目的:分析马钱子总碱的有效成分,观察马钱子总碱治疗家兔膝关节软骨损伤的作用机制.方法:采用醇提取-有机溶剂萃取法制备马钱子总碱.通过高效液相色谱法(HPLC)和液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)技术分析马钱子总碱的有效成分.从36 只家兔中随机选取6 只作为假手术组,其余家兔建立膝关节软骨损伤模型.将造模成功的家兔随机分为模型组、马钱子总碱高剂量组(24 mg·kg-1)、中剂量组(12 mg·kg-1)、低剂量组(6mg·kg-1)及氟比洛芬组(37.5 mg·kg-1),每组 6只,每天给药1 次,连续2 周.采用高频X射线机观察膝关节形态,根据家兔运动情况进行疼痛评分.HE染色观察膝关节软骨的病理形态,ELISA法检测关节冲洗液中白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、前列腺素E2(prostaglandin E2,PGE2)含量.结果:马钱子总碱的有效成分包括马钱子碱、士的宁、伪马钱子碱、马钱子碱氮氧化物、士的宁氮氧化物、依卡精及番木鳖次碱等.与假手术组比较,模型组家兔的膝关节X线K-L评分升高(P<0.01);与模型组比较,马钱子总碱低剂量、高剂量组及氟比洛芬组家兔的膝关节X线K-L评分降低(P<0.01).与假手术组比较,模型组家兔的疼痛评分、膝关节软骨Pelletier评分升高(P<0.05);与模型组比较,马钱子总碱各个剂量组家兔的疼痛评分、膝关节软骨Pelletier评分降低(P<0.05).HE染色显示,模型组家兔膝关节滑膜细胞增生,软骨层破坏.马钱子总碱各个剂量组和氟比洛芬组家兔膝关节软骨组织未见明显滑膜或软骨下骨病变.与假手术组比较,模型组家兔关节冲洗液中TNF-α、PGE2、IL-6 含量升高(P<0.01);与模型组比较,马钱子总碱高剂量组家兔关节冲洗液中TNF-α、PGE2 含量降低(P<0.05).结论:马钱子总碱可能通过马钱子碱、士的宁等有效成分,调控膝关节炎症因子水平,从而发挥改善膝关节软骨损伤的作用.

目的:分析马钱子总生物碱对类风湿性关节炎(RA)大鼠的作用及对磷脂酰肌醇 3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶点(mTOR)通路的影响.方法:50 只Wistar大鼠随机分为对照组、RA组、RA+马钱子总生物碱组(100 mg·kg-1)、RA+PI3K抑制剂组(20 mg·mL-1 LY294002)、RA+马钱子总生物碱+PI3K激活剂组[100 mg·kg-1 马钱子总生物碱+20 μg·kg-1 胰岛素样生长因子 1(IGF-1)],除对照组外,其余各组均构建RA模型并根据剂量给药,计算每只大鼠关节评分,测定大鼠血清抗瓜氨酸化蛋白抗体(ACPA)、丙二醛(MDA)水平;苏木精-伊红(HE)染色观察评估大鼠膝关节滑膜组织病理,比较各组Mankin评分、炎细胞浸润数、软骨厚度;测定滑膜组织白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、核转录因子(NF)-κB受体活化因子配体(RANKL)水平;蛋白免疫印迹(Western blot)测定大鼠滑膜组织PI3K/Akt/mTOR通路相关蛋白表达.结果:1)对照组大鼠关节软骨组织结构正常,表面光滑完整,腔隙内组织有良好的完整软骨细胞;RA组关节表面广泛侵蚀,形态无规则,软骨细胞明显丢失,炎性细胞大量浸润,关节软骨厚度低,细胞间基质显著丢失,滑膜中单核炎性细胞浸润可见;RA+马钱子总生物碱组、RA+PI3K抑制剂组呈现保护性体征,关节表面侵蚀降低,炎性细胞浸润减轻,关节软骨厚度增加;与RA+马钱子总生物碱组相比,RA+马钱子总生物碱+PI3K激活剂组关节软骨损伤加重.2)与对照组相比,RA组大鼠关节炎症评分、血清ACPA及MDA水平、Mankin评分、炎细胞浸润数、滑膜组织IL-1β、IL-6、TNF-α、RANKL升高(P＜0.05),软骨厚度降低(P＜0.05);与RA组相比,RA+马钱子总生物碱组、RA+PI3K抑制剂组大鼠关节炎症评分、血清ACPA及MDA水平、Mankin评分、炎细胞浸润数、滑膜组织IL-1β、IL-6、TNF-α、RANKL降低(P＜0.05),软骨厚度升高(P＜0.05);与RA+马钱子总生物碱组相比,RA+马钱子总生物碱+PI3K激活剂组大鼠关节炎症评分、血清ACPA及MDA水平、Mankin评分、炎细胞浸润数、滑膜组织IL-1β、IL-6、TNF-α、RANKL升高(P＜0.05),软骨厚度降低(P＜0.05).3)与对照组相比,RA组大鼠滑膜组织磷酸化(p)-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR 升高(P＜0.05);与 RA 组相比,RA+马钱子总生物碱组、RA+PI3K抑制剂组大鼠滑膜组织p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR降低(P＜0.05);与RA+马钱子总生物碱组相比,RA+马钱子总生物碱+PI3K激活剂组大鼠滑膜组织p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR升高(P＜0.05).结论:马钱子总生物碱可能通过抑制PI3K/Akt/mTOR通路缓解RA大鼠炎症.

目的:在类风湿关节炎(RA)血瘀证大鼠模型建立的基础上,观察马钱子、苏木有效组分(马苏组分)配伍对模型大鼠的关节炎症和血管内皮损伤的影响.方法:通过对RA血瘀证大鼠一般情况检查,足趾肿胀度及Elisa检测等方法分析各项指标,评估马苏组分配伍对大鼠炎症和血管内皮的影响.结果:马苏组分配伍能较好的改善RA血瘀证大鼠的一般状态,显著降低其足趾肿胀度,抑制炎症反应,改善血管内皮的损伤;降低模型大鼠血清中TNF-α、IL-1α、VEGF、COX-2、IL-1β、IL-6、IL-17、IL-15、VCAM-1、ICAM-1炎症因子水平,较好的逆转膝关节软骨的病理损伤改变,延缓关节软骨的退化进程.结论:马苏组分配伍能够有效抑制RA血瘀证模型大鼠的炎症及血管内皮损伤,延缓膝关节软骨退变,起到保护关节软骨的作用.

目的 探讨马钱子致大鼠肾损伤的作用部位,并对具有肾毒性作用部位的主要指标成分进行提取分离和含量测定.方法 以关木通为阳性对照,观察马钱子总生物碱、非生物碱单次给药对大鼠肾脏作用的组织病理切片,以明确肾毒性作用部位;采用高效液相色谱(HPLC)法对总生物碱中分离得到的化合物进行含量测定.结果 马钱子总生物碱组中可见大鼠肾小管上皮浊肿、肾小球肿大水肿,非生物组无损伤.结论 马钱子总生物碱是马钱子致大鼠肾损伤的作用部位;马钱子总生物碱中士的宁、马钱子碱、4-羟基依卡精和奴弗新的质量分数分别为33.1％、25.9％、2.9％和2.0％.

目的:优选马钱子总生物碱微囊的制备工艺,对马钱子总生物碱微囊的质量及毒性进行评价初步研究.方法:以壳聚糖、明胶为囊材,采用复乳化-交联法制备马钱子总生物碱微囊,通过星点设计-响应面法优选其制备工艺,并对微囊的载药量、包封率、产率、表征、粒径分布等质量评价指标进行考察.通过急性毒性试验考察马钱子总生物碱微囊的LD50值.结果:马钱子总生物碱微囊最佳工艺处方为壳聚糖质量浓度为1.5％,明胶质量浓度为11％,囊芯囊材质量比为1:1,戊二醛用量为2mL.载药量为17.84％、包封率为70.31％、产率为91.66％.外观呈圆球形、表面较为光滑、未出现粘连现象,粒径分布较集中,平均粒径为112.47μm.马钱子总生物碱微囊LD50为236.59mg/kg,是马钱子总生物碱的2.23倍.结论:以最佳工艺处方制备马钱子总生物碱微囊工艺合理、稳定,综合质量评价结果表明该微囊质量较好,同时急性毒性试验表明,微囊的LD50较原总生物碱有一定程度的提高,安全性进一步提高,推测可能与缓释过程有关.

目的:采用星点设计-效应面法优化马钱子碱-士的宁双载药脂质体制备工艺.方法:采用乳化溶剂蒸发法制备脂质体,用高效液相法(HPLC)测定药物的含量,以总包封率及总载药量为指标.结果:单硬脂酸甘油酯与大豆卵磷脂比例为2:3,单硬脂酸甘油酯用量选择60 mg,B: S选择2.62,F-68用量0.31％.在此优化条件下,制备的脂质体平均粒径为105 nm,平均总包封率为(48.57 ± 1.21)％,平均总载药量(1.02 ±0.32)％.结论:该工艺方法简便、稳定可行,适用于马钱子碱-士的宁纳米粒的制备.

目的 研究马钱子碱(BRU)与士的宁(STR)单体、马钱子总生物碱和马钱子提取物中活性成分BRU与STR在大鼠肝微粒体中的酶促反应动力学,考察BRU与STR单体、马钱子总生物碱和提取物中的BRU与STR在大鼠肝微粒体中的代谢差异.方法 采用LC-MS/MS法测定BRU和STR单体、总生物碱和提取物种BRU和STR在体外代谢系统中的含量变化,并计算其酶促反应动力学参数.结果 与BRU与STR单体组相比,马钱子总生物碱和提取物中2种单体成分的最大反应速度(Vmax)和米氏常数(Km)值均显著降低;与马钱子总碱组相比,马钱子提取物中2种单体成分的Vmax和Km值均显著升高.马钱子总生物碱组、单体成分组和马钱子提取物组中BRU的清除率(CLint)之间无明显差异;而三者中STR的CLint依次减少.结论 马钱子总碱、马钱子提取物中的BRU和STR及BRU与STR单体均可被肝微粒体代谢,且各组中BRU和STR的代谢动力学参数具有明显差异.

目的:观察接骨丸中不同剂量士的宁和马钱子碱对大鼠肝肾功能的影响.方法:40只健康大鼠,随机选择10只作为空白对照组;其余30只作为实验组,分为接骨丸低剂量组、接骨丸高剂量组和接骨丸生马钱子组,每组各10只.实验组大鼠给予不同剂量接骨丸灌胃,空白对照组给予等量蒸馏水灌胃.12周后,检测血常规:红细胞(red blood cell count,RBC)、白细胞(white blood cell,WBC)、血红蛋白(hemoglobin,HB)、血小板(platelets,PLT)、中性粒细胞百分比、淋巴细胞百分比、凝血时间(clotting time,CT),血液生化指标:谷丙转氨酶(alanine transaminas,ALT)、谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)、碱性磷酯酶(alkaline phosphatase,ALP)、血糖(glucosuria,GLU)、三酰甘油(triacylglycerol,TG)、尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、肌酐(creatinine,Cr)、总胆红素(total bilirubin,T-BIL)、白蛋白(albumin,ALB).停药2周后取各脏器测定脏器系数.结果:各组大鼠PLT、RBC、WBC和CT比较,差异均无统计学意义(P＞0.05);与接骨丸低剂量组比较,接骨丸高剂量组和接骨丸生马钱子组血红蛋白、中性细胞粒百分比显著下降(P＜0.05);与接骨丸低剂量组比较,接骨丸高剂量组和接骨丸生马钱子组,淋巴细胞百分比显著上升(P＜0.05);接骨丸高剂量组、接骨丸生马钱子组超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、丙二醛(malonaldehyde,MDA)和肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-α,TNF-α)与空白对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05);各组AST、ALP、GLU、T-BIL、BUN、Cr、TG和ALB比较,差异均无统计学意义(P＞0.05);接骨丸高剂量组和接骨丸生马钱子组ALT水平明显提高(P＜0.05);各组大鼠心脏、脾脏、肺脏、大脑脏器系数比较,差异无统计学意义(P＞0.05);与空白对照组比较,接骨丸高剂量组和接骨丸生马钱子组肝脏、肾脏系数明显升高(P ＜0.05).结论:标准质量生产的接骨丸中士的宁和马钱子碱剂量的不同对大鼠肝肾功能影响不同,当剂量大于0.4 g·kg-1后,对大鼠肝肾功能损伤较大.

马钱子为马钱科植物马钱Strych-nos nux-vomica L的干燥成熟种子[1].味苦,性温,有大毒,归肝、脾经,具有通络止痛、散结消肿功效,在我国马钱子具有悠久的药用历史,临床上主要用于跌打损伤、风湿顽痹、麻木瘫痪、痈疽疮毒、咽喉肿痛[2].现代药理研究表明马钱子对中枢系统、心血管系统、免疫系统均有较强的药理作用.其主要有效成分为总生物碱,士的宁和马钱子碱占总生物碱的70％～80％[3].

目的 探讨马钱子总碱对兔膝骨Hulth-Telhag关节炎模型的作用及机制.方法 新西兰兔随机分为正常对照组,模型组,假手术组,马钱子总碱高、中、低剂量组,玻璃酸钠组,每组8只.除正常对照组外,其余各组均以Hulth-Telhag方法造模.造模8周后,马钱子总碱高、中、低剂量组分别给予兔每个膝关节腔注射0.3、0.2、0.1mL马钱子总碱注射液,玻璃酸钠组给予兔每个膝关节腔注射0.2mL玻璃酸钠,每周2次,连续用药5周.正常对照组、模型组及假手术组常规饲养,无其他特殊处理.停药1周后光镜观察关节软骨病理改变和Mankin′s评分,血液流变仪检测全血黏度(低切、中切、高切)及血浆黏度,ELISA检测关节液NO、SOD、过氧化脂质(LPO)及尿液吡啶酚(PYD)含量.结果 与正常对照组比较,模型组Mankin′s评分、全血黏度、血浆黏度、NO、LPO及PYD升高(P＜0.05),SOD降低(P＜0.05).与模型组比较,马钱子总碱高、中剂量组及玻璃酸钠组Mankin′s评分降低(P＜0.05);各给药组全血黏度、血浆黏度、NO、LPO及PYD降低(P＜0.05),SOD升高(P＜0.05).马钱子总碱中剂量组较低剂量组中、高切变率全血黏度、SOD升高(P＜0.05),NO、LPO及PYD降低(P＜0.05);马钱子总碱高剂量组较中剂量组全血黏度、血浆黏度升高(P＜0.05),NO、LPO及PYD降低(P＜0.05),SOD升高(P＜0.05).与玻璃酸钠组比较,马钱子总碱低剂量组Mankin′s评分、NO、LPO及PYD升高(P＜0.05),SOD降低(P＜0.05);马钱子总碱中剂量组Mankin′s评分、SOD降低(P＜0.05),NO、LPO及PYD升高(P＜0.05);马钱子总碱高剂量组Mankin′s评分、全血黏度及血浆黏度升高(P＜0.05).结论马钱子总碱对骨关节炎的软骨损伤具有修复作用,其机制主要与通过SOD途径抑制NO介导的软骨细胞凋亡有关,还与改善软骨代谢有关.