目的 探索阿苯达唑亚砜(albendazole sulfoxide,ABZSO)与聚丙交酯乙交酯-聚乙二醇-聚丙交酯乙交酯(PL-GA-PEG-PLGA)制备的阿苯达唑亚砜温敏型原位凝胶(ABZSO/PLGA-PEG-PLGA)抗泡球蚴的效果.方法 应用ABZSO/PLGA-PEG-PLGA(20 μg/mL、40 μg/mL、80 μg/mL)、ABZSO(40 μg/mL)、PLGA-PEG-PLGA处理体外培养泡球蚴并统计原头节的存活率,采用扫描电镜观察各处理组泡球蚴或原头节形态变化;以各药物组治疗泡球蚴病大鼠动物模型后检查泡球蚴体积大小.结果 药物处理体外培养泡球蚴18 d时,ABZSO/PLGA-PEG-PLGA(40 μg/mL)原头节存活率显著低于ABZSO(40 μg/mL)组;扫描电镜结果显示ABZSO/PLGA-PEG-PLGA(80 μg/mL)组的原头节结构被显著破坏;动物体内实验表明ABZSO/PLGA-PEG-PLGA(4 mg/mL)组对抗泡球蚴效果比其他各药物组显著.结论 ABZSO/PLGA-PEG-PLGA具有抗泡球蚴的效果.

目的 研究氯舒隆和奥硝唑体外抗细粒棘球蚴原头节和多房棘球蚴的效果. 方法 从感染细粒棘球蚴绵羊肝脏中收集原头节;从感染长爪沙鼠腹腔中分离多房棘球蚴,加入预先接种人肝癌细胞的DMEM培养基中培养2个月后,收集直径为1～5 mm囊泡.实验分氯舒隆组(实验组)、奥硝唑组(实验组)、阿苯达唑组(阳性对照)和0.2％二甲基亚砜(DMSO)组(溶剂对照组).每种药物设2个平行孔,终浓度均为40μmol/L,重复2次.每孔加细粒棘球蚴原头节约100个或多房棘球蚴囊泡25～35个.药物处理细粒棘球蚴原头节24、48、72、96、120、144和168 h后,显微镜下观察原头节形态,用台盼蓝染色,计算原头节存活率,组间存活率的比较采用方差分析.药物处理多房棘球蚴囊泡36 h和120 h后,显微镜下观察囊泡的形态学改变,测定培养上清液中碱性磷酸酶的活性,组间酶活性的比较采用卡方分析. 结果 氯舒隆、奥硝唑和阿苯达唑作用于原头节后,原头节颜色变深、钙颗粒减少、头钩脱落、头节外翻并伸长,0.2％ DMSO对原头节形态无影响.氯舒隆、臭硝唑和阿苯达唑作用24、48、72、96、120、144和168 h后,原头节存活率分别为79％、70％、56％、42％、33％、16％、15％,86％、67％、63％、48％、32％、28％、21％和85％、71％、45％、36％、21％、15％、8％;0.2％ DMSO组原头节存活率为100％.氯舒隆、奥硝唑和阿苯达唑组原头节存活率与0.2％ DMSO组相比差异均有统计学意义(x2=147.83、130.58、170.37,P＜0.05).氯舒隆、奥硝唑和阿苯达唑作用后,多房棘球蚴囊泡均塌陷、皱缩,0.2％ DMSO对多房棘球蚴囊泡形态无影响.作用36 h后氯舒隆、奥硝唑、阿苯达唑和0.2％ DMSO组培养上清液碱性磷酸酶的吸光度(A405)值分别为0.196±0.030、0.186±0.004、0.244±0.049和0.131±0.020,作用120 h后分别为0.431±0.006、0.271±0.004、0.423±0.007和0.116±0.004.氯舒隆、奥硝唑和阿苯达唑组与0.2％ DMSO组相比差异均有统计学意义(t=0.006、0.004、0.007,P＜ 0.05). 结论 氯舒隆和奥硝唑对体外培养的细粒棘球蚴原头节和多房棘球蚴均具有较强的作用,足潜在的抗棘球蚴药物.

目的 建立同时测定绵羊血浆中阿苯达唑(ABZ)、阿苯达唑亚砜(ABZSO)、阿苯达唑砜(ABZSO2)、阿苯达唑氨基砜(ABZSO2-NH2)浓度的超高效液相色谱-飞行时间质谱联用(UPLC-Q-TOF-MS)分析方法,并研究阿苯达唑脂质体混悬液在健康绵羊体内的药代动力学特征.方法 6只绵羊单剂量灌胃给予阿苯达唑脂质体混悬液(10 mg/kg)后,不同时间点颈静脉采血,血浆样品经乙腈沉淀蛋白法处理后,采用UPLC-Q-TOF-MS法测定血药浓度,内标为甲苯咪唑(MBZ),色谱柱为ACQUITY UPLC(R) BEH C18 (2.1 mm×50 mm,1.7 μm),流动相为甲醇-0.1％甲酸,梯度洗脱,流速为0.4 mL/min,进样量为2μL,柱温为40C,采用电喷雾离子化(ESI)源,正离子扫描模式,选择监测离子检测(SIM),ABZ m/z 266.096,ABZSO m/z 282.091,ABZSO2 m/z 298.086,ABZSO2-NH2m/z 240.081,内标MBZ m/z 296.104,应用Kinetica程序计算药代动力学参数.结果 阿苯达唑浓度为6.2～798.0 ng/mL,阿苯达唑亚砜浓度为5.2～5 370.0 ng/mL,阿苯达唑砜浓度为3.3～3 168.0 ng/ml,阿苯达唑氨基砜浓度为8.6～1 100.0 ng/mL,线性关系良好(r=0.999 5、0.998 1、0.999 4、0.998 8),定量下限分别为6.2、5.2、3.3、8.6 ng/mL,提取回收率均＞95.3％,日间、日内精密度RSD均＜15.0％,在本实验涉及的条件下样品稳定.绵羊灌胃给予阿苯达唑脂质体混悬液后,血浆中检测不到ABZ母体药物;给药后36、48 h可检测到较低浓度ABZSO2-NH2.用非房室模型测得主要药代动力学参数,ABZSO和ABZSO2的T1/2、Cmax、AUC0-()分别为(5.13±2.00)h、(3.78±0.78)μg/mL、(59.10±6.24)μg×h/mL和(3.29±0.09)h、(0.53±0.070)μg/mL、(13.66±1.54)μg×h/mL.结论 本方法可靠、专属性强,适用于ABZ及其代谢物的血药浓度测定和药代动力学研究,为综合评价阿苯达唑脂质体混悬液提供参考.

目的 探讨去氢骆驼蓬碱衍生物DH-330体外诱导对细粒棘球蚴线粒体凋亡通路中Cyt-C和Caspase-3的影响. 方法 体外培养细粒棘球蚴,随机分为空白对照组、溶剂对照组(终体积浓度为1％ DMSO)、阳性对照组(阿苯达唑亚砜组,ABZSO,培养液中终浓度为6.25、12.50、25.00、50.00、100.00μg/L)及DH-330处理组(培养液中终质量浓度为6.25、12.50、25.00、50.00、100.00μg/L),连续用药6d,染色观察各组细粒棘球蚴存活率,通过酶联免疫吸附试验检测评价DH-330对细粒棘球蚴线粒体Cyt-C释放量、Caspase-3酶活性的影响,绘制活力曲线. 结果 DH-330干预后对细粒棘球蚴形态产生显著影响,50、100 μg/L DH-330处理3d和6d细粒棘球蚴存活率分别为59.33％、43.25％和21.45％、3.25％,DH-330浓度组(培养液中终质量浓度为12.50、25.00、50.00、100.00μg/L)对细粒棘球蚴的杀伤作用呈时间、浓度依赖性.作用6d,ED50值为25.44 μg/L.给予不同剂量的DH-330干预后Caspase-3酶活性显著增高(P＜0.01),且呈浓度依赖性与时间依赖性;作用3d时随着药物浓度的增加,细粒棘球蚴Cyt-C表达水平逐渐增高(P＜0.05),6d时随着药物浓度的增加,细粒棘球蚴Cyt-C表达水平逐渐降低(P＜0.05). 结论 药物干预过程中,Caspase3酶活性和Cyt-C释放量显著增加,表明线粒体凋亡通路可能参与DH-330诱导的细粒棘球蚴凋亡过程,具体机制有待进一步研究.

目的 研究白藜芦醇(Resveratrol,RES)体外对多房棘球蚴原头节(Protoscoleces,PSCs)和微囊的作用效果,为多房棘球蚴病的临床用药提供新的依据.方法 PSCs体外经不同浓度(5、10、20、40、80、100、200和400 μmol/L)的RES作用7 d,采用台盼蓝染色观察其活力与形态变化,采用扫描电镜和透射电镜观察其超微结构变化,运用化学发光法检测上清中碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP)活性;微囊体外经RES(40 μmol/L)作用14 d后于光镜下观察其活力和形态变化,运用化学发光法检测上清中ALP活性.结果 不同浓度的RES体外持续作用7 d,PSCs死亡率呈剂量、时间依赖性增高,并伴随大量小钩脱落.当40 μmol/LRES作用至第6 d,PSCs死亡率达到100％,且虫体小钩、吸盘和外皮等超微结构被破坏;在同条件下,阿苯达唑亚砜(Albendazole sulfoxide,ABZ-SO)处理组中PSCs死亡率为13.25％±1.41％,对照组-二甲基亚砜(Dimethyl sulfoxide,DMSO)组PSCs死亡率仅为6％±0.71％.不同浓度的RES作用至第6 d,PSCs培养上清中ALP活性呈剂量依赖性升高(F=36.94,P＜0.001),其中,RES浓度为20和40 μmol/L时,上清中ALP活性分别为(2.72±0.24)U/L和(2.95±0.10)U/L,分别与 DMSO组(1.97±0.18)U/L 间差异存在统计学意义(t=2.94,P=0.0259和 t=7.066,P=0.0004).另外,RES作用至14 d,微囊透光性降低,生发层皱缩且与角质层分离,同时上清中ALP活性(2.74±0.15)U/L高于较DMSO组(2.08±0.09)U/L(t=3.83,P=0.019),但 ABZ-SO组(2.29±0.14)U/L 与 DMSO组间差异无统计学意义(t=1.271,P=0.273).结论 白藜芦醇体外可抑制多房棘球蚴原头节和微囊的活性,有望成为治疗多房棘球蚴病的潜在候选药物.

目的:以葡聚糖纳米颗粒(glucan particles,GPs)负载阿苯达唑(albendazole,ABZ)得到的阿苯达唑葡聚糖纳米颗粒(ABZ-GPs)为研究对象,探索其在大鼠体内药动学特征及对小鼠肝脏的靶向性.方法:大鼠和小鼠分别灌胃给予ABZ和ABZ-GPs,并于给药后不同时间点从大鼠眼脉络丛取血、小鼠解剖取肝组织,样品按相应方法处理后,利用液相色谱-高分辨质谱联用(LC-MS/MS)法建立的回归方程测定样品中的药物浓度,并分析2种ABZ剂型的药动学参数及肝靶向性差异.结果:建立的LC-MS/MS方法在血浆和肝脏组织的药物含量测定中具有良好的线性关系,日内、日间精密度及稳定性RSD均小于11％,提取回收率均大于(83.85±0.91)％,符合药典检测要求.利用该法测得48 h内ABZ-GPs组的阿苯达唑亚砜(ABZSO)的Cmax=(0.86±0.07)μg·h·mL-1,tmax=(8.00±0.35)h,AUC0-t=(8.60±1.72)μg·h·mL-1,MR0-t=(7.00±0.87)h.ABZSO在小鼠肝组织的最大峰浓度比(Ce) (ABZ-GPs/ABZ)为1.32,靶向指数(TI) (ABZ-GPs/ABZ)为3.27.结论:与ABZ原药相比,ABZ-GPs口服给药吸收快,肝靶向性显著,并具有明显的缓释作用.

目的 评价砂生槐总生物碱(TA-SM)水剂和片剂体外体内抗多房棘球蚴的效果.方法 从保种的蒙古长爪沙鼠中分离多房棘球蚴原头节,置培养瓶中(10 000个原头节/瓶)培养.将原头节培养瓶随机分组为培养基对照组、溶剂对照组、阿苯达唑(ABZ)阳性对照组、阿苯达唑亚砜(ABZ-SO)阳性对照组和低、中、高浓度TA-SM水剂组和片剂组,各组分别加RPMI 1640完全培养基、终浓度为0.1％的二甲基亚砜(DMSO)、10μg/ml的ABZ、10.60 μg/ml的ABZ-SO或终浓度为5(低浓度)、10(中浓度)、20 μg/ml(高浓度)的水剂或片剂TA-SM,37匕、5％CO2培养7 d,每天取样台盼蓝染色,倒置显微镜下观察原头节存活情况,计算存活率;共培养至第5天检测培养上清中的碱性磷酸酶(ALP)和原头节中的半胱天冬氨酸蛋白酶3(caspase 3)的相对表达水平.取54只雌性昆明小鼠,每鼠经腹腔注射0.2 ml多房棘球蚴原头节(密度为104个/ml),感染4个月后随机分为生理盐水组、片剂组和水剂组,每组18只,水剂组和片剂组每鼠灌服28 mg/(kg-d)的水剂或片剂TA-SM,生理盐水组灌服等量的生理盐水,每天给药1次.给药治疗15、30、60d后,每组随机抽取6只小鼠剖取包囊,称重,计算抑囊率;取肝组织切片,苏木素-伊红(HE)染色后观察肝组织的病理变化,扫描电子显微镜(SEM)观察肝组织的超微结构.组间比较采用单因素方差分析,两两比较采用LSD-t检验.结果 体外共培养至第7天,培养基和溶剂对照组的原头节形态呈椭圆形,各部分完整清晰,未受损伤,表现为典型的内陷型;ABZ和ABZ-SO阳性对照组的原头节虫体变长,可见吸盘,表现为典型的外翻型;低、中浓度TA-SM水剂组和片剂组原头节以内陷型为主,偶有外翻型;高浓度TA-SM水剂组和片剂组原头节形态多为外翻型.体外共培养至第7天,低、中、高浓度TA-SM水剂组和片剂组原头节存活率分别为(34.7±2.75)％、(31.5±10.12)％、(27.6±2.51)％和(30.8±4.15)％、(29.8±8.11)％、(25.2±4.30)％,二者存活率差异无统计学意义(t=1.36、0.22、0.83,均P＞0.05);TA-SM水剂组和片剂组的存活率均低于培养基对照组[(78.4±9.68)％](F=32.30、38.53,均 P＜0.01)和溶剂对照组[(82.7±5.45)％](F=55.15、67.50;均 P＜0.01),与 ABZ 阳性对照组[(23.85±19.63)％](F=0.53、0.29,均P＞0.05)和 ABZ-SO 阳性对照组[(18.93±3.08)％](F=4.44、3.17;均P＞0.05)差异无统计学意义.体外共培养至第5天,低、中、高浓度TA-SM水剂组和片剂组,ABZ和ABZ-SO阳性对照组,培养基和溶剂对照组培养上清中ALP的相对表达水平分别为0.15+0.01、0.17±0.03、0.18±0.03和0.21±0.04、0.29±0.04、0.32±0.04,0.17±0.01 和 0.15±0.01,0.15±0.01 和 0.13±0.01,其中 TA-SM 片剂组均高于培养基和溶剂对照组、ABZ 和 ABZ-SO 阳性对照组(F=18.49、22.34、14.86、18.06,P＜0.01)以及 TA-SM 水剂组(t=6.86、3.78、5.19,均P＜0.05).体外共培养至第5天,低、中、高浓度TA-SM水剂组和片剂组、ABZ和ABZ-SO阳性对照组,培养基和溶剂对照组原头节中caspase 3的相对表达水平分别为0.14±0.01、0.13±0.01、0.14±0.01 和 0.21±0.02、0.36±0.04、0.42±0.04,0.10±0.01 和 0.17±0.01,0.13±0.01 和 0.10±0.01,其中 TA-SM 片剂组均高于培养基和溶剂对照组、ABZ和ABZ-SO阳性对照组(F=58.97、69.18、71.81、46.77,均P＜0.01)以及TA-SM水剂组(t=4.99、10.24、10.82,P＜0.01).小鼠体内药效实验结果显示,感染多房棘球蚴小鼠治疗60 d后,TA-SM片剂组和水剂组小鼠的抑囊率分别为(24.4±4.15)％、(17.2±3.71)％,二者差异有统计学意义(t=3.15,P＜0.05);肝切片HE染色光学显微镜观察结果显示,生理盐水组小鼠肝细胞肿大,周围有大量炎性细胞浸润,细胞质有大量空泡样变性;TA-SM水剂组和片剂组肝细胞形态明显趋于正常,炎性细胞明显减少,细胞质空泡样变性减少;SEM观察结果显示,感染小鼠治疗15 d后,生理盐水组小鼠肝组织病灶中出现典型的囊泡状结构,TA-SM片剂组和水剂组小鼠肝组织病灶中典型的囊泡状结构显著减少.结论 TA-SM水剂和片剂在体内、体外均有一定的抗多房棘球蚴的效果,体外的疗效与ABZ基本一致,TA-SM片剂的疗效优于水剂.

目的 研究氯舒隆和奥硝唑体外抗细粒棘球蚴原头节和多房棘球蚴的效果. 方法 从感染细粒棘球蚴绵羊肝脏中收集原头节;从感染长爪沙鼠腹腔中分离多房棘球蚴,加入预先接种人肝癌细胞的DMEM培养基中培养2个月后,收集直径为1～5 mm囊泡.实验分氯舒隆组(实验组)、奥硝唑组(实验组)、阿苯达唑组(阳性对照)和0.2％二甲基亚砜(DMSO)组(溶剂对照组).每种药物设2个平行孔,终浓度均为40 μmol/L,重复2次.每孔加细粒棘球蚴原头节约100个或多房棘球蚴囊泡25～35个.药物处理细粒棘球蚴原头节24、48、72、96、120、l44和168 h后,显微镜下观察原头节形态,用台盼蓝染色,计算原头节存活率,组间存活率的比较采用方差分析.药物处理多房棘球蚴囊泡36 h和120 h后,显微镜下观察囊泡的形态学改变,测定培养上清液中碱性磷酸酶的活性,组间酶活性的比较采用卡方分析. 结果 氯舒隆、奥硝唑和阿苯达唑作用于原头节后,原头节颜色变深、钙颗粒减少、头钩脱落、头节外翻并伸长,0.2％ DMSO对原头节形态无影响.氯舒隆、臭硝唑和阿苯达唑作用24、48、72、96、120、144和168 h后,原头节存活率分别为79％、70％、56％、42％、33％、16％、15％,86％、67％、63％、48％、32％、28％、21％和85％、71％、45％、36％、21％、15％、8％;0.2％ DMSO组原头节存活率为100％.氯舒隆、奥硝唑和阿苯达唑组原头节存活率与0.2％ DMSO组相比差异均有统计学意义(X2=147.83、130.58、170.37,P＜ 0.05).氯舒隆、奥硝唑和阿苯达唑作用后,多房棘球蚴囊泡均塌陷、皱缩,0.2％ DMSO对多房棘球蚴囊泡形态无影响.作用36 h后氯舒隆、奥硝唑、阿苯达唑和0.2％ DMSO组培养上清液碱性磷酸酶的吸光度(A405)值分别为0.196±0.030、0.186±0.004、0.244±0.049和0.131±0.020,作用120 h后分别为0.431±0.006、0.271±0.004、0.423±0.007和0.116±0.004.氯舒隆、奥硝唑和阿苯达唑组与0.2％ DMSO组相比差异均有统计学意义(t=0.006、0.004、0.007,P＜ 0.05). 结论 氯舒隆和奥硝唑对体外培养的细粒棘球蚴原头节和多房棘球蚴均具有较强的作用,是潜在的抗棘球蚴药物.