、(3.75±0.96)ng/mL,明显低于对照组的(5.03±1.08)ng/mL、(4.69±1.02)ng/mL,差异均有统计学意义(P＜0.05);治疗1周、2周后,研究组患者的血清TLR4水平分别为(2.61±0.78)ng/mL、(2.39±0.74)ng/mL,明显低于对照组的(3.42±0.85)ng/mL、(3.25±0.81)ng/mL,NF-κB水平分别为(108.69±21.36)ng/mL、(98.74±18.65)ng/mL,明显低于对照组的(121.54±22.06)ng/mL、(110.23±20.67)ng/mL,差异均具有统计学意义(P＜0.05);治疗1周、2周后,研究组患者的美国国立卫生院卒中量表(NIHSS)评分分别为(10.19±2.18)分、(9.21±2.04)分,明显低于对照组的(44.26±4.05)分、(62.51±4.36)分,改良Barthel指数(MBI)评分分别为(47.39±4.28)分、(65.40±4.71)分,明显高于对照组的(44.26±4.05)分、(62.51±4.36)分,差异均有统计学意义(P＜0.05);治疗期间,研究组患者的不良反应总发生率为10.59%,略高于对照组的7.06%,但差异无统计学意义(P＞0.05);治疗后第3个月,研究组患者的预后良好率为64.71%,明显高于对照组的48.24%,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 超时间窗AIS患者在常规治疗基础上联合GDLG治疗能明显提高治疗效果,且能更有效下调血清TLR4/NF-κB信号通路因子水平.

目的:探讨银杏内酯调节信息调节因子相关酶 1(SIRT1)/高迁移率族蛋白B1(HMGB1)信号通路对血管性认知障碍大鼠小胶质细胞活化的影响.方法:选用SPF级雄性SD大鼠,体质量210～240 g,通过结扎双侧颈总动脉制备血管性认知障碍大鼠模型,将成模动物随机分为模型组、银杏内酯低剂量(6 mg/kg)组、银杏内酯高剂量(12 mg/kg)组、SIRT1 抑制剂EX527(5 mg/kg)组、银杏内酯高剂量(12 mg/kg)+EX527(5 mg/kg)组,每组 10 只.另取 10 只大鼠,仅分离颈总动脉,但进行不结扎,设为假手术组.药物干预 14 d后,Morris水迷宫实验检测大鼠认知功能;TUNEL染色检测大鼠大脑皮质及海马神经元凋亡率;免疫荧光染色检测大鼠脑组织小胶质细胞活化情况,比较M1 标记物CD16 与M2 标记物Arg-1阳性细胞数;ELISA检测大鼠血清PGE2、IL-1β、IL-18 水平;免疫印迹法检测大鼠脑组织M1 标记物(CD16、CD32)、M2 标记物(CD206、Arg-1)及SIRT1/HMGB1 信号通路相关蛋白(SIRT1、HMGB1)表达.结果:与假手术组比较,模型组大鼠大脑皮质及海马神经元凋亡率及脑组织CD16、CD32、CD206、HMGB1、Arg-1蛋白表达和CD16、Arg-1阳性细胞数显著升高,脑组织SIRT1 蛋白表达显著降低,血清PGE2、IL-1β、IL-18 水平显著升高,穿台次数显著减少,目标象限停留时间显著缩短(P<0.05).与模型组比较,银杏内酯低、高剂量组大鼠大脑皮质及海马神经元凋亡率及脑组织CD16、CD32、HMGB1 蛋白表达和血清PGE2、IL-1β、IL-18 水平显著降低,穿台次数显著增多,目标象限停留时间显著延长,Arg-1 阳性细胞数及脑组织CD206、Arg-1、SIRT1 蛋白表达显著升高(P<0.05).EX527 可逆转高剂量银杏内酯的作用(P<0.05).结论:银杏内酯可通过上调SIRT1 表达而抑制HMGB1 信号激活,从而抑制小胶质细胞活化,促使其M2 极化,抑制血管性认知障碍大鼠炎症,最终提升其认知能力.

目的 探究银杏内酯B(ginkgolide B,GB)是否通过拮抗内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)发挥其拮抗血管内皮损伤作用及其相关分子机制.方法 建立衣霉素(tunicamycin,TM)诱导的人骨髓来源内皮祖细胞(bone marrow derived-endothelial progenitor cells,EPCs)ERS损伤模型,用MTS检测细胞增殖能力;Calcein-AM/EthD-I双染法检测细胞活性状态;Transwell实验检测细胞迁移能力;DCFH-DA染色检测活性氧(reactive oxygen species,ROS)的水平;ELISA法测定NADPH活性;JC-1和DiOC6染色定性和定量检测线粒体膜电位;qRT-PCR检测mRNA的水平;Western Blot检测蛋白表达水平.结果 GB浓度依赖性减轻衣霉素对hEPCs造成的ERS内皮损伤(细胞活性、细胞迁移率和血管形成率的降低)(P<0.01);降低ROS及NADPH水平(P<0.01);呈浓度依赖性抑制ERS介导的线粒体膜电位下降(P<0.01);抑制ERS相关蛋白(GRP78、ATF4、CHOP等)表达,并调控细胞凋亡相关蛋白(Bcl-xl、Bax、cleaved caspase-4、cytochrome c)的表达水平,拮抗内质网应激介导的细胞损伤.结论 银杏内酯B能通过拮抗内质网应激,发挥血管内皮保护作用,其机制可能与降低细胞内活性氧水平,抑制ERS相关蛋白(CHOP,GRP78、ATF4)表达及调节细胞凋亡蛋白(Bcl-xl、Bax、cleaved caspase-4、cytochrome c)的表达水平有关.