目的:构建马面鱼鱼皮脱细胞基质,并通过交联和构建仿生矿化模板对其进行改性,为马面鱼鱼皮作为骨再生(guided bone regeneration,GBR)膜开发提供理论依据.方法:选取了海洋来源的马面鱼鱼皮,采用物理化学联合法制备马面鱼鱼皮脱细胞基质(filefish skin decellularized matrix,FS-ECM),通过苏木精-伊红染色法(hema-toxylin-eosin staining,HE)、扫描电子显微镜(scanning electron microscope,SEM)、X 射线衍射(X-ray diffraction,XRD)和水接触角初步探讨了 FS-ECM的结构特征;同时,一方面利用表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin gallate,EGCG)交联修饰 EGCG 交联改性马面鱼鱼皮脱细胞基质(EGCG crosslinked filefish skin decellularized ma-trix,E-FS-ECM)以提高材料的抗酶解和机械性能,另一方面通过EGCG的修饰构建EGCG-胶原体外仿生矿化模板 EGCG 交联仿生矿化改性马面鱼鱼皮脱细胞基质(EGCG crosslinked biomimetic mineralized filefish skin decel-lularized matrix,EB-FS-ECM),利用胶原仿生矿化策略进一步提高各项性能,采用SEM、mapping、水接触角、弹性模量、热重分析和体外降解评价改性前后材料的理化性能的差异.结果:不同部位FS-ECM的表面结构特性之间无明显差异(P＞0.05),且FS-ECM外表面含有一定量的羟基磷灰石晶体;经过EGCG交联和构建仿生矿化模版的改性,E-FS-ECM、EB-FS-ECM的亲水性、机械强度、热稳定性和抗酶解能力均明显高于FS-ECM(P＜0.05).结论:EGCG交联和仿生矿化能够明显地提高FS-ECM的亲水性、热稳定性、机械强度并减慢了降解速率,通过改性后的马面鱼鱼皮脱细胞基质有望成为理想的引导骨再生技术(guided bone regeneration,GBR)膜材料.

外泌弹性蛋白酶是桔黄赛多孢霉(Scedosporium aurantiacum)主要毒性蛋白酶之一,本文在前期研究的基础上,对这种蛋白酶的序列、结构和酶学特性进行了研究.首先通过柱层析技术将 S.aurantiacum 培养上清液中的蛋白进行了分离,然后通过酶谱电泳纯化得到了弹性蛋白酶条带.从凝胶中提取了弹性蛋白酶,通过质谱技术对其序列进行了检测,并对其反应特性、活力和反应动力学参数进行了研究.结果显示,S.aurantiacum外泌弹性蛋白酶对弹性蛋白和牛跟腱胶原蛋白(bovine achilles tendon collagen,BATC)具有较好的水解性能,对鱼皮胶原蛋白(fish skin collagen,FSC)的水解效率高于对鱼鳞明胶的水解效率,对酪蛋白的水解性最差.作用于弹性蛋白时,其催化效率小于猪胰腺弹性蛋白酶.Zn2+对酶活力有提升作用,而 Ca2+、Mg2+、Na+、(2S)-2-[(4S)-2-氨基-1,4,5,6-四羟基 4-嘧啶基]-N-[[[(1S)-1-羰基-3-甲基丁基]氨基]羰基]甘氨酰-N1-[(1S)-1-甲基-2-氧乙基]-L-谷氨酸甲酰胺(elastatinal)和苯甲基磺酰氟(phenylmethanesulfonyl fluoride,PMSF)均对酶活有抑制作用.该蛋白酶和青霉(Paecilomyces lilacinus)外泌丝氨酸蛋白酶(PDB Entry:c3f7oB_)的序列最相似,且有多段保守序列的氨基酸个数多于 7 个,可以作为PCR反应引物设计的模板.酶学特性实验表明,S.aurantiacum外泌弹性蛋白酶对肺组织中的弹性蛋白具有降解作用,其蛋白表达和毒性机制需要进一步的研究.

对水产加工过程中的鱼皮废弃物进行深加工处理,对其高附加值利用可以变废为宝,减少环境污染;鱼皮来源生物活性肽具有抗氧化、抗高血压、抗菌等功效.对鱼皮废弃物中生物活性肽的提取、分离鉴定方法及其功能活性进行深入探讨,可为食品、保健品、化妆品、医药品和化工产品等相关产品的开发提供理论基础.本文综述了酶法、化学法及发酵法提取鱼皮来源生物活性肽的优缺点,酶法相对于化学法应用广泛,获得的生物活性肽活性高,发酵法成本低,适用于批量生产.归纳总结了超滤、纳滤、凝胶过滤、离子交换和高效液相色谱及质谱联用等鱼皮生物活性肽的分离纯化和鉴定方法,多种分离、鉴定方法相结合来获取具有特定功能活性的鱼皮生物活性肽是首选,但获得高纯度及高活性的目标产物仍是当前亟待突破的难点.此外,分析了鱼皮生物活性肽在抗氧化性、血管紧张素转换酶(angiotensin converting enzyme,ACE)抑制活性、抗菌性及其他生物活性的研究现状,归纳了功能活性与肽的分子量大小、肽序列结构及位置的构效关系.最后展望了生物活性肽在功能活性研发方面的不足之处及进一步研究的方向,以期可为鱼类加工业打造高值化利用功能性产品提供参考.

病例 男,11岁.主因“皮疹半年余,间断发热及双下肢无力1月余,咳嗽憋气2d”入院.查体:发热,体温波动于37.6℃～38.2℃,咳嗽,憋气.眼睑、鼻梁紫红色皮疹,双侧掌指、指间关节、肩关节、肘关节背侧鳄鱼皮样红色丘疹伴脱屑.四肢近端肌力稍减低.辅助检查:肌电图示肌源性损害;血常规WBC 14.1×109/L↑,CK 235 U/L ↑,ALT 207 U/L ↑,AST 84U/L↑,LDH 492 U/L↑.肌肉活检病理示肌间少量淋巴细胞浸润.抗核抗体,抗Jo-1抗体阴性.下肢MRI:双大腿、双臀部诸肌群及肌间隔、皮下脂肪层内广泛长T2信号影(图1a～1d).

目的 探索并优化适合于斑马鱼咸鱼内脏组织的病理学检查技术.方法 将斑马鱼整条固定于Dietrich's固定液后,分段切开,取包含内脏组织的胸腹段,剥除斑马鱼鱼皮,梯度乙醇脱水时间优选为30 min、二甲苯透明、石蜡包埋、沿斑马鱼体轴纵向连续切片、HE染色后用温水冲洗切片进行颜色反蓝,正置显微镜下观察效果.结果 经过反复的条件摸索和优化,光学显微镜下观察心脏、肝脏、脾脏、胆囊、肾脏、胰腺、消化道、精巢和卵巢等组织切片和染色的效果,可见斑马鱼组织均切片完整,无折叠或断裂,各脏器的解剖学与组织细胞学结构清晰,易于辨认,细胞核与细胞质染色分明.结论 优化后的斑马鱼咸鱼内脏组织病理学方法效果较为理想,可获得高质量的内脏组织学标本.

目的:对一种新型聚乳酸-羟基乙酸(polylactic acid-glycolic acid,PLGA)/鱼皮胶原共轭静电纺丝膜的生物相容性进行分析.方法:以PLGA和医用级鱼皮Ⅰ型胶原为原材料,通过共轭静电纺丝技术制备出高取向性的纳米纤维膜,然后分别以小鼠成纤维细胞L929为研究模型,初步评价其细胞、组织相容性,为其用于种植骨组织再生(guided boneregeneration,GBR)提供实验依据.结果:纤维细胞在纤维膜表面黏附生长良好,有大量细胞伸出伪足,沿着纤维的取向进行铺展排列.结论:PLGA/鱼皮胶原共轭静电纺丝膜有利于成纤维细胞生长,可望用于种植骨组织再生.

大黄鱼、小黄鱼、舟山带鱼和曼氏无针乌贼为舟山传统“四大经济海产”,营养丰富,本研究对舟山常见7种海产品分部位进行营养分析,为高值化精深加工和综合利用提供理论和实验依据.1材料与方法1.1材料样品来自舟山海域,各取10尾.取上述样品的肌肉100g、鱼皮和鱼鳔绞碎分装并置-20℃冰箱保存备用.1.2方法1.2.1一般营养成分:水分:GB 5009.3-2016常压干燥;灰分:GB5009.4-2016高温灼烧;粗蛋白:GB 5009.5-2016凯氏定氮;粗脂肪:GB5009.6-2016索氏抽提.

目的 探讨新生儿期结节性硬化症的临床特点.方法 2006年9月至2015年9月于首都医科大学附属北京儿童医院住院确诊结节性硬化症患儿134例,其中8例新生儿期即出现临床症状,分析此8例患儿新生儿期临床表现(皮肤损害、神经系统异常等)、辅助检查(皮肤活检、心脏彩超、头颅影像学)及随访结果.结果 本组8例中4例在新生儿期确诊结节性硬化症,4例未确诊,分别于 4个月~14岁确诊本病.本组8例患儿在新生儿期6例(75%)存在皮肤改变,皮肤病变以色素脱失斑为主(5例),其次为血管纤维瘤(2例)、鲨鱼皮样斑点(1例).新生儿期心脏病变表现为心脏横纹肌瘤4例(50%),发生率较高,且多发、分布广.心脏超声表现为团块样中强-强回声,质地均匀,边界清晰,1例对三尖瓣血流略有影响.1例心电图异常,为房性期前收缩伴室内差异性传导,加速性房性逸搏.中枢神经系统可表现为惊厥发作,头颅影像学病变表现为室管膜下结节(3例)、脑白质病变(2例)、巨细胞星形细胞瘤(1例).1例发现TSC2基因阳性,为杂合突变,核酸突变位点为c.268C>T(E4),氨基酸突变为p.90Q>X,为无义突变,可能导致蛋白翻译提前终止.结论 新生儿期结节性硬化症临床表现累及多系统,以皮肤、心脏、中枢神经系统多见,应注意新生儿查体,对疑似患儿进行头颅CT/磁共振成像、心脏超声筛查,并结合基因学诊断,可帮助新生儿科医师早期诊断本病.

目的:探究五种交联条件下的巴沙鱼皮脱细胞真皮基质的生物安全性及相容性,为鱼源脱细胞鱼皮基质研制提供实验依据.方法:巴沙鱼皮为原料,通过一系列方法制备5种低免疫原性的巴沙鱼皮脱细胞基质.据国标制备不同浓度浸提液进行体外毒性实验.依据CCK-8检测初步筛选出不同浓度浸提液(10g/L、100g/L)中符合国际标准(100g/L)的材料;再将筛选出来的材料进行扫描电镜观察材料结构,HE和Masson观察材料是否完全脱细胞;通过血液相容性、Live/Dead、Tunel、Annexin V等方法进行细胞相容性及体外毒性研究.结果:CCK-8得出10g/L浓度下,120℃交联和未交联巴沙鱼材料细胞活性＞70％,其余三种材料细胞活性均＜70％;100g/L浓度下,筛选出来的两种材料高温120℃交联和未交联巴沙鱼脱细胞真皮基质材料细胞活性均＞70％.扫描电镜观察得样品呈双层膜结构,一侧疏松多孔,一侧致密光滑.HE染色观察到粉红色条状分布的胶原纤维色,Masson结果与HE染色相一致.溶血率＜5％,凋亡实验中120°交联及未交联巴沙鱼材料、空白组细胞死亡率分别为4.73％,15.21％,0.89％;细胞凋亡率为4.17％,2.83％,2.54％.结论:实验表明,本研究中只有120°高温交联和未交联巴沙鱼脱细胞基质对细胞无毒性,材料安全性能高,具有良好的组织相容性,相对促进细胞生长,其中未交联巴沙鱼材料还需改进,高温120°交联巴沙鱼脱细胞真皮基质材料为最佳材料.为开展水生生物脱细胞真皮基质的研究提供理论基础以及技术指导.