目的 研究黑果小檗内生真菌假丝酵母菌Candida sp.的次生代谢产物.方法 假丝酵母菌发酵提取物次级代谢产物的乙酸乙酯部位、石油醚部位采用硅胶、Sephadex LH-20、制备液相色谱进行分离纯化,根据理化性质及波谱数据鉴定所得化合物的结构.结果 从中分离得到 18 个化合物,分别鉴定为 1-苯基-1,2-乙二醇(1)、4-羟基苯乙醇(2)、4-羟基苯甲酸(3)、对羟基苯乙酸(4)、间羟基苯乙酸(5)、3-甲基亚砜基丙酸(6)、苯乙酸(7)、(S)-N-nitroso-1-amino-p-hydroxy phenylethanol(8)、2-苯乙酰胺(9)、对羟基苯甲醛(10)、2-(4-羟苯基)-乙酸乙酯(11)、邻苯二甲酸二丁酯(12)、5,5'-dimethoxybiphenyl-2,2'-diol(13)、3-吲哚甲醛(14)、N-乙酰-L-苯丙氨酸(15)、9-hydroxy-10E,12Z-octadecadienoic acid(16)、9-hydroxy-10E,12E-octadecadienoic acid(17)、(6E)-5-methylene-6-tetradecenoic acid(18).结论 化合物 1、3～8、10～18 为首次从假丝酵母菌真菌中分离得到.

目的 探讨黑果小檗果花色苷提取物(BHSTA)对小鼠肝纤维化的改善作用及其机制.方法 将40只雄性昆明种小鼠随机分为正常对照组、模型对照组、BHSTA低剂量组、BHSTA高剂量组、水飞蓟宾组,每组8只.除正常对照组外均采用腹腔注射CCl4油剂的方法建立肝纤维化模型,正常对照组腹腔注射等体积橄榄油;BHSTA低剂量组、BHSTA高剂量组、水飞蓟宾组建模时分别灌胃给予10、40 mg/kg的BHSTA溶液和1 μg/10 g的水飞蓟宾,正常对照组、模型对照组均灌胃给予等体积蒸馏水,1次/天,连续4周.记录各组小鼠4周内的体质量,4周后处死,计算肝脏指数,肝脏组织HE及Masson染色后观察病理改变,全自动生化分析仪检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST),改良盐酸羟胺法检测肝脏组织超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH)、丙二醛(MDA)表达,Western blotting法检测肝脏组织Nod样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)及其下游靶基因凋亡相关微粒蛋白(ASC)、半胱天冬酶1(Caspase-1)、白细胞介素1β(IL-1β)蛋白相对表达量.结果 随着干预时间的延长,各组小鼠体质量均呈升高趋势;分组处理第4周,正常对照组、水飞蓟宾组、BHSTA高剂量组、BHSTA低剂量组、模型对照组小鼠体质量依次降低,组间两两比较P均＜0.05.与正常对照组比较,其余各组肝脏指数均升高,以模型对照组升高最明显(P均＜0.05).正常对照组肝小叶结构比较完整,肝细胞正常,汇管区未发现炎症细胞浸润和胶原纤维增生情况;模型对照组大多数肝窦消失,肝细胞可见中度或者重度水肿改变,多发气球样及脂肪样变性,并伴有炎症细胞浸润及汇管区大量胶原纤维增生;BHSTA低剂量组、BHSTA高剂量组、水飞蓟宾组肝细胞气球样变、炎症细胞浸润及胶原纤维增生均较模型对照组减轻.与正常对照组比较,模型对照组血清AST、ALT及肝脏组织MDA表达均升高,肝脏组织SOD、GSH表达均降低(P均＜0.05).与模型对照组比较,BHSTA低剂量组、BHSTA高剂量组、水飞蓟宾组血清AST、ALT及肝脏组织MDA表达均降低,肝脏组织SOD、GSH表达均升高;其中,BHSTA高剂量组、水飞蓟宾组血清AST、ALT及肝脏组织MDA表达降低更明显,水飞蓟宾组肝脏组织SOD、GSH表达升高更明显(P均＜0.05).与正常对照组比较,其余四组小鼠肝脏组织NLRP3、ASC、Caspase-1及IL-1β蛋白相对表达量均升高,以模型对照组升高最明显(P均＜0.05).结论 BHSTA对小鼠肝纤维化具有一定的改善作用,其机制可能与减轻氧化应激反应及抑制 NLRP3炎症小体相关通路有关.

目的 采用HPLC法测定并对比新疆黑果小檗根皮与根木质部中阿魏酸的含量,并优化其提取工艺条件.方法 ①通过不同溶剂提取黑果小檗根皮、根木质部,根据其含量测定结果选定最优提取溶剂.②在单因素试验结果基础上,采用响应曲面法优化阿魏酸的提取工艺.结果 ①确定乙醇提物中阿魏酸含量最高.②确定最佳提取条件.平行试验3次,新疆黑果小檗根皮、根木质部中的阿魏酸在提取溶剂为60％乙醇,提取温度为50℃,料液比为1∶15,提取次数为3次的提取条件下提取效率最高,其中,根皮中阿魏酸提取量0.71％(RSD=1.24％),根木质部中阿魏酸提取量0.32％(RSD=1.51％).结论 本提取工艺稳定可行,提取效率较高.

通过野外调查及采集土样, 对新疆西天山野果林内黑果小檗 (Berberis atrocarpa Schneid.) 3个自然居群 (霍城、新源和特克斯) 的土壤种子库及幼苗更新情况进行研究.结果显示, 3个居群内黑果小檗土壤种子质量无显著差异, 霍城、新源和特克斯居群黑果小檗土壤种子库中完整种子分别占种子总数的51.6％、49.4％和54.1％.霍城、新源和特克斯居群黑果小檗完整种子均聚集在枯枝落叶层, 分别为98.4％、97.4％和100％, 3个居群5～10 cm土层均未发现黑果小檗种子.土壤种子水平扩散距离随着坡度的增加逐渐增大.霍城、新源和特克斯居群黑果小檗幼苗均为根蘖苗, 根蘖繁殖可使幼苗扩散到母株周围100 cm范围或更远处.Ⅱ级苗 (20～40 cm) 数量最多, 占幼苗总数的50％;3个居群黑果小檗的Ⅰ级苗 (0～20 cm) 向Ⅱ级苗的转化率均为100％;霍城和新源居群Ⅱ级、Ⅲ级 (40～60 cm) 苗间的转化率较低, 分别为29％和32％, 特克斯居群Ⅱ级、Ⅲ级苗间的转化率较高, 为78％.研究结果表明西天山野果林黑果小檗种子易滞留于地表, 难以进入土壤深层且土壤中种子霉变率高, 这可能是黑果小檗自然更新困难的原因.

以西天山野果林霍城居群、新源居群和特克斯居群黑果小檗以及特克斯居群红果小檗种子为试验材料,研究了4组野生小檗种子生物学特性、吸水特性以及去种皮、低温层积和不同浓度GA3处理对小檗种子休眠与萌发特性的影响,结果表明:(1)4组野生小檗种子的吸水率均表现出逐渐增加的趋势,黑果小檗种子与红果小檗种子吸水率差异不明显,其种皮透水透气性相似;(2)霍城居群、新源居群和特克斯居群黑果小檗种子的种皮对萌发存在强烈的抑制作用;而新源居群红果小檗种子的种皮抑制作用不明显;(3)4℃低温层积处理对4组野生小檗种子萌发影响很大,随层积时间的增加小檗种子发芽率均逐渐提高,3组黑果小檗种子层积90 d时,休眠基本被解除;红果小檗种子层积30 d时,休眠基本被解除;(4)浓度为200 mg·L-1的GA3溶液处理可显著提高4组小檗种子发芽率,浓度过高或过低均会对小檗种子萌发起到抑制作用.层积60 d时霍城居群、新源居群和特克斯居群黑果小檗去种皮种子用200 mg· L-1的GA3溶液处理2h后,发芽率分别为85.00％、83.33％和86.67％;红果小檗层积15 d时去种皮种子用浓度为200 mg·L-1的GA3溶液处理后,发芽率可达86.67％.研究结果将为今后野生小檗的种质资源保护,利用及可持续发展提供技术支持和科学依据.

目的 建立黑果小檗总花色苷的最佳提取工艺,考察黑果小檗总花色苷的急性毒性.方法 采用酶-超声波辅助法,以提取率为指标考察酶解pH值、酶解温度、酶解时间、酶用量对黑果小檗总花色苷提取的影响.将60只昆明种小鼠随机分为空白组、16.000 g/kg、12.800 g/kg、10.240 g/kg、8.192 g/kg和6.554 g/kg剂量组,每组10只,采用一次性灌胃并观察小鼠14 d内急性毒性反应,以死亡率为指标计算半数致死量(LD50).结果 黑果小檗总花色苷的最佳提取工艺:果胶酶酶解液pH值为4,酶解温度50℃,酶解时间30 min,酶用量1.5％,在此条件下黑果小檗总花色苷的提取率最高,为1.45％.黑果小檗总花色苷提取物对小鼠的急性经口LD50为10.929 g/kg,其95％置信区间为9.679～12.431 g/kg.结论 本方法简便、可靠、高效,适用于黑果小檗总花色苷的提取,急毒实验表明,黑果小檗总花色苷具有一定毒性,为临床安全用药提供实验参考.

目的:优选黑果小檗总花色苷的大孔树脂纯化工艺参数.方法:以总花色苷吸附率和解析率为指标,通过对10种大孔树脂的静态吸附和解析能力考察,筛选出最佳大孔树脂型号.利用单因素和正交试验确定总花色苷的最佳纯化工艺条件.结果:选用XDA-7A型大孔树脂分离纯化黑果小檗总花色苷,最佳工艺条件:上样液质量浓度为0.2339mg/mL,上样流速为2mg/min,上样液pH值为1.0,洗脱液乙醇浓度为50％,洗脱液pH值为1.0,洗脱流速为2mUmin.树脂最大上样量为12.34mg/g,洗脱时需要pH=1.0的50％乙醇至少6个柱体积.纯化后总花色苷的纯度为39.28％,色价为330.结论:优选的纯化工艺稳定可行,可较好地分离纯化黑果小檗总花色苷.

目的:建立黑果小檗根部化学成分的定性鉴别及含量测定方法.方法:采用薄层色谱法考察不同展开条件、展开剂比例、点样量、检视方式、薄层板、展开温度以确定最佳薄层色谱展开系统,并对黑果小檗根部化学成分进行定性鉴别及含量测定.结果:确定氯仿-乙酸乙酯-甲酸(4:4.5:1.5),薄层板为GF254硅胶薄层板,点样量为1μL,检测波长为254、366 nm,展开温度为25℃为最佳展开条件,黑果小檗根皮及根木质部中均含有盐酸巴马汀、盐酸小檗碱且盐酸巴马汀、盐酸盐酸小檗碱分别在0.0211～3.798、0.675～4.05范围内具有较好的线性关系(r=0.9995、r=0.9942),其中超声提取的根皮水提物中盐酸巴马汀含量最高,含量为2.2920 mg/g;超声提取的根皮甲醇提取物中盐酸小檗碱含量最高,含量为3.7640 mg/g.结论:本实验所建立的薄层展开方法稳定可行,含量测定方法操作简便、重现性好.

目的 研究黑果小檗总花色苷(BTA)对Aβ25-35诱导的阿尔茨海默病(AD)模型大鼠认知功能障碍的改善作用.方法 选取72只雄性SD大鼠,建立Aβ25-35诱导的AD大鼠模型,随机分为假手术组(双侧海马注射生理盐水+灌胃给予生理盐水,1 m L/kg体质量)、模型组(双侧海马注射Aβ25-35+灌胃给予生理盐水,1 m L/kg体质量)、B T A高剂量组(双侧海马注射Aβ25-35+灌胃给予BTA 218.6 mg/kg、1 mL/kg体质量)、BTA中剂量组(双侧海马注射Aβ25-35+灌胃给予BTA 109.3 mg/kg、1 mL/kg体质量)、BTA低剂量组(双侧海马注射Aβ25-35+灌胃给予BTA 54.6 m g/kg、1 m L/kg体质量)、阳性对照组(双侧海马注射Aβ25-35+灌胃给予多奈哌齐0.8 mg/kg,1 mL/kg体质量),每组12只,各组大鼠每天给药1次,连续28 d.采用Morris水迷宫实验,测定各组大鼠的逃避潜伏期和穿越平台次数,考察每组大鼠的认知功能;通过计算脏器系数,比较各组大鼠大脑的质量差异;采用HE染色,观察各组大鼠海马CA1区椎体细胞形态结构;采用免疫组化,测定各组大鼠海马组织Aβ25-35蛋白的表达情况.结果 与模型组比较,BTA高、中、低剂量组和阳性对照组大鼠逃避潜伏期缩短,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,BTA高、中剂量组和阳性对照组大鼠穿越平台次数增多,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,BTA高、中、低剂量组和阳性对照组大鼠大脑质量增高,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,BTA高、中剂量组和阳性对照组大鼠海马CA1区的Aβ25-35蛋白表达降低,差异有统计学意义(P<0.05).结论 BTA可有效改善AD模型大鼠的认知功能障碍,减轻AD模型大鼠脑组织的病理性损伤程度.

目的:建立HPLC法同时测定黑果小檗根中木兰花碱、阿魏酸、小檗胺、非洲防己碱、药根碱、巴马汀和小檗碱的含量.方法:采用Waters Symmetry@C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈.含0.2％三乙胺的0.05 mol/L磷酸二氢钾溶液,梯度洗脱;流速:0.6 mL/min;检测波长:282 nm;柱温:30℃.结果:木兰花碱、阿魏酸、小檗胺、非洲防己碱、药根碱、巴马汀和小檗碱分别在2.56～25.6 μg/mL、3.98～39.8 μg/mL、4.64～46.4 μg/mL、1.08～10.8 μg/mL、2.12～21.2 μg/mL、2.06～20.6 μg/mL、5.94～59.4 μg/mL范围内与峰面积的线性关系良好(r≥0.9995);平均加样回收率为99.27％～103.86％,RSD为1.18％～2.86％.结论:该方法准确可靠、重复性好,可为黑果小檗药材质量控制提供方法.