目的:探讨齐墩果酸（OA）对沉默调节蛋白1（SIRT1）介导的高迁移率族蛋白1（HMGB1）去乙酰化在蛛网膜下腔出血（SAH）后早期脑损伤中的作用。方法:将176只雄性Sprague-Dawley大鼠按完全随机法分为假手术组（Sham组）（ n=48）、SAH组（ n=48）、OA组（ n=48）和Sirtinol组（ n=32）。SAH组、OA组和Sirtinol组大鼠均采用颈内动脉穿刺法构建SAH模型，Sham组大鼠不实施穿刺。造模后1 h，OA组大鼠腹腔注射OA（20 mg/kg），Sirtinol组大鼠侧脑室注射Sirtinol（2 mmol/L，30 μL/kg），Sham组和SAH组大鼠均注射等体积的氯化钠注射液。SAH后24 h，对大鼠进行SAH评分和神经功能评分，测定大鼠脑组织含水量及依文思蓝渗出率；采用蛋白质印迹法检测大鼠脑组织中HMGB1、SIRT1和乙酰化HMGB1蛋白的表达；实时荧光定量PCR检测大鼠脑组织中HMGB1 mRNA的表达；免疫荧光染色观察大鼠脑组织中HMGB1蛋白的分布情况；TUNEL染色观察大鼠脑组织中神经元调亡情况。 结果:与SAH组相比，OA组SAH评分明显降低（ P<0.001），Garcia评分升高（ P<0.01），脑组织含水量和伊文思蓝渗出率均降低（均 P<0.01）；与OA组相比，Sirtinol组SAH评分升高（ P<0.01），Garcia评分明显降低（ P<0.001），脑组织含水量和伊文思蓝渗出率均升高（均 P<0.01）。蛋白质印迹法和实时荧光定量PCR结果显示，与SAH组相比，OA组HMGB1蛋白和mRNA水平均降低（ P<0.01， P<0.05），SIRT1蛋白表达明显升高（ P<0.001），乙酰化HMGB1蛋白表达降低（ P<0.01）。免疫荧光染色结果显示，OA可抑制HMGB1蛋白由细胞核转移至细胞质。TUNEL染色结果显示，OA能有效减少TUNEL阳性细胞数量；与OA组相比，Sirtinol可明显增加TUNEL阳性细胞数量。 结论:OA可通过SIRT1/HMGB1通路减少HMGB1释放，从而保护SAH后的早期脑损伤。

目的 研究微小RNA-126(miR-126)-内皮祖细胞(EPC)-微粒(MPs)改善心肌细胞氧糖剥夺/复氧(OGD/R)损伤的分子机制.方法 采用心肌细胞建立对照(control)和OGD/R损伤模型,并分别给予EPC-MPs和miR-126 mimic EPC-MPs处理.通过透射电子显微镜评估心肌细胞细胞器的结构变化.采用ELISA检测心肌细胞中白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和高迁移率族蛋白B1(HMGB1)的表达水平.采用Western blot和实时荧光定量PCR(qPCR)检测不同处理后心肌细胞中血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-6(caspase-6)、一氧化氮合酶(eNOS)、叉头框蛋白O1(FOXO1)、髓过氧化物酶(MPO)、核因子-κB(NF-κB)、细胞外信号调节激酶1(ERK1)、肝激酶B1(LKB1)、沉默信息调节因子2相关酶1(SIRT1)、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、130×103高尔基体基质蛋白(GM130)和过氧化物酶体增生物激活受体γ共激活因子-1α(PGC-1α)的蛋白和mRNA表达水平.结果 OGD/R+miR-126 mimic EPC-MPs组部分心肌细胞线粒体结构完整,部分线粒体大小增大,内质网表面核糖体较少,高尔基体部分囊泡聚集.与OGD/R+EPC-MPs组比较,OGD/R+miR-126 mimic EPC-MPs组IL-6、TNF-α和HMGB-1的表达水平下调.与OGD/R+EPC-MPs组比较,OGD/R+miR-126 mimic EPC-MPs组AngⅡ、caspase-6、p-ERK1/2和GRP78的蛋白表达水平下调,p-LKB1、GM130和PGC-1α的蛋白表达水平上调.qPCR结果显示,与OGD/R+EPC-MPs组比较,OGD/R+miR-126 mimic EPC-MPs组AngⅡ、MPO和GRP78的mRNA表达水平下调,eNOS、GM130和PGC-1α的mRNA表达水平上调.结论 当心肌细胞发生OGD/R损伤时,miR-126 mimic EPC-MPs调节PGC-1α/GM130表达,抑制AngⅡ诱导的应激损伤反应,减少心肌细胞的OGD/R损伤.

目的:探讨银杏内酯调节信息调节因子相关酶 1(SIRT1)/高迁移率族蛋白B1(HMGB1)信号通路对血管性认知障碍大鼠小胶质细胞活化的影响.方法:选用SPF级雄性SD大鼠,体质量210～240 g,通过结扎双侧颈总动脉制备血管性认知障碍大鼠模型,将成模动物随机分为模型组、银杏内酯低剂量(6 mg/kg)组、银杏内酯高剂量(12 mg/kg)组、SIRT1 抑制剂EX527(5 mg/kg)组、银杏内酯高剂量(12 mg/kg)+EX527(5 mg/kg)组,每组 10 只.另取 10 只大鼠,仅分离颈总动脉,但进行不结扎,设为假手术组.药物干预 14 d后,Morris水迷宫实验检测大鼠认知功能;TUNEL染色检测大鼠大脑皮质及海马神经元凋亡率;免疫荧光染色检测大鼠脑组织小胶质细胞活化情况,比较M1 标记物CD16 与M2 标记物Arg-1阳性细胞数;ELISA检测大鼠血清PGE2、IL-1β、IL-18 水平;免疫印迹法检测大鼠脑组织M1 标记物(CD16、CD32)、M2 标记物(CD206、Arg-1)及SIRT1/HMGB1 信号通路相关蛋白(SIRT1、HMGB1)表达.结果:与假手术组比较,模型组大鼠大脑皮质及海马神经元凋亡率及脑组织CD16、CD32、CD206、HMGB1、Arg-1蛋白表达和CD16、Arg-1阳性细胞数显著升高,脑组织SIRT1 蛋白表达显著降低,血清PGE2、IL-1β、IL-18 水平显著升高,穿台次数显著减少,目标象限停留时间显著缩短(P<0.05).与模型组比较,银杏内酯低、高剂量组大鼠大脑皮质及海马神经元凋亡率及脑组织CD16、CD32、HMGB1 蛋白表达和血清PGE2、IL-1β、IL-18 水平显著降低,穿台次数显著增多,目标象限停留时间显著延长,Arg-1 阳性细胞数及脑组织CD206、Arg-1、SIRT1 蛋白表达显著升高(P<0.05).EX527 可逆转高剂量银杏内酯的作用(P<0.05).结论:银杏内酯可通过上调SIRT1 表达而抑制HMGB1 信号激活,从而抑制小胶质细胞活化,促使其M2 极化,抑制血管性认知障碍大鼠炎症,最终提升其认知能力.

目的 研究重症肺炎病人外周血微RNA-34a(miR-34a)、沉默信息调节因子1(Sirt1)的表达变化及临床意义.方法 选取2017年10月至2020年4月武警重庆总队医院收治的64例重症肺炎病人为重症肺炎组,同期收治的80例普通肺炎病人为普通肺炎组,进行健康体检的70例健康志愿者为对照组.采用实时荧光定量PCR法(qRT-PCR)检测外周血miR-34a表达水平,采用酶联免疫吸附法检测血清Sirt1、炎症细胞因子表达水平;Kaplan-Meier生存分析研究miR-34a与Sirt1表达水平与重症肺炎组病人预后的关系;Cox回归分析影响重症肺炎病人预后的因素.结果 重症肺炎组miR-34a的表达水平高于普通肺炎组和对照组(1.65±0.28比1.32±0.33、1.00±0.25),Sirt1表达水平低于普通肺炎组和对照组[(6.83±1.59)μg/L比(8.94±1.62)μg/L、(12.11±1.77)μg/L](P<0.05);miR-34a表达水平与Sirt1表达水平存在明显负相关(P<0.05).高危、中危病人miR-34a表达水平高于低危病人,Sirt1表达水平低于低危病人(P<0.05),高危病人miR-34a表达水平高于中危病人,Sirt1表达水平低于中危病人(P<0.05).miR-34a高表达病人血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、白细胞介素(IL)-6和高迁移率族蛋白B-1(HMGB1)水平高于miR-34a低表达病人,30 d累积生存率低于miR-34a低表达病人(P<0.05);Sirt1高表达病人血清TNF-α、ICAM-1、IL-6、HMGB1水平低于Sirt1低表达病人,30 d累积生存率高于Sirt1低表达病人(P<0.05).ICAM-1、miR-34a及Sirt1均是影响重症肺炎病人预后的独立危险因素(P<0.05).结论 重症肺炎病人外周血中miR-34a表达增加与血清Sirt1表达降低具有相关性,且miR-34a、Sirt1的变化与病情加重、炎症反应激活、预后不良有关.

三叶苷(tilobatin,TLB)既是贵州省民族药木姜叶柯的重要活性成分之一,是一种药、食两用,兼有茶、糖、药3种功能的珍贵植物化学成分,也是一种新兴的功能型甜味剂.既往研究报道,TLB具有抗病毒、抗疲劳等药理作用,但是,其是否具有神经保护作用尚不清楚.因此,我们对TLB的抗阿尔茨海默病(AD)与缺血性脑卒中作用进行了系列研究.我们发现,TLB可改善APP/PS1 AD模式小鼠和Aβ25-35导致的大鼠AD模型的认识功能障碍,其作用机制与调控HMGB1/SIRT3信号途径进而抑制神经炎症和氧化应激有关.此外,我们还发现,TLB能够抗大脑中动脉阻塞法(MCAO)诱导的缺血性脑卒中动物模型神经功能损伤作用并有助于MCAO诱导的缺血性脑卒中动物模型的长期神经功能恢复,其机制与通过激动SIRT3进而激动TLR4/NF-κB和Nrf2/Keap-1信号途径有关;同时,TLB还可通过抑制APOE4/CypA/MMP9信号途径减少MCAO导致的血脑屏障损伤.以上研究结果表明TLB具有良好的抗AD与缺血性脑卒中的神经保护作用.

目的:探讨炎症因子白介素-1 α(interleukin-1α,IL-1α)对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)衰老的影响,并探讨高迁移率族蛋白B1(high mobility gro up proteinB1,HMGB1)在其中的作用及机制.方法:将HUVECs随机分为对照组(不加处理)、IL-1α组(10 ng/mL IL-1α孵育)、HMGB1组(100 ng/mL HMGB1孵育)、HMGBI+IL-1α组(100 ng/mL HMGB1和10 ng/mL IL-1α共同孵育),采用细胞衰老相关β-半乳糖苷酶(senescence associated β-galactosidase,SAβ-gal)染色检测细胞衰老数目,采用Western印迹检测沉默信息调节子1(silent information regulator 1, SIRT1)的蛋白表达,采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测衰老相关基因p83,p21和p16的mRNA表达.结果:与对照组相比,IL-1α组SA β-gal染色阳性细胞数目明显增加(P＜0.05),SIRT1蛋白表达水平明显下调(P＜0.01).与IL-1α组相比,HMGB1+IL-1α组SA β-gal染色阳性细胞减少,p21和p53的mRNA表达下调(均P＜0.05),但p16的mRNA表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论:IL-1α能诱导血管内皮细胞的衰老,其中HMGB1可能通过p53-p21途径抑制IL-1α诱导的内皮细胞衰老过程.

目的 研究丹参多酚酸通过沉默信息调节因子1(silent information regulator protein,SIRT1)/高迁移率蛋白1 (high-mobility group box 1,HMGB1)路径改善大鼠脑缺血再灌注损伤的机制.方法 选择雄性普通级健康132只SD大鼠,随机分为四组:假手术(Sham)组、模型(IS)组、丹参多酚酸(SA)组、SIRT1特异性抑制剂EX527(EX527)组.采用改良线栓法构建大鼠右侧大脑中动脉栓塞模型,采用改良的神经功能缺损评分(modified Neurological SeverityScores,mNSS)法评估神经功能缺损程度,采用RT-PCR法检测脑组织SIRT1、HMGB1 mRNA含量,Western blot法检测脑组织SIRT1、HMGB1、P-53、NF-κB蛋白的表达,ELISA法检测血清肿瘤抑制基因P-53、核因子-κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)水平,TUNEL法检测脑组织神经细胞凋亡指数.结果 (1)与Sham组和EX527组比,SA组mNSS评分明显降低(P＜0.05).(2)7 d SA组HMGB1、P-53、NF-κB蛋白表达均明显低于Sham组和EX527组,EX527组HMGB1、P-53、NF-κB蛋白的表达低于IS组同时显著高于Sham组(P＜0.05);SA组SIRT1蛋白表达量显著高于Sham组和EX527组,而EX527组SIRT1蛋白表达量又显著高于Sham组和IS组(P＜0.05).(3)7 d SA组HMGB1mRNA表达均显著低于Sham组、IS组和EX527组,EX527组HMGB1mRNA表达显著高于IS组的同时低于Sham组(P＜0.05);SA组SIRT1 mRNA表达量显著高于Sham组、IS组和EX527组,EX527组SIRT1mRNA表达量显著高于Sham组、IS组(P＜0.05).(4)7 d SA组大鼠外周血中P-53、NF-κB蛋白表达均显著低于IS组和EX527组,EX527组P-53、NF-κB蛋白的表达显著低于IS组同时高于Sham组(P＜0.05).(5)大鼠脑组组织缺血/再灌注损伤1d后,SA组神经细胞凋亡指数明显低于Sham组和EX527组(P＜0.05),而EX527组神经细胞凋亡指数要显著低于IS组(P＜0.05).结论 丹参多酚酸可以通过促进SIRT1转录、抑制HMGB1迁移和表达,减少下游通路的炎症因子P-53、NF-κB的释放,同时抑制神经细胞凋亡,从而减轻大鼠大脑缺血/再灌注损伤.

目的:探讨香草醛对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBI)的神经保护作用及机制.方法:参考Rice-Vannucci方法建立HIBI大鼠模型.HIBI大鼠建模后立即腹腔注射20 mg/kg(HIBI+20Van组)或40 mg/kg(HIBI+40Van组)的香草醛,每隔12h给药,连续7d.然后评估大鼠的神经行为及脑组织中IL-1β、IL-6和TNF-α的水平.对BV2小胶质细胞进行氧糖剥夺/复氧(OGD/R)处理,并用20 μM香草醛培养.通过Western blot及免疫荧光检测HMGB1、NF-κB p65、SIRT1、MyD88和TLR4的表达水平.通过乳酸脱氢酶(LDH)释放测定试剂盒测定用不同BV2细胞培养基处理的原代神经元的LDH释放.结果:与HIBI组比较,HIBI+20Van组和HIBI+50Van组新生大鼠的前肢悬吊时间和旷场得分均升高,脑组织中的IL-1β、IL-6和TNF-α的水平均降低.香草醛均升高了HIBI大鼠和OGD/R处理的BV2细胞质中的SIRT1的表达水平,降低了TLR4、MyD88和HMGB1的表达水平及细胞核中NF-κB p65的表达水平(P＜0.05).香草醛降低了原代神经元的LDH释放量(P＜0.05).结论:香草醛通过调节SIRTl/HMGB l/TLR4/MyD88/NF-κB信号通路抑制HIBI引起的神经炎症,从而提高HIBI大鼠的神经功能.

目的 探讨虎杖苷(PD)对创伤性颅脑损伤(TBI)后大鼠肠粘膜损伤的保护作用及其机制.方法 采用液压冲击损伤(FPI)方法用SD大鼠复制TBI动物模型,分别在TBI后12、24、48、72 h收集标本,每组5只;另将大鼠随机分为Sham组(n=5,除了FPI操作其他均进行)、TBI+NS组(n=5,TBI后给予和PD组等容积的生理盐水)和TBI+PD组(n=5,TBI后给予30 mg/kg的PD).记录大鼠体质量和粪便含水量,观察空肠组织病理,检测D-乳酸(D-LAC)、二胺氧化酶(DAO)、ZO-1和claudin-5水平,测定活性氧自由基(ROS)、过氧化脂质(LPO)和超氧化物岐化酶2(SOD2)含量,检测空肠促炎因子表达水平,检测Sirt1活性,SOD2和HMGB1乙酰化水平.结果 TBI大鼠体质量下降,粪便含水量减少,血清D-LAC、DAO水平进行性升高(P<0.05).空肠组织损伤加重,ZO-1、claudin-5、SOD2、Sirt1活性明显下降(P<0.05),LPO、ROS、促炎细胞因子、SOD2和HMGB1乙酰化水平增高(P<0.05);与TBI+NS组相比,TBI+PD组大鼠体质量恢复,粪便含水量增加,D-LAC和DAO水平降低(P<0.05),空肠组织病理损伤减轻,ZO-1、claudin-5、SOD2表达水平、Sirt1活性增加,ROS、LPO、促炎细胞因子、SOD2和HMGB1乙酰化水平降低(P<0.05).结论 PD通过激活Sirt1介导的SOD2和HMGB1去乙酰化减轻氧化应激及炎症反应,改善TBI大鼠肠粘膜损伤.

Alzheimer's disease(AD)is a progressive neurodegenerative disorder with cognitive impairment that currently is uncurable.Previous study shows that trilobatin(TLB),a naturally occurring food additive,exerts neuroprotective effect in experimental models of AD.In the present study we investigated the molecular mechanisms underlying the beneficial effect of TLB on experimental models of AD in vivo and in vitro.APP/PS1 transgenic mice were administered TLB(4,8 mg·kg-1·d-1,i.g.)for 3 months;rats were subjected to ICV injection of Aβ25-35,followed by administration of TLB(2.5,5,10 mg·kg-1·d-1,i.g.)for 14 days.We showed that TLB administration significantly and dose-dependently ameliorated the cognitive deficits in the two AD animal models,assessed in open field test,novel object recognition test,Y-maze test and Morris water maze test.Furthermore,TLB administration dose-dependently inhibited microglia and astrocyte activation in the hippocampus of APP/PS1 transgenic mice accompanied by decreased expression of high-mobility group box 1(HMGB1),TLR4 and NF-κB.In Aβ25-25-treated BV2 cells,TLB(12.5-50 μM)concentration-dependently increased the cell viability through inhibiting HMGB1/TLR4/NF-κB signaling pathway.HMGB1 overexpression abrogated the beneficial effects of TLB on BV2 cells after Aβ25-35 insults.Molecular docking and surface plasmon resonance assay revealed that TLB directly bound to HMGB1 with a KD value of 8.541×10-4 M.Furthermore,we demonstrated that TLB inhibited Aβ25-35-induced acetylation of HMGB1 through activating SIRT3/SOD2 signaling pathway,thereby restoring redox homeostasis and suppressing neuroinflammation.These results,for the first time,unravel a new property of TLB:rescuing cognitive impairment of AD via targeting HMGB1 and activating SIRT3/SOD2 signaling pathway.