目的:探讨雷公藤甲素（TP）通过肌醇需求酶1（IRE1）/c-Jun氨基端激酶（JNK）信号通路对人黑素瘤A375细胞凋亡的影响及其可能的作用机制。方法:采用不同浓度[0（实验对照组）、50、100、200 nmol/L]TP处理A375细胞，同时设置空白对照组（仅有DMEM高糖培养基，不含细胞），采用噻唑蓝（MTT）比色法测定处理24、48和72 h时细胞活性，流式细胞仪检测处理24 h时细胞凋亡率，实时荧光定量PCR（RT-qPCR）和Western印迹法检测IRE1、JNK和c-Jun mRNA及蛋白表达水平。经JNK抑制剂SP600125预处理A375细胞72 h后，再用100 nmol/L TP处理24 h，即SP600125 + 100 nmol/L TP组，观察TP对A375细胞中IRE1、JNK、c-Jun mRNA表达水平及细胞凋亡的影响。统计分析采用两因素方差分析、单因素方差分析及Dunnett- t检验。 结果:不同浓度TP作用不同时间，各浓度TP组A375细胞存活率均显著低于实验对照组（ FTP浓度 = 18.36， P = 0.002），且随时间延长，A375细胞存活率越低（ F时间 = 8.54， P = 0.018）。处理A375细胞24 h，50、100、200 nmol/L TP组及实验对照组细胞凋亡率分别为16.99% ± 0.33%、30.78% ± 0.40%、38.91% ± 0.51%、4.33% ± 0.02%，组间差异有统计学意义（ F = 5 234.97， P < 0.001），各TP组细胞凋亡率均显著高于实验对照组（均 P < 0.05），且凋亡率随TP浓度的增加而逐渐升高。50、100、200 nmol/L TP组IRE1、JNK和c-Jun mRNA表达水平均显著高于实验对照组（均 P < 0.05），且随着TP浓度的增加这些基因mRNA表达水平逐渐升高，TP处理组A375细胞中IRE1、JNK、c-Jun、p-JNK和p-c-Jun蛋白表达水平也显示出相同的趋势。经JNK抑制剂SP600125预处理72 h后，SP600125 + 100 nmol/L TP组细胞凋亡率（21.88% ± 0.55%）显著低于未经SP600125预处理的100 nmol/L TP组（ t = -22.51， P < 0.001），且IRE1、JNK和c-Jun mRNA的表达水平也显著降低（均 P < 0.05）。 结论:TP可能通过激活IRE1/JNK信号通路诱导人黑素瘤A375细胞凋亡。

目的:探讨雷公藤内酯甲(Wilforlide A,WA)对肺癌细胞增殖和侵袭及巨噬细胞M2极化的影响.方法:(实验一):将肺癌细胞LLC按照WA处理浓度分为0、0.01、0.1、1和10μg/L组.WA孵育48h后,采用MTT法、Annexin V-FITC/PI染色法和Transwell法检测细胞增殖、凋亡和侵袭.采用Western blot检测Bcl-2、Bax、MMP-2和MMP-9蛋白表达水平.(实验二):将单核巨噬细胞RAW264.7按照WA处理浓度分为0、0.01、0.1、1和10 μg/L组.采用MTT法检测细胞增殖.然后再将RAW264.7细胞为Control组、IL-4组、WA组和IL-4+WA组.使用10 ng/mL的IL-4和1μg/L的WA培养细胞24 h.采用ELISA法检测细胞培养上清液中CD206、Arg-1和IL-10水平.(实验三):细胞分组如下:Blank组、RAW264.7组、IL-4 RAW264.7组、WA组和IL-4 RAW264.7+WA组.按照分组方案,将LLC细胞分别与RAW264.7细胞、IL-4诱导RAW264.7细胞以及10μg/L的WA共培养24h,然后检测细胞增殖、凋亡、侵袭及细胞培养上清液中的M2型巨噬细胞标志物水平.流式细胞仪检测CD86和CD206阳性百分比.结果:(实验一):与0 μg/L组比较,0.1、1和10μg/L组LLC细胞的相对细胞活力降低(P＜0.05),细胞凋亡率和Bax蛋白相对表达水平均升高(P＜0.05),侵袭细胞数量以及Bcl-2、MMP-2和MMP-9蛋白相对表达水平均降低(P＜0.05).(实验二):与0μg/L组比较,10 μg/L组RAW264.7细胞的相对细胞活力降低(P＜0.05).与Control组比较,IL-4组RAW264.7细胞的CD206、Arg-1 和 IL-10 水平升高(P＜0.05),WA 组 RAW264.7 细胞的 CD206、Arg-1 和 IL-10 水平降低(P＜0.05).与 IL-4 组比较,IL-4+WA组 RAW264.7 细胞的 CD206、Arg-1 和 IL-10 水平降低(P＜0.05).(实验三):与 Blank 组比较,RAW264.7 组和 IL-4 RAW264.7 组的相对细胞活力和侵袭细胞数量均升高(P＜0.05),细胞凋亡率降低(P＜0.05).与RAW264.7组比较,IL-4 RAW264.7组的相对细胞活力和侵袭细胞数量升高(P＜0.05),细胞凋亡率降低(P＜0.05),CD206、Arg-1和IL-10水平升高(P＜0.05),CD86百分比降低,CD206百分比升高(P＜0.05).与IL-4RAW264.7比较,IL-4RAW264.7+WA组的相对细胞活力和侵袭细胞数量降低(P＜0.05),细胞凋亡率升高(P＜0.05),CD206、Arg-1和IL-10水平降低(P＜0.05),CD86百分比升高,CD206百分比降低(P＜0.05).结论:本研究表明雷公藤内酯甲具有抗NSCLC作用,其机制与抑制巨噬细胞的M2型极化有关.

药品名称:错误(正确)二磷酸腺苷(腺苷二磷酸),消炎痛(吲哚美辛),阿斯匹林(阿司匹林),维甲酸(维A酸),双磷酸盐(双膦酸盐),甲氨喋呤(甲氨蝶呤),博莱霉素(博来霉素),开浦兰(左乙拉西坦),雷公多苷(雷公藤多苷),非那根(异丙嗪),四乙铵(四乙胺),洗必泰(氯已定),美息律(美西律),大环内脂类(大环内酯类),川穹(川芎),酒精(乙醇),头胞哌酮(头孢哌酮).

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采用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20 柱色谱以及半制备型高效液相色谱等手段对多籽五层龙Salacia polysperma枝叶的90%乙醇提取物进行了化学成分研究,从中分离得到了 9 个化合物,通过现代波谱学分析,分别鉴定为 28-羟基雷公藤内酯乙(28-hydroxy wilforlide B,1)、雷公藤内酯甲(wilforlide A,2)、1β,3β-dihydroxyurs-9(11),12-diene(3)、表儿茶素[(-)-epicate-chin,4]、儿茶素[(+)-catechin,5]、(-)-4'-O-methyl-ent-galloepicatechin(6)、3-hydroxy-1-(4-hydroxy-3-methoxy-phenyl)propan-1-one(7)、(-)-(7S,8R)-4-hydroxy-3,3',5'-trimethoxy-8',9'-dinor-8,4'-oxyneoligna-7,9-diol-7'-aldehyde(8)、香草酸(vanillic acid,9).其中化合物 1 为 1 个新的齐敦果烷型三萜内酯,除化合物 2、5、6 外,其余化合物均为首次从该属植物中分离得到.对分离得到的化合物进行降血糖活性筛选,结果显示化合物 8 表现出一定的α-葡萄糖苷酶抑制作用,IC50 为 37.2 μmol·L-1,其他化合物未表现出α-葡萄糖苷酶抑制活性.

在全面阐述胰腺癌中医病因病机及中药单体概念的基础上,总结了大黄素、大黄酸、穿心莲内酯、雷公藤甲素、蝙蝠葛酚性碱等中药单体在胰腺癌肿瘤抑制中的作用,认为其作用是发挥具体机制,包括干扰胰腺癌细胞及干细胞中多个异常信号通路、靶基因等,这能为中药治疗胰腺癌的临床应用及研究提供参考.

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目的:探讨雷公藤内酯醇(TPL)对多发性骨髓瘤RPMI8226细胞增殖、凋亡和组蛋白H3K4甲基化的影响.方法:以人多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226为研究对象,在不同浓度(10、20、40、80、160 nmol/L) TPL中共培养不同时间(24h、48h、72 h)后,采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖活性;流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期;Westem blot法检测组蛋白H3K4me2、H3K4me3的甲基化状态,实时荧光定量RT-PCR分析组蛋白甲基化酶SMYD3和组蛋白去甲基化酶LSD1的表达水平.结果:TPL对RPMI8226细胞有明显的增殖抑制作用,呈剂量和时间依赖性(P＜0.05);TPL对RPMI8226细胞有明显诱导凋亡的作用,并且随着TPL作用浓度的增加,细胞凋亡比例逐渐增加(P＜0.05);同时TPL还可以诱导RPMI8226细胞周期阻滞于G2/M期;TPL以浓度依赖性降低组蛋白H3K4me2、H3K4me3的甲基化水平(P＜0.05,P＜0.01),并抑制SMYD3和上调LSD1的表达(P＜0.05).结论:TPL可抑制RPMI8226细胞增殖、引起细胞周期阻滞于G2/M期,并诱导其凋亡;通过抑制组蛋白甲基化酶SMYD3和增强组蛋白去甲基化酶LSD1的表达,降低组蛋白H3K4me3和H3K4me2的甲基化水平,这可能是rPL诱导多发性骨髓瘤细胞凋亡和抗肿瘤作用的机制之一.