目的:构建新型冠状病毒(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2，SARS-CoV-2)和甲型流感病毒双价DNA疫苗，并在小鼠模型中评价其免疫原性。方法:将SARS-CoV-2 Beta突变株S1蛋白编码序列和甲型流感病毒Cambodia (H3N2)株HA蛋白编码序列进行密码子优化合成，采用Over-lapping PCR方法，将两个编码基因通过自裂解2A肽(self-cleaving 2A peptides)序列连接成S1-2A-HA片段，构建能同时表达S1蛋白和HA蛋白的双价DNA疫苗，命名为pVRC-S1-2A-HA，间接免疫荧光和Western blot验证S1蛋白和HA蛋白的表达。将DNA疫苗以肌肉注射加电转途径(IM＋EP)免疫BALB/c小鼠，间接ELISA、假病毒中和试验和血凝抑制试验检测小鼠体液免疫应答，IFN-γ ELISPOT、胞内细胞因子染色(intracellular cytokine staining，ICS)和CBA法检测小鼠细胞免疫应答。结果:双价DNA疫苗pVRC-S1-2A-HA可以同时表达S1蛋白和HA蛋白，初次免疫后能够显著诱导小鼠产生针对S1蛋白的特异性细胞免疫和针对HA蛋白的特异性IgG结合抗体；加强免疫后特异性免疫应答都显著增强，针对S1蛋白的特异性IgG结合抗体几何平均滴度(geometric mean titer，GMT)提高至3 251，细胞免疫提高至1 238 SFC/10 6个细胞，针对HA蛋白的特异性IgG结合抗体GMT达到45 407。ICS法检测到疫苗加强免疫可诱导小鼠CD4 ＋和CD8 ＋T细胞产生IL-2、IFN-γ、TNF-α；CBA结果显示单针免疫后小鼠脾细胞分泌多种细胞因子(IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IFN-γ)。 结论:本研究成功构建能同时表达SARS-CoV-2 S1蛋白和甲型流感病毒H3N2亚型HA蛋白的双价DNA疫苗，该疫苗可诱导产生针对S1蛋白和HA蛋白的特异性体液免疫和细胞免疫应答，具有较好的研发与应用前景。

目的:制备针对严重急性呼吸系统综合症冠状病毒2(SARS-CoV-2)的单克隆抗体，用于抗原诊断。方法:收集分泌抗SARS-CoV单克隆抗体的杂交瘤细胞上清液，并用Western blot和间接酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)检测单克隆抗体与SARS-CoV-2 N蛋白之间的反应。通过免疫荧光，检测单克隆抗体与Vero细胞培养物中SARS-CoV-2的反应性。结果:从杂交瘤细胞中获得了两种单克隆抗体，分别称为A1和A2。它们都可以与SARS-CoV-2 N蛋白发生反应，而A2也可以识别SARS-CoV N蛋白。这些单克隆抗体可用于ELISA和免疫荧光实验。结论:获得了2种针对SARS-CoV-2 N蛋白的单克隆抗体，为发展SARS-CoV-2抗原检测方法提供了基础。

患者女，89岁，因腹股沟、外阴、臀间沟皮疹10个月、水疱3周就诊。皮肤科检查：腹股沟、外阴、臀间沟红白色增生性斑块，斑块部位散在绿豆至豌豆大小的糜烂面及水疱，右腋下及右小腿正常皮肤上散在数个类似水疱，部分破溃结痂。臀间沟皮损组织病理检查：棘层增生肥厚，无棘刺松解，部分区域可见表皮下裂隙和水疱，局灶性真皮浅层水肿，伴嗜酸性粒细胞浸润，真皮浅层血管周围可见淋巴细胞为主的浸润。直接免疫荧光：IgG、C3基底膜带线状沉积，IgM真皮簇状小体阳性，IgA阴性。盐裂皮肤间接免疫荧光：IgG、C3沉积在表皮侧。酶联免疫吸附试验检测血清抗体：BP180抗体26.92 U/ml、BP230抗体68.17 U/ml，桥粒芯蛋白1抗体、桥粒芯蛋白3抗体正常。诊断：增殖型类天疱疮。予口服甲泼尼龙，联合外用卤米松软膏及0.03%他克莫司软膏，皮疹逐渐消退。

目的:克隆并表达中国莱姆病螺旋体基因型代表菌株伽氏疏螺旋体( Borrelia garinii， B. garinii)PD91外膜蛋白A(OspA)的126～274 aa肽段，并对其免疫保护性进行初步研究。 方法:采用聚合酶链反应(PCR)扩增 B. garinii PD91的126～274 aa OspA肽段基因，克隆至原核表达载体pET-30a上，构建pET-30a-OspA-pep重组质粒，转入大肠埃希菌感受态细胞BL21(DE3)中，利用IPTG诱导表达，表达产物用Ni-IDA树脂层析纯化，采用Western blot分析其免疫原性。将不同剂量的重组OspA-pep(rOspA-pep)蛋白(20、30、40、50、60、80、100 μg)免疫新西兰家兔，采用间接免疫荧光法(IFA)检测免疫前后的抗体滴度，选取产生抗体滴度最高的剂量组为最佳剂量组。用最佳剂量组的免疫兔血清进行体外中和试验以检测rOspA-pep蛋白免疫后血清抗体的体外杀菌能力，同时用最佳剂量的rOspA-pep蛋白免疫新西兰家兔，观察其抗体滴度变化。 结果:重组质粒pET-30a-OspA-pep构建成功并在宿主菌体内高效表达。Western blot表明rOspA-pep蛋白与 B. garinii PD91的多抗有明显的免疫应答。IFA检测结果表明rOspA-pep蛋白免疫后的兔血清IgG抗体滴度明显升高(最高可达1∶2 480)，40 μg为rOspA-pep的最佳免疫剂量。体外中和试验结果表明该剂量rOspA-pep蛋白免疫家兔后产生的抗体对10 6个/ml的 B. garinii和阿弗西尼疏螺旋体( Borrelia afzelii， B. afzelii)型代表菌株PD91和FP1的中和率达100%，对10 7个/ml的FP1的中和率为100%，对10 7个/ml的PD91的中和率为60%。用40 μg rOspA-pep在1 d和30 d免疫新西兰家兔2次后，其抗体达到高峰，持续时间为3～4个月，之后抗体滴度逐渐下降。 结论:中国莱姆病螺旋体基因型代表菌株 B. garinii PD91的126～274 aa OspA肽段具有较好的免疫原性，其诱导的抗体有较好的体外中和能力，可作为中国二代亚单位疫苗的候选成分。

目的:分析黑龙江省蜱媒传染病定点诊治医院—牡丹江林业中心医院收治的蜱媒传染病患者的流行病学特征，为防治提供科学依据。方法:采集患者血清样本，应用间接免疫荧光试验和酶联免疫法检测森林脑炎、莱姆病和斑点热立克次体病（斑点热）抗体，收集病例的流行病学及临床资料，比较蜱媒病原体的检测阳性率在不同性别、年龄、民族、职业、居住地区、蜱叮咬史等特征间的差异。结果:2023年5月至8月共检测525例蜱媒传染病患者血清，314例抗体阳性，阳性率为59.81%（314/525），其中森林脑炎91例（17.33%），莱姆病153例（29.14%），斑点热142例（27.05%），复合感染68例（12.95%）。有明确蜱叮咬史病例的抗体阳性率（60.24%）高于无蜱叮咬史病例（51.85%），经统计学检验差异无统计学意义。病例就诊高峰期在5月至6月。医院对患者治疗有效率高于94.51%。结论:2023年黑龙江地区存在森林脑炎、莱姆病和斑点热流行，应进一步加强蜱媒传染病监测和防控工作。

患者女，46岁。因右眼视力下降伴闪光感10 d，于2019年4月10日就诊于天津医科大学眼科医院。10 d前患者突发右眼视力明显下降伴闪光感，无眼红、眼痛，无全身其他不适。既往有膝关节炎病史5年，糖尿病病史2年，均未规律服药；否认感冒及其他病史。眼部检查：右眼视力眼前数指，矫正不能提高；左眼视力1.0。右眼、左眼眼压分别为14.9、14.7 mm Hg（1 mm Hg=0.133 kPa）。双眼眼前节未见明显异常；瞳孔直接、间接对光反射正常；双眼玻璃体细胞（－）。眼底检查，双眼视盘边界清楚，中周部视网膜散在黄白色圆点状病灶，右眼后极部及左眼视盘周围黄白色改变（图1A）。眼底自身荧光（AF）检查，双眼黄斑区及中周部多处点片状强AF，右眼视盘及左眼视盘周围大片强AF（图1B）。光相干断层扫描（OCT）检查，右眼视盘、黄斑区以及左眼视盘颞侧视网膜外核层、外界膜、椭圆体带和嵌合体区反射缺失；左眼黄斑中心旁局部椭圆体带及嵌合体区结构不清，反射模糊（图1C）。OCT血管成像检查，双眼视网膜表层血流密度降低，右眼为著（图1D）。视野检查，左眼生理盲点扩大，视野损害；右眼视力差未能检查（图1E）。荧光素眼底血管造影（FFA）检查，双眼动静脉充盈时间正常，早期后极部强荧光，晚期视盘荧光着染，右眼后极部大片荧光素渗漏，中周部视网膜多处片状强荧光素渗漏；吲哚青绿血管造影（ICGA）检查，双眼后极部大片强荧光，晚期中周部多处"钱币状"弱荧光灶伴边缘环形荧光素渗漏（图1F~1I）。血常规、肝肾功能、乙肝病毒、人类免疫缺陷病毒、丙肝病毒、抗梅毒螺旋体抗体、红细胞沉降率、斑点试验、甲状腺功能七项、C反应蛋白、风湿三项、自身抗体谱、肿瘤常规均未见异常。PET-CT检查，体部、头部未见恶性病态征象。结合病史及眼部体征诊断：双眼急性区域性隐匿性外层视网膜病变（AZOOR）谱系疾病（AZOOR Complex）。

目的:原核表达人腺病毒（HAdV）7型DNA结合蛋白（DBP），制备DBP蛋白多克隆抗体。方法:合成HAdV-7 DBP基因并克隆至pET30a载体，转化大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞，IPTG诱导进行原核表达。经镍离子金属螯合层析纯化后免疫家兔制备多克隆抗体，使用间接酶联免疫吸附试验（ELISA）测定该抗体效价；使用Western blotting方法与间接免疫荧光方法（IFA）检测抗体特异性。以rDBP包被ELISA反应板使用间接ELISA对HAdV感染儿童急性期血清中抗DBP蛋白IgM和IgG抗体进行检测。结果:成功构建HAdV-7 DBP原核表达载体，表达的重组DBP蛋白经镍柱亲和层析纯化后纯度>95%，间接ELISA方法测得制备的多克隆抗血清的抗体效价为1∶1 024 000，Western blotting方法和IFA方法显示该抗体具有较高的特异性，间接ELISA方法检测HAdV感染儿童 急性期血清中抗DBP蛋白IgM和IgG抗体的阳性率分别为50.0%（19/38）和63.2%（24/38）。结论:成功构建HAdV-7 DBP蛋白的原达表达载体，获得了HAdV-7型DBP重组蛋白和高效价的兔多克隆抗体。

抗核抗体（ANA）检测在自身免疫性疾病（AID）的临床诊断、疾病进程、治疗效果及预后监测等方面发挥着重要作用。目前国内外在健康人群中进行ANA检测的主要方法是间接免疫荧光法，对ANA检测结果呈中滴度或高滴度者再进一步行靶抗原确定试验，从而筛查出人群中潜在的AID患者。本文针对间接免疫荧光法检测ANA步骤繁琐、结果判读易受操作人员主观影响、难以实现自动化和标准化等问题，比较全自动定量纳米磁微粒化学发光法和ANA固相分析检测等方法的优缺点，希望通过ANA高通量、自动化、标准化检测新技术的开发，将ANA检测早日纳入健康体检常规筛查项目，发挥其在AID等多种疾病中的预警作用。

森林脑炎是经硬蜱叮咬传播的自然疫源性疾病，其病原为黄病毒科中蜱传脑炎病毒。森林脑炎病死率较高，实验室检测对此病诊断有重要意义。本文对森林脑炎的病原学诊断方法及研究新进展进行阐述。森林脑炎实验室检测主要为常规检查、血清学检测、病毒分离、分子生物学检测。森林脑炎病毒血清特异性IgM抗体对早期诊断有重要价值，特异性IgG抗体可作为与其他疾病鉴别的"金标准"。酶联免疫吸附试验或间接免疫荧光法测血清和/或脑脊液中特异性IgM抗体，血清血凝抑制试验或血清补体结合试验，双份血清血凝抑制试验或补体结合试验均有助于早期诊断。分子技术检测方法发展迅速，代谢组学、数字PCR、基质金属蛋白酶亦应用于森林脑炎的早期诊断。

目的:探讨辅助性T细胞9(Th9)细胞和白细胞介素9(IL-9)在胃癌患者中的水平，评估Th9/IL-9对胃癌患者抗肿瘤免疫应答的调控作用。方法:纳入2018年10月至2019年8月在新乡医学院第一附属医院行手术治疗的胃癌患者34例，同期健康体检者20例。采集外周血，分离血浆和外周血单个核细胞(PBMCs)，从手术切除的胃癌组织分离肿瘤浸润性淋巴细胞(TILs)和自体胃癌细胞，分选PBMCs和TILs中的CD4 + T细胞、CD8 + T细胞和CD4 +CCR4 -CCR6 -CXCR3 -细胞。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血浆IL-9水平，流式细胞术检测PBMCs和TILs中CD3 +CD4 +IL-9 +Th9细胞比例，实时荧光定量聚合酶链反应检测IL-9和转录因子富嘌呤核酸结合蛋白1(PU.1) mRNA的相对表达量。以重组人IL-9刺激胃癌患者PBMCs和TILs，采用细胞计数试剂盒8法检测细胞增殖，Western blot法检测信号转导和转录激活因子3(STAT3)和STAT6磷酸化，ELISA法检测细胞因子分泌。以重组人IL-9刺激胃癌患者TILs分选的CD8 + T细胞，建立CD8 + T细胞与自体胃癌细胞的直接接触与间接接触共培养系统，通过检测乳酸脱氢酶(LDH)水平计算靶细胞死亡比例，ELISA法检测γ-干扰素(γ-IFN)和肿瘤坏死因子(TNF-α)水平。CD4 +CCR4 -CCR6 -CXCR3 -细胞、CD8 + T细胞与自体胃癌细胞共培养，加入抗IL-9中和抗体，检测靶细胞死亡比例。 结果:对照组PBMCs和胃癌组PBMCs中CD3 +CD4 +IL-9 +Th9细胞比例分别为(1.21±0.25)%和(1.14±0.19)%，差异无统计学意义( P＝0.280)。胃癌组TILs中CD3 +CD4 +IL-9 +Th9细胞比例为(2.30±0.55)%，高于对照组PBMCs和胃癌组PBMCs(均 P<0.001)。对照组和胃癌组血浆IL-9水平分别为(5.04±1.51)ng/ml和(4.93±1.25)ng/ml，差异无统计学意义( P＝0.787)。对照组PBMCs和胃癌组PBMCs中IL-9 mRNA相对表达量分别为1.33±0.39和1.36±0.27，差异无统计学意义( P＝0.691)。胃癌组TILs中IL-9 mRNA相对表达量为2.90±0.75，高于对照组PBMCs( P<0.001)和胃癌组PBMCs( P<0.001)。对照组和胃癌组PBMCs中PU.1 mRNA相对表达量分别为1.21±0.12和1.20±0.11，差异无统计学意义( t＝0.21， P＝0.833)。胃癌组TILs中PU.1 mRNA相对表达量为2.81±0.65，高于对照组PBMCs( P<0.001)和胃癌组PBMCs( P<0.001)。重组人IL-9对胃癌患者PBMCs和TILs的增殖无明显影响(均 P>0.05)，但可提高STAT6的磷酸化水平，促进TILs分泌γ-IFN、IL-17和IL-22(均 P<0.05)。在直接接触共培养系统中，IL-9刺激使肿瘤浸润性CD8 + T细胞诱导的自体胃癌细胞死亡比例增加[(20.62±2.27)%比(16.08±2.61)%， P<0.01)]。在间接接触共培养系统中，IL-9刺激并未增加CD8 + T细胞诱导自体胃癌细胞死亡比例[(5.21±0.70)%比(5.31±1.22)%， P＝0.998]。但在两种共培养系统中，IL-9刺激后γ-IFN分泌水平均增加[直接接触共培养系统：(100.40±12.05)pg/ml比(76.45±8.56)pg/ml；间接接触共培养系统：(78.00±9.98)pg/ml比(42.09±10.71)pg/ml； P<0.01]，TNF-α分泌水平均无明显变化(均 P>0.05)。在直接接触共培养系统中，CD4 + CCR4 - CCR6 - CXCR3 -细胞+CD8 + T细胞+胃癌细胞组的靶细胞死亡比例为(22.01±3.05)%，γ-IFN水平为(104.5±12.84)pg/ml，均高于CD8 + T细胞+胃癌细胞组[分别为(16.08±2.61)%和(76.45±8.56)pg/ml，均 P<0.01]，但CD4 + CCR4 - CCR6 - CXCR3 -细胞+CD8 + T细胞+胃癌细胞+抗IL-9中和抗体组的靶细胞死亡比例为(14.47±3.14)%，γ-IFN水平为(70.45±19.43)pg/ml，均低于CD4 +CCR4 -CCR6 -CXCR3 -细胞+CD8 + T细胞+胃癌细胞组(均 P<0.01)。 结论:肿瘤浸润性Th9细胞及其分泌的IL-9可促进胃癌患者CD8 + T细胞活性，增强抗肿瘤免疫应答。