目的:探讨雷公藤内酯醇（TP）通过内质网应激介导的JNK/c-Jun信号通路诱导黑色素瘤A375细胞凋亡的相关机制。方法:裸鼠背部皮下注射接种黑色素瘤A375细胞，建立黑色素瘤动物模型。肿瘤形成3周后，将裸鼠随机分为0（对照组）、0.1、0.2、0.4 mg/kg浓度TP组，每组4只，每周注射相应浓度药物2次，3周后摘除肿瘤，测量瘤体大小及重量。用TUNEL法检测肿瘤组织的凋亡水平。采用qPCR检测肿瘤组织肌醇酶1（IRE-1）、c-Jun氨基酸末端激酶（JNK）、c-Jun的mRNA水平，采用Western印迹检测IRE-1、JNK、c-Jun及磷酸化JNK、c-Jun（p-JNK、p-c-Jun）蛋白水平。多组间比较采用单因素方差分析，采用Dunnett's检验进行多重比较。结果:对照组和0.1、0.2、0.4 mg/kg TP组肿瘤质量、体积及抑瘤率差异均有统计学意义（均 P < 0.05），各药物组肿瘤质量、体积均低于对照组（均 P < 0.05），抑瘤率均高于对照组（均 P < 0.05）。对照组和0.1、0.2、0.4 mg/kg TP组肿瘤凋亡指数（7.67% ± 1.15%、9.67% ± 3.21%、62.00% ± 6.08%、85.67% ± 5.51）差异有统计学意义（ F = 305.91， P < 0.001），0.2、0.4 mg/kg TP组肿瘤凋亡指数高于对照组（ t = 17.56、27.72，均 P < 0.05）。qPCR和Western印迹显示，对照组、0.1 ~ 0.4 mg/kg TP组肿瘤IRE1、JNK、c-Jun mRNA水平差异均有统计学意义（ F = 112.23、27.51、112.37，均 P < 0.05），IRE1、JNK、c-Jun、p-JNK、p-c-Jun相对表达水平差异均有统计学意义（均 P < 0.05），0.4 mg/kg TP组IRE1、JNK、c-Jun mRNA及蛋白（包括p-JNK、p-c-Jun）表达均高于对照组（均 P < 0.05）。肿瘤组织中IRE1、JNK、c-Jun mRNA和蛋白表达水平均随药物作用浓度增加有升高趋势，p-JNK和p-c-Jun蛋白表达水平变化也呈相同的趋势。 结论:TP可以激活内质网应激介导的JNK/c-jun信号通路并诱导黑色素瘤A375细胞凋亡。

目的:探讨雷公藤甲素（TP）通过肌醇需求酶1（IRE1）/c-Jun氨基端激酶（JNK）信号通路对人黑素瘤A375细胞凋亡的影响及其可能的作用机制。方法:采用不同浓度[0（实验对照组）、50、100、200 nmol/L]TP处理A375细胞，同时设置空白对照组（仅有DMEM高糖培养基，不含细胞），采用噻唑蓝（MTT）比色法测定处理24、48和72 h时细胞活性，流式细胞仪检测处理24 h时细胞凋亡率，实时荧光定量PCR（RT-qPCR）和Western印迹法检测IRE1、JNK和c-Jun mRNA及蛋白表达水平。经JNK抑制剂SP600125预处理A375细胞72 h后，再用100 nmol/L TP处理24 h，即SP600125 + 100 nmol/L TP组，观察TP对A375细胞中IRE1、JNK、c-Jun mRNA表达水平及细胞凋亡的影响。统计分析采用两因素方差分析、单因素方差分析及Dunnett- t检验。 结果:不同浓度TP作用不同时间，各浓度TP组A375细胞存活率均显著低于实验对照组（ FTP浓度 = 18.36， P = 0.002），且随时间延长，A375细胞存活率越低（ F时间 = 8.54， P = 0.018）。处理A375细胞24 h，50、100、200 nmol/L TP组及实验对照组细胞凋亡率分别为16.99% ± 0.33%、30.78% ± 0.40%、38.91% ± 0.51%、4.33% ± 0.02%，组间差异有统计学意义（ F = 5 234.97， P < 0.001），各TP组细胞凋亡率均显著高于实验对照组（均 P < 0.05），且凋亡率随TP浓度的增加而逐渐升高。50、100、200 nmol/L TP组IRE1、JNK和c-Jun mRNA表达水平均显著高于实验对照组（均 P < 0.05），且随着TP浓度的增加这些基因mRNA表达水平逐渐升高，TP处理组A375细胞中IRE1、JNK、c-Jun、p-JNK和p-c-Jun蛋白表达水平也显示出相同的趋势。经JNK抑制剂SP600125预处理72 h后，SP600125 + 100 nmol/L TP组细胞凋亡率（21.88% ± 0.55%）显著低于未经SP600125预处理的100 nmol/L TP组（ t = -22.51， P < 0.001），且IRE1、JNK和c-Jun mRNA的表达水平也显著降低（均 P < 0.05）。 结论:TP可能通过激活IRE1/JNK信号通路诱导人黑素瘤A375细胞凋亡。

目的:探讨雷公藤红素（CEL）对非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）小鼠模型自噬及内质网应激介导的凋亡的影响。方法:将18只雄性C57BL/6J小鼠随机分为正常对照组（NC， n=6）、高脂饮食组（HFD， n=6）和CEL组（HFD+CEL， n=6）。正常对照组给予普通饲料喂养，高脂饮食组和CEL组给予高脂饲料喂养12周。造模成功后，CEL组给予100 μg·kg -1·d -1的CEL溶液腹腔注射4周，NC组和HFD组给予等剂量的等渗盐水腹腔注射。4周干预结束后，检测小鼠血清丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）、甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）和低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）的含量。HE染色和油红O染色观察肝脏病理学形态改变及脂滴沉积，并根据NAFLD活动度积分（NAS）评分。蛋白质印迹法检测肝脏微管相关蛋白1轻链3（LC3）、P62、葡萄糖调节蛋白78（GRP78）、蛋白激酶R样内质网激酶（PERK）、磷酸化PERK（p-PERK）、激活转录因子4（ATF4）、C/EBP同源蛋白（CHOP）、剪切的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（cleaved caspase-3）、B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）及Bcl-2相关X蛋白（Bax）的表达水平。TUNEL染色观察肝细胞凋亡情况。组间比较采用单因素方差分析。 结果:CEL组小鼠血清ALT（68.71±8.57）U/L、AST（209.63±28.64）U/L、TG（0.97±0.14）mmol/L、TC（4.12±0.64）mmol/L、LDL-C（0.40±0.06）mmol/L水平均低于HFD组［（110.19±10.79）U/L、（399.72±73.47）U/L、（1.44±0.13）mmol/L、（5.65±0.54）mmol/L、（0.61±0.07）mmol/L］（ P＜0.05）；CEL组血清HDL-C（1.29±0.17）mmol/L水平高于HFD组的（0.72±0.13）mmol/L（ P＜0.05）。苏木精-伊红染色及油红O染色显示HFD组小鼠肝组织内出现脂质沉积及小叶内炎症，NAS评分明显增加，而CEL干预后肝细胞脂肪变及小叶内炎症缓解，NAS评分明显降低（ P＜0.05）。CEL组小鼠肝脏内微管相关蛋白1轻链3（LC3）II/I比率较HFD组显著增加，P62显著降低（ P＜0.05）；同时，CEL组GRP78、p-PERK/PERK、ATF4、CHOP表达水平较HFD组明显降低（ P＜0.05）；此外，CEL组cleaved caspase-3、Bax表达较HFD组明显降低，Bcl-2表达明显增加（ P＜0.05）。同时，CEL组肝细胞凋亡率较HFD组也明显降低（ P＜0.05）。 结论:CEL可有效减轻NAFLD小鼠肝脏的脂质沉积，保护肝细胞并延缓NAFLD的进展，其作用机制可能与诱导自噬、抑制内质网应激PERK/ATF4/CHOP通路及其介导的细胞凋亡有关。

雷公藤多苷片是雷公藤根茎提取物[1],其主要生物活性成分如雷公藤内酯醇、雷公藤内酯二醇、雷公藤内酯酮和生物碱具有多种信号通路活性.临床试验(NCT01613079)显示其在类风湿关节炎的治疗中具有显著的效果[2].由于雷公藤具有多种药理活性,它已被用作治疗类风湿关节炎、癌症、克罗恩病和获得性免疫缺陷综合征(AIDS).近年来,雷公藤多苷片已被用于肾脏疾病的治疗,并能显著降低蛋白尿和保护肾功能,在临床上显示出更多的应用潜力[3].然而,雷公藤多苷片存在诸多不良反应如胃肠不适、腹泻、生殖毒性、肾毒性、肝毒性、骨髓抑制与血液循环系统相关问题[4],尤其是肝损伤,使其在临床的应用受到一定的限制.

目的:观察雷公藤内酯酮对急性单核细胞白血病小鼠的抗肿瘤作用,并基于抗炎和调控肠道菌群探讨其作用机制.方法:BALB/c裸雌性小鼠20只,皮下注射急性单核细胞白血病细胞株(U937)建立白血病模型,根据肿瘤体积随机分为2组,每组8只.雷公藤内酯酮组按10 mg/kg剂量灌胃给药,对照组灌胃给予等体积生理盐水1次/d.连续给予2周后,处死小鼠收集样本.苏木精-伊红(HE)染色观察瘤体坏死情况,免疫组织化学(IHC)检测肿瘤组织中磷酸化核因子κB抑制蛋白(p-IκB)、磷酸化κB抑制因子激酶(p-IKK)、磷酸化核因子κB(p-NF-κB)蛋白表达情况,酶联免疫吸附试验法(ELISA)检测血清中炎症介质含量,16S核糖体核糖核酸(16S rRNA)测序法分析小鼠肠道菌群的变化.结果:与对照组比较,雷公藤内酯酮组小鼠肿瘤体积增长较慢,抑瘤率为43.5％;雷公藤内酯酮组小鼠肿瘤组织坏死较多;血清炎症介质肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)和C-反应蛋白(CRP)含量均明显降低(P＜0.05);肿瘤组织p-IKB、p-IKK和p-NF-KB的表达量显著降低(P＜0.05,);肠道菌群Alpha多样性指数显著升高(P＜0.01),Beta多样性显示2组小鼠的菌群结构组成差异较大;在门水平上,p__Tenericutes丰度明显升高(P＜0.05);p__Bacteroidetes、p__Firmicutes的丰度增加,p__Proteobacteria丰度减少.在属水平,雷公藤内酯酮上调有益菌g__Lachnospiraceae_NK4A136_group、g__Alloprevo-tella、g__Ruminiclostridium_9 等丰度,下调条件致病菌 g__Alistipes、g__Enterorhabdus 和 Ruminiclostridium_6 丰度.结论:雷公藤内酯酮具有一定的抗急性单核细胞白血病作用,其作用机制可能与抗炎、改善肠道菌群结构有关.

目的:探讨雷公藤内酯甲(Wilforlide A,WA)对肺癌细胞增殖和侵袭及巨噬细胞M2极化的影响.方法:(实验一):将肺癌细胞LLC按照WA处理浓度分为0、0.01、0.1、1和10μg/L组.WA孵育48h后,采用MTT法、Annexin V-FITC/PI染色法和Transwell法检测细胞增殖、凋亡和侵袭.采用Western blot检测Bcl-2、Bax、MMP-2和MMP-9蛋白表达水平.(实验二):将单核巨噬细胞RAW264.7按照WA处理浓度分为0、0.01、0.1、1和10 μg/L组.采用MTT法检测细胞增殖.然后再将RAW264.7细胞为Control组、IL-4组、WA组和IL-4+WA组.使用10 ng/mL的IL-4和1μg/L的WA培养细胞24 h.采用ELISA法检测细胞培养上清液中CD206、Arg-1和IL-10水平.(实验三):细胞分组如下:Blank组、RAW264.7组、IL-4 RAW264.7组、WA组和IL-4 RAW264.7+WA组.按照分组方案,将LLC细胞分别与RAW264.7细胞、IL-4诱导RAW264.7细胞以及10μg/L的WA共培养24h,然后检测细胞增殖、凋亡、侵袭及细胞培养上清液中的M2型巨噬细胞标志物水平.流式细胞仪检测CD86和CD206阳性百分比.结果:(实验一):与0 μg/L组比较,0.1、1和10μg/L组LLC细胞的相对细胞活力降低(P＜0.05),细胞凋亡率和Bax蛋白相对表达水平均升高(P＜0.05),侵袭细胞数量以及Bcl-2、MMP-2和MMP-9蛋白相对表达水平均降低(P＜0.05).(实验二):与0μg/L组比较,10 μg/L组RAW264.7细胞的相对细胞活力降低(P＜0.05).与Control组比较,IL-4组RAW264.7细胞的CD206、Arg-1 和 IL-10 水平升高(P＜0.05),WA 组 RAW264.7 细胞的 CD206、Arg-1 和 IL-10 水平降低(P＜0.05).与 IL-4 组比较,IL-4+WA组 RAW264.7 细胞的 CD206、Arg-1 和 IL-10 水平降低(P＜0.05).(实验三):与 Blank 组比较,RAW264.7 组和 IL-4 RAW264.7 组的相对细胞活力和侵袭细胞数量均升高(P＜0.05),细胞凋亡率降低(P＜0.05).与RAW264.7组比较,IL-4 RAW264.7组的相对细胞活力和侵袭细胞数量升高(P＜0.05),细胞凋亡率降低(P＜0.05),CD206、Arg-1和IL-10水平升高(P＜0.05),CD86百分比降低,CD206百分比升高(P＜0.05).与IL-4RAW264.7比较,IL-4RAW264.7+WA组的相对细胞活力和侵袭细胞数量降低(P＜0.05),细胞凋亡率升高(P＜0.05),CD206、Arg-1和IL-10水平降低(P＜0.05),CD86百分比升高,CD206百分比降低(P＜0.05).结论:本研究表明雷公藤内酯甲具有抗NSCLC作用,其机制与抑制巨噬细胞的M2型极化有关.

药品名称:错误(正确)二磷酸腺苷(腺苷二磷酸),消炎痛(吲哚美辛),阿斯匹林(阿司匹林),维甲酸(维A酸),双磷酸盐(双膦酸盐),甲氨喋呤(甲氨蝶呤),博莱霉素(博来霉素),开浦兰(左乙拉西坦),雷公多苷(雷公藤多苷),非那根(异丙嗪),四乙铵(四乙胺),洗必泰(氯已定),美息律(美西律),大环内脂类(大环内酯类),川穹(川芎),酒精(乙醇),头胞哌酮(头孢哌酮).

邹氏肾科于20世纪80年代开创了"从风论治肾病"的思路,提出难治性肾病综合征以风邪为首要外在发病之因,肾元不足为内在发病之本,补益肾元、祛风解毒为治疗大法.临证根据患者不同证型灵活选择祛风解表法、祛风渗湿法、祛风清热法、祛风活血法、祛风平肝法,并加入补益肾元药物生黄芪、山萸肉等.基于补益肾元、祛风解毒的治疗思路,邹氏肾科团队开发了雷公藤复方制剂肾炎合剂,后几经改良为南京中医药大学附属医院院内制剂肾炎灵颗粒/肾炎灵片,并开展了一系列临床和实验研究.研究证实,肾炎灵颗粒/肾炎灵片可明显改善难治性肾病综合征患者临床症状,对尿蛋白、血浆白蛋白、胆固醇、甘油三酯等指标具有显著调节作用,其作用机理可能与诱导肾系膜细胞凋亡、阻滞系膜细胞增殖以及改善脂质代谢、血流变和抗氧自由基等相关.

目的:研究雷公藤内酯醇(TPL)对皮质神经元缺氧/复氧(H/R)损伤的影响,并基于Toll样受体4/核因子-κB(TLR4/NF-κB)信号通路探讨其作用机制.方法:分离并体外培养SD大鼠乳鼠皮层神经元,通过缺氧4h复氧24h制备H/R损伤皮质神经元模型,设正常对照组、模型组、TPL(25mg/L)组、TPL(25mg/L)+TAK242(TLR4 抑制剂,1mg/L)组和 TPL(25mg/L)+LPS(TLR4 激动剂,0.1mg/L)组.各组分别给药干预24h后,采用MTT法检测神经元活力,流式细胞术检测神经元凋亡,ELISA法检测培养液中炎症因子(TNF-α、IL-1β、IL-6]含量,Western blot法检测神经元TLR4/NF-κB 信号通路相关蛋白[TLR4、NF-κB p65、p-NF-κB p65、B淋巴细胞瘤-2 基因(bcl-2)、bcl-2 相关 X 蛋白(Bax)、半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、激活型Caspase-3(cleaved Caspase-3)]表达.结果:与模型组比较,TPL组皮质神经元活力显著升高、凋亡率显著降低(P<0.05);培养液中TNF-α、IL-1β、IL-6 含量显著降低(P<0.05);TLR4 表达量及p-NF-κB p65/NF-κB p65、Bax/bcl-2、cleaved Caspase-3/Caspase-3 表达比值均显著降低(P<0.05).TAK242 可显著增强TPL对H/R损伤皮质神经元活力、凋亡、炎症因子含量、TLR4/NF-κB信号通路相关蛋白表达的调控作用;而 LPS 则显著逆转 TPL 对 H/R 损伤皮质神经元各检测指标的调控作用.结论:TPL可以通过抑制 TLR4/NF-κB 通路活化减轻炎症反应和神经元凋亡,进而对皮质神经元H/R损伤起到保护作用.

目的:探究雷公藤内酯醇(TP)通过miR-142-3p/HSP70 信号通路对人乳腺癌MCF-7细胞恶性生物学行为的影响.方法:常规培养MCF-7细胞,将其分为6组:对照组、TP组、miR-142-3p inhibitor组、TP+inhibitor组、miR-142-3p mimic组和TP+mimic组,用转染试剂将相应的核酸或质粒转染MCF-7细胞.qPCR法、EdU细胞增殖实验、Transwell小室实验、细胞划痕实验、WB法分别检测转染后各组MCF-7细胞中miR-142-3p和HSP70 mRNA的表达,MCF-7细胞的增殖、侵袭、迁移能力和HSP70蛋白表达水平.结果:TP或miR-142-3p过表达能显著促进MCF-7细胞中miR-142-3p和HSP70的表达,敲减miR-142-3p则可明显抑制MCF-7细胞中miR-142-3p和HSP70的表达,TP可逆转由敲减miR-142-3p对MCF-7细胞中miR-142-3p和HSP70表达的影响;TP、过表达miR-142-3p均可明显抑制MCF-7细胞的增殖、迁移和侵袭能力(均P<0.05),敲减miR-142-3p则均可促进MCF-7细胞的增殖、迁移和侵袭能力(均P<0.05),TP可逆转由敲减miR-142-3p对MCF-7细胞恶性生物学行为的影响(均P<0.05).结论:TP可通过调控miR-142-3p/HSP70信号通路,进而抑制MCF-7细胞的增殖、侵袭和迁移能力.