目的:探讨黄蜀葵花总黄酮（TFA）对肾小管葡萄糖重吸收的影响。方法:24只C57BL/6小鼠按照随机数字表法分成3组：对照组、高脂喂养组（HFD）组及HFD+TFA组，每组8只。体外采用人近端小管上皮HK2细胞，棕榈酸（PA）处理模拟脂毒，并予TFA干预，分别为对照组、PA组及PA+TFA组。油红O染色评估肾皮质组织及胞内脂质含量，免疫荧光染色、实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）及Western blotting检测钠-葡萄糖共转运蛋白2（SGLT2）表达，并评估各组细胞葡萄糖摄取能力。组间比较采用单因素方差分析。结果:HFD组小鼠肾小管中脂质沉积明显，而对照组小鼠肾小管中未观察到脂滴。与HFD组相比，HFD+TFA组小鼠肾小管中红染脂滴明显减少（ P<0.001）。免疫荧光结果显示，3组小鼠肾小管均表达SGLT2，HFD组及HFD+TFA组小鼠SGLT2蛋白表达水平高于对照组（ P<0.05）。然而，HFD+TFA组SGLT2蛋白表达水平较HFD组小鼠明显减弱（ P=0.049）。qRT-PCR结果显示，HFD组小鼠 SGLT2 mRNA表达水平明显高于对照组（ P<0.001），而TFA干预后 SGLT2 mRNA表达水平减弱。细胞实验观察到，TFA可显著减轻PA对细胞的毒性，缓解胞内脂质沉积，减弱SGLT2表达，并抑制细胞葡萄糖摄取能力（ P<0.05）。 结论:TFA减轻肾小管脂质沉积，改善葡萄糖重吸收功能，其肾脏保护效应可能与介导SGLT2调控肾小管葡萄糖重吸收有关。

目的:探讨黄蜀葵花总黄酮(TFA)对棕榈酸(PA)诱导HepG-2细胞脂质沉积模型的干预效应及机制.方法:体外培养人肝源HepG-2细胞,应用PA处理以构建细胞脂质沉积模型,然后从黄蜀葵花中提取TFA,以TFA或蛋白激酶B(AKT)抑制剂作为干预剂,对PA诱导的细胞脂质沉积模型进行预处理,应用油红O染色、酶联免疫吸附实验和免疫印迹实验(Western blotting)检测细胞脂质代谢、AKT1和脂联素(APN)信号通路蛋白表达水平.结果:与PA模型组比较,TFA或AKT抑制剂干预后,细胞脂质沉积程度(％)、游离脂肪酸(FFAs)和甘油三酯(TG)水平降低,而APN水平升高(P＜0.05).Western blotting实验显示PA模型组AKT1和固醇调节元件结合蛋白1(SREBP-1)表达水平上调而APN和糖原合成酶激酶3β(GSK3β)水平下调(P＜0.05).与PA模型组比较,TFA或AKT抑制剂干预显示AKT1下调而APN水平上调,其下游信号GSK3β表达上调而SREBP-1表达下调(P＜0.05).结论:TFA拮抗PA诱导的HepG-2细胞脂质沉积可能与其介导AKT1抑制及APN信号通路激活有关.

研究表明,高血糖介导的"慢性微炎症"可以导致糖尿病肾脏疾病(diabetic kidney disease,DKD)患者出现"炎症性足细胞损伤".其中,"坏死性凋亡"是新的足细胞死亡形式,与肾脏纤维化密切相关.为了探究传统治肾中药黄蜀葵花的提取物——黄蜀葵花总黄酮(total flavones of Abelmoschus manihot,TFA)在体内改善DKD足细胞坏死性凋亡和肾脏纤维化的作用和机制,并进一步揭示其"多途径、多靶点"的科学内涵,笔者将全部大鼠随机分为4组,即正常组、模型组、TFA组以及雷帕霉素(rapamycin,RAP)组.在改良型DKD大鼠模型成功建立后,每天经灌胃分别给予4组大鼠双蒸水、TFA混悬液以及RAP混悬液.在药物干预的第4周末,处死全部大鼠,收集尿液、血液以及肾组织等标本,进而针对模型鼠足细胞坏死性凋亡和肾脏纤维化各项指标进行观察、检测和分析.结果显示,对于改良型DKD模型鼠,TFA和RAP改善了一般情况、体质量、血清肌酐、尿白蛋白以及肾脏肥大指数;改善了肾脏纤维化指标,包括肾小球组织形态特征、肾小球内纤维连接蛋白(fibronectin,FN)、Ⅰ型胶原(collagen type Ⅰ,collagen Ⅰ)染色程度以及肾组织FN、collagen Ⅰ、转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)和Smad2/3蛋白表达水平;改善了足细胞损伤,包括足突形态以及肾组织中podocin、CD2AP蛋白表达水平;改善了肾脏中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)介导的足细胞坏死性凋亡,包括足细胞坏死性凋亡形态特征以及肾组织中TNF-α、磷酸化底物混合谱系激酶样蛋白(phosphorylated mixed lineage kinase domain like pseudokinase,p-MLKL)表达程度和蛋白表达水平,其中,对于p-MLKL,RAP的作用更强;改善了肾脏中受体相互作用蛋白激酶(receptor interacting serine/threonine protein kinase,RIPK)1/RIPK3/MLKL信号轴活性,包括其关键信号分子蛋白表达水平,如磷酸化受体相互作用蛋白激酶(phosphorylated receptor interacting serine/threonine protein kinase,p-RIPK)1、p-RIPK3、p-MLKL和半胱氨酸蛋白水解酶-8(cysteinyl aspartate specific proteinase-8,caspase-8),其中,对于p-RIPK1,TFA的作用更强.总之,该研究阐明:TFA通过抑制TNF-α介导的RIPK1/RIPK3/MLKL信号轴活性而减轻DKD足细胞坏死性凋亡和肾脏纤维化.笔者的发现为深入揭示TFA治疗DKD肾脏纤维化的科学内涵提供了新的药理学证据.

目的 研究黄蜀葵花总黄酮(TFA)联合格列吡嗪对GK糖尿病肾病(DN)模型大鼠有无辅助治疗作用.方法 采用GK大鼠饲喂高脂高蛋白饲料制备DN模型,以糖化血红蛋白、血脂和内皮素水平;血液流变学和肾功能指标;肾脏系数以及肾脏病理组织学为考察指标,全面评价应用格列吡嗪的同时给予TFA对DN模型大鼠的辅助治疗作用.结果 与格列吡嗪组比较,应用格列吡嗪同时给予TFA(50、100 mg· kg-1,ig)可明显降低DN模型大鼠血浆中血脂、内皮素、BUN、CR和尿微量白蛋白水平以及血黏度,可减小肾脏系数,减轻肾脏病理组织学病变.结论 应用降糖药同时给予TFA对DN模型大鼠的肾脏具有明显的保护作用.

目的 研究了黄蜀葵花总黄酮含量测定的最佳方法.方法 对以金丝桃苷为对照品的两种测定方法的结果进行分析比较.结果 以金丝桃苷为对照,甲醇回流提取黄蜀葵花总黄酮,紫外分光光度法直接测定,方法简便准确.结论 该方法可作为黄蜀葵花药材及其制剂的黄蜀葵花总黄酮含量测定方法.

胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)及其信号调控途径紊乱是很多胰岛素靶器官或组织发生病变并缓慢进展的机制之一.其临床诊断指标是基于空腹血糖和空腹血清胰岛素的“稳态模型评估胰岛素抵抗(the homeostatic model of insulin resistance,HOMA-IR)”指数,此外,包括脂联素在内的新兴IR生物标记物也可作为诊断的参考指标;其影响因素有肥胖、慢性微炎症、缺乏运动等;其主要信号调控途径包括胰岛素受体底物1 (insulin receptor substrate 1,IRS1)/磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol-3-kinase,PI3K)/丝氨酸-苏氨酸激酶(serine-threonine kinase,Akt)通路、丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)通路、Smad3通路等.临床上,可通过促进胰岛素分泌、增强胰岛素信号活性来提高胰岛素敏感性,改善IR.目前,用以治疗IR的胰岛素增敏剂不仅有噻唑烷二酮及其衍生物,还有新近发现的二甲双胍和维生素D.此外,一些单味中药提取物和中药复方,如黄蜀葵花总黄酮、黄连素、黄芪多糖以及黄芪汤等也有改善IR的作用.在慢性肾脏病领域,针对胰岛素靶器官的常见病变——糖尿病早期肾损害,基于足细胞IR信号调控途径的中药干预性研究是今后的重要方向之一.

目的 建立黄蜀葵花总黄酮提取物中总鞣质的含量测定方法.方法 以没食子酸为对照品,福林酚为显色剂,检测波长为752 nm.结果 没食子酸在9.76×10-4～9.76×10-3 mg/ml浓度范围内线性关系良好(r=0.9996);平均回收率为90.72％;3批黄蜀葵花总黄酮提取物鞣质含量分别为13.03％,14.37％,12.58％.结论 本方法简单、灵敏、稳定,为黄蜀葵花总黄酮提取物的质量控制提供了有效方法.

目的:建立同时测定黄蜀葵花总黄酮提取物中9种有机溶剂残留量的方法.方法:采用顶空气相色谱法测定黄蜀葵花总黄酮提取物中苯、丙烯腈、甲基丙烯酸甲酯、甲苯、1,2-二氯乙烷、二甲苯、氯苯、苯乙烯、二乙烯苯等9种残留溶剂的含量.色谱柱为Agilent DB-WAX毛细管柱(30 m×0.25 mm,0.25μm),程序升温;氢焰离子化检测器温度为250℃,进样口温度为250℃;载气为氮气,流速为1.2 mL/min,分流比为10:1;顶空进样量为1 mL,顶空平衡温度为90℃,平衡时间为45 min.结果:9种待测成分色谱峰之间的分离度均大于1.5,空白溶剂(10％N-甲基吡咯烷酮水溶液)无干扰;其检测质量浓度的线性范围分别为0.16～1.21、0.80～6.03、1.61～12.09、1.62～12.12、0.16～1.21、1.60～12.01、0.81～6.11、1.60～12.03、0.80～6.03μg/mL(r≥0.9994);定量限分别为0.16208、0.20108、0.0806、0.080768、0.16192、0.40036、0.040712、0.026736、0.013395μg/mL,检测限分别为0.04052、0.040216、0.02687、0.0269、0.04048、0.080072、0.01357、0.008912、0.004465μg/mL;精密度试验(n=5)、重复性试验(n=6)的RSD均小于5％;平均回收率为99.41％～111.27％(RSD<9％,n=9).3批黄蜀葵花总黄酮提取物中试样品中均未检出上述9种残留溶剂.结论:所建立方法简便、准确、可靠,可用于黄蜀葵花总黄酮提取物中9种有机溶剂残留量的同时测定.

目的:建立蜀葵花的薄层鉴别和总黄酮的含量测定方法,并对其抗氧化活性进行研究.方法:采用薄层色谱法鉴别紫云英苷,采用三氯化铝-醋酸盐比色法测定总黄酮含量,并通过正交试验优选显色条件;采用DPPH自由基清除的方法来评价蜀葵花总黄酮的抗氧化活性.结果:薄层鉴别色谱特征斑点明显,最佳显色条件为:HAC-NaAc缓冲液2mL,AlCl34mL,反应时间20 min.其平均回收率为100.4％,RSD为1.28％.蜀葵花总黄酮对DPPH有一定的清除能力.结论:定性定量方法简便,快速、准确可靠.七批蜀葵花药材均具有较强的抗氧化活性.

目的:考查盐胁迫对黄蜀葵生长生理及总黄酮含量的影响.方法:采用自吸水耐盐鉴定法,人为设置不同的基质含盐量,以清水为对照,比较6个浓度梯度盐胁迫处理下,黄蜀葵生长生理指标和总黄酮含量的变化规律.利用HPLC法检测不同浓度盐胁迫后黄蜀葵花冠中总黄酮的含量.结果:黄蜀葵为轻度耐盐植物,1～3g/L盐胁迫能够促进黄蜀葵植株的生长,大于3 g/L后随着盐胁迫浓度增加,其生长受到抑制,在小于9 g/L的盐胁迫下,完成生活史.采取优化后的超声波提取植物总黄酮,最优超声波提取条件:提取剂为80％的乙醇,提取温度为50℃,提取时间为60 min,料液比为1∶25;盐胁迫浓度为2 g/L时,黄蜀葵花冠中总黄酮含量最高,达5.018％.结论:优化形成了一套高效提取和检测黄蜀葵总黄酮含量的方法,明确了盐胁迫对黄蜀葵生长和总黄酮含量的影响,为黄蜀葵在盐碱区的合理开发利用提供技术支撑和理论基础.