目的:研究风轮菜中的化学成分及生物活性.方法:运用硅胶、十八烷基硅烷键合硅胶(ODS)、Sephadex LH-20 柱色谱及半制备高效液相色谱等方法,对风轮菜地上部分 70%乙醇提取物的正丁醇萃取部位进行分离纯化.采用高分辨质谱、核磁共振波谱、紫外色谱、红外色谱、圆二色谱和计算圆二色谱对新化合物进行结构鉴定,核磁共振波谱和质谱鉴定已知化合物.采用棕榈酸(PA)诱导的HepG2 细胞损伤模型研究化合物 1、6 和 9 的细胞保护活性.结果:从风轮菜 70%乙醇提取物的正丁醇萃取部位中分离得到 9 个化合物,分别鉴定为(4S,9S)-9-羟基茉莉酮(1)、红花菜豆酸(2)、环-(S-脯氨酸-R-亮氨酸)(3)、芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯(4)、2-甲氧基-4-(2-丙烯基)-苯基-β-D-吡喃葡萄糖苷(5)、吐叶醇(6)、柚皮素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸(7)、对-薄荷-3,8-二烯-1,2-二醇(8)、黄麻香堇醇C(9).与模型组细胞存活率[(63.5±2.3)%]相比,化合物 9 低、中、高剂量组细胞存活率[(81.0±2.0)%、(83.4±1.8)%、(90.8±2.1)%]差异有统计学意义(P<0.001);化合物 6 高剂量组细胞存活率[(72.3±2.2)%]差异有统计学意义(P<0.05);化合物 1 未表现出明显活性.结论:化合物 1 为新化合物,化合物 2～3、5～6 和 8 系首次从风轮菜中分离得到.化合物 9 对PA诱导的HepG2 细胞损伤具有显著的细胞保护活性,且与剂量呈正相关.化合物 6 在高剂量有一定的细胞保护活性.

风轮菜属Clinopodium植物是唇形科Labiatae多年生草本植物,在全球分布范围较广,具有良好的药用价值前景.现代研究发现风轮菜属药用植物中含有黄酮及其苷类、三萜皂苷类、环烯醚萜苷、二萜苷类、游离三萜类、挥发油、苯丙素等多种化学成分,具有止血、抗菌、抗炎及免疫调节、降血糖、抗氧化、抗肿瘤等多种药理活性,临床上主要应用于治疗各种出血性疾病.该论文对风轮菜属药用植物的分类学、资源分布、化学成分、药理活性、临床应用等研究进展进行系统综述,为该属药用植物进一步的研究与开发提供参考及科学依据.

目的:研究风轮菜Clinopodium chinense地上部分的化学成分.方法:采用大孔树脂、正相硅胶、反相十八烷基硅烷(ODS)、Sephadex LH-20等柱色谱和制备型高效液相色谱(HPLC)法进行分离纯化,利用核磁共振(NMR)等波谱学方法对化合物进行结构鉴定.结果:从风轮菜中分离得到化合物1,该化合物为3β,16β,23,28-四羟基-11α-甲氧基-30-醛基-齐墩果-12(13)-烯-3-O-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)]-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)]-β-D-岩藻糖苷.结论:化合物1是1个新的齐墩果烷型的三萜皂苷,命名为风轮菜皂苷H(clinopodiside H).

目的 研究风轮菜总黄酮联合miR-702-5p抑制物对缺氧/复氧诱导的心肌细胞损伤的影响.方法 实验设置对照组(Con,不作任何处理)、缺氧/复氧组(H/R,缺氧6 h,复氧3 h),H/R+药物-1组、H/R+药物-2组、H/R+药物-3组(6.25μg/ml、12.5μg/ml、25μg/ml的风轮菜总黄酮+缺氧/复氧处理)、H/R+anti-miR-NC组(转染anti-miR-NC+缺氧/复氧处理)、H/R+anti-miR-702-5p组(转染anti-miR-702-5p+缺氧/复氧处理)、H/R+药物-3+anti-miR-NC组(转染anti-miR-NC+25μg/ml风轮菜总黄酮+缺氧/复氧处理)、H/R+药物-3+anti-miR-702-5p组(转染anti-miR-702-5p+25μg/ml风轮菜总黄酮+缺氧/复氧处理).蛋白质印迹(Western blot)法检测细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A(P21)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白表达;细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测细胞存活率;流式细胞术检测细胞凋亡;试剂盒检测丙二醛(MDA)含量及乳酸脱氢酶(LDH)、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)活性;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-702-5p表达水平.结果 缺氧/复氧诱导的心肌细胞中P21、Caspase-3表达水平升高,细胞存活率降低,细胞凋亡率升高,MDA含量升高,LDH活性升高,CAT、SOD活性降低.不同浓度风轮菜总黄酮处理后P21、Caspase-3表达水平降低,细胞存活率升高,细胞凋亡率降低,MDA含量降低,LDH活性降低,CAT、SOD活性升高.抑制miR-702-5p表达可抑制缺氧/复氧诱导的心肌细胞损伤.风轮菜总黄酮联合miR-702-5p抑制剂可显著提高细胞存活率,抑制细胞凋亡和氧化应激反应.结论 风轮菜总黄酮联合miR-702-5p抑制物可保护心肌细胞免受缺氧/复氧引起的损伤.

凹唇壁蜂Osmia excavata Alfken是我国早春果园重要的野生传粉昆虫,具有重要的农业价值.本研究分别在山东烟台、江西赣州和重庆沙坪坝地区利用人工放养滞育状态下的凹唇壁蜂成虫,并通过野外观察和室内解剖该蜂的筑巢巢管,系统研究了该蜂的筑巢习性、访花行为、日活动规律和生活史等营巢生物学及相关生物学特性.结果表明:凹唇壁蜂的雌蜂偏好选择长度平均为121.86±48.44 mm,内径平均为8.01±1.42 mm的巢管筑巢.经室内解剖,该蜂的巢管结构主要包括前庭、虫室、间室和空室共四个部分,平均长度分别为18.24±7.24 mm,12.84±2.72 mm,20.92±8.88 mm,11.64±5.39 mm.野外观察发现,该蜂在重庆沙坪坝地区1年发生1代,卵期3～4 d、幼虫期20～25 d、蛹期25～30 d,以滞育状态下的成虫在茧内越冬.翌年3月下旬成虫陆续破茧出巢,一般雄蜂较雌蜂早1～2d出巢,雌蜂出巢后即可完成访花、交配、筑巢和产卵等行为.该蜂收集巢内杂物时间平均为38.73±19.75 s,出巢处理杂物时间平均为10.58±6.05 s,出巢收集泥团时间平均为67.33±21.32 s,筑巢时间平均为58.08±18.90 s,采集花(粉)蜜时间平均为371.00±152.06 s,携粉回巢滞留的时间平均为104.39±37.58 s.该蜂采集(粉)蜜源植物主要有苹果Malus pumila Mill、梨Pyurs spp.、樱桃Cerasus pseudocerasus、风轮菜Clinopodium chinens、女贞Ligustrum lucidume和酢浆草Oxalis corniculata等.本研究通过野外观察和人工巢管技术对凹唇壁蜂雌蜂日常活动行为及筑巢规律等生物学特性的观察,旨在明确该蜂的营巢习性以期为后续该蜂的规模化利用提供基本依据.

本研究以风轮菜(Clinopodium chinense(Benth.)O.Kuntze)为材料,采用BGISEQ-500测序平台对风轮菜根、茎和叶的小RNA进行转录组测序,并对其黄酮类物质合成途径中参与调控的microRNA(miRNA)及其靶基因进行了分析.结果显示,鉴定出的保守miRNA有86个,属于26个家族,新发现miRNA 8个,筛选出风轮菜黄酮类物质合成途径中调控3个关键酶的候选miRNA(novel_mir3、miR167d-5p、miR396h).通过对靶基因编码的关键酶4-香豆酸辅酶A连接酶进行序列分析和同源建模,发现其具有高度保守的底物结合区域、催化结构域及两个保守的肽基序.

研究风轮菜总提取物(total extraction of Clinopodium chinense,TEC)、总皂苷(total saponin of C.chinense,TSC)及总黄酮(total flavonoids of C.chinense,TFC)对子宫异常出血(abnormal uterine bleeding,AUB)大鼠抗炎止血作用及其机制.取同1 d受孕SD雌鼠,灌胃米非司酮(12.4 mg·kg-1)联合米索前列醇(130 μg·kg-1),建立AUB大鼠模型.造模成功大鼠随机分为模型组、TEC组、TSC组、TFC组、益母颗粒(leonurus granules,LG)组和戊酸雌二醇(estradiol valerate,EV)组,每组8只;另取8只未受孕的雌鼠作为正常组.各组灌胃给予相应受试药物,每日1次,连续给药7 d.给药结束后取血、取材.比色法测定大鼠子宫出血量;HE染色法子宫内膜病理变化;免疫组化法测定子宫内膜微血管密度;ELISA法测定血浆中TXB2、6-keto-PGF1α、IL-6、TNF-α 含量、血清中 LH、FSH、E2及孕酮水平;Western blot 法测定子宫组织中 ERα、PR、MMP-2、MMP-9、VEGF 蛋白表达.与模型组相比,TEC、TSC、TFC均能明显减少子宫出血量,减轻子宫内膜病理损伤及升高子宫内膜组织中微血管密度;TEC、TSC可显著增加TXB2水平及TXB2/6-keto-PGF1α比值;TEC、TFC可显著降低IL-6和TNF-α水平;TEC可显著增加孕酮水平,TFC可显著增加E2、FSH和LH水平,TSC则可显著增加孕酮和FSH水平.此外,TEC可下调子宫组织中PR、MMP-2、VEGF蛋白表达,TSC可明显下调MMP-9蛋白表达,而TFC则可明显下调PR、MMP-9、VEGF蛋白表达,上调ERα蛋白表达.综上,TEC、TSC、TFC均可治疗大鼠功能性子宫出血,但TSC侧重于增加凝血功能和促进子宫内膜修复;TFC侧重于调节雌性激素水平和减轻炎症反应.总体而言,以TEC治疗作用最佳,该文从一定程度上揭示了风轮菜治疗AUB作用机制,也说明了中药药效作用整体性的特点.

目的:对风轮菜地上部分70％乙醇提取物的正丁醇萃取部位进行化学成分研究.方法:综合运用硅胶、十八烷基硅烷键合硅胶(ODS)、Sephadex LH-20柱色谱及半制备高效液相色谱等方法对风轮菜地上部分70％乙醇提取物的正丁醇萃取部位进行分离纯化,并利用理化性质和波谱学特征进行结构鉴定.结果:从风轮菜的正丁醇萃取物中分离得到11个化合物,分别鉴定为3β,16β,23,28-四羟基-齐墩果烷-11(12),13(18)-二烯-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷(1)、3β,16β,23,28-四羟基-齐墩果烷-11(12),13(18)-二烯-3-O-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)]-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)]-β-D-吡喃葡萄糖苷(2)、柴胡皂苷a(3)、异落叶松脂素(4)、梣树脂酚(5)、8-羟基-7′-表松脂醇(6)、三角叶凤毛菊木脂素A(7)、柳叶柴胡酚(8)、异秦皮啶(9)、4-羟基-3-甲氧基苯基-1-丙烷-1,2-二醇(10)和布卢竹柏醇A(11).结论:化合物1和2为新化合物,分别命名为风轮菜皂苷F和风轮菜皂苷G,化合物4～11为首次从风轮菜中分离得到.

目的 通过最大熵(MaxEnt)模型与地理信息系统预测风轮菜在全国范围内的适生区域,为其野生抚育及栽培提供依据.方法 借助MaxEnt模型对451条风轮菜位点信息与55个环境因子进行模拟运算,得到受试者工作特征曲线(ROC),根据曲线下面积(AUC)验证模型准确度,结合刀切图结果与贡献率大小筛选主导环境因子,最后通过ArcGIS软件加载模型运算结果,得到风轮菜在全国范围内的适宜分布区划图.结果 该模型准确度高(AUC=0.968),表明预测结果较为可信.风轮菜的主导环境因子有5个,即年均降水量、10月份降水量、6月份降水量、11月份平均温度及4月份降水量.风轮菜的适生区较广,高度适生区主要集中在我国华东、中南及西南地区.结论 本研究得到的风轮菜适生区与其实际分布情况基本一致,预测结果可为开展风轮菜的野生抚育及栽培提供参考.

风轮菜是治疗子宫异常出血(abnormal uterine bleeding,AUB)常见中药,皂苷类和黄酮类是风轮菜中主要药效活性成分,然而其主要成分的药代动力学行为尚不清晰.该文建立了一种风轮菜总提取物(total extraction of Clinopodium chinense,TEC)中5种成分在AUB大鼠血浆中药物浓度的测定方法并对该分析方法进行了方法学验证.随后,取同1 d受孕SD雌性大鼠,灌胃米非司酮(12.4 mg·kg-1)联合米索前列醇(130 μg·kg-1),建立AUB大鼠模型.灌胃给予AUB大鼠TEC后检测大鼠血浆中橙皮苷、柚皮素、芹菜素、柴胡皂苷a及断血流皂苷A的含量.采用DAS 2.0软件计算药动学参数.结果表明,在检测范围内5种化合物线性关系良好.该方法专属性、准确度、精密度、回收率、基质效应和稳定性均满足生物样品的测定要求.灌胃TEC后在AUB大鼠血浆中可检测到5种化合物,橙皮苷、柚皮素、芹菜素、柴胡皂苷a、断血流皂苷A的Cmax分别为701.6、429.5、860.7、75.1、304.1 ng·mL-1.各化合物在体内半衰期较短,消除速率快;表观分布容积提示待测化合物呈广泛组织分布.该方法快速、准确,灵敏,为风轮菜治疗AUB的药效物质基础研究提供了参考.