目的 建立呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)融合前F蛋白(prefusion F protein,pre-F)三聚体定量检测方法,并对其进行方法学验证和初步应用.方法 选取RSV pre-F三聚体特异性抗体AM14 作为捕获抗体,辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)标记的RSV pre-F特异性抗体D25 作为检测抗体,通过方阵滴定法确定捕获抗体和检测抗体的最佳浓度,对封闭液进行优化,建立双抗体夹心ELISA.分别对该方法的专属性、准确度、精密度和耐用性进行验证,并应用于RSV亚单位疫苗工艺开发中pre-F三聚体的定量检测.结果 该方法确定的捕获抗体AM14 包被浓度为 1.25 μg/mL,检测抗体D25 浓度为0.50 μg/mL,封闭液为1%牛血清白蛋白(bo-vine serum albumin,BSA).方法验证结果显示,线性范围为 1.50～24.00 ng/mL,标准曲线R2>0.99,最低检测限可达1.33 ng/mL;该方法专属性良好,仅与RSV pre-F三聚体反应;准确度和精密度验证结果显示回收率为 87.41%～117.03%,变异系数(coefficient of variation,CV)为 5.47%～14.07%;检测抗体孵育时间及显色时间在一定范围内波动时,回收率在 87.65%～106.45%,证明该方法耐用性优良;该方法可应用于RSV pre-F发酵和纯化等样品的检测.结论 成功建立并验证RSV pre-F三聚体定量检测方法,该方法专属性强,准确度、精密度、耐用性均优良,可应用于RSV疫苗工艺开发中pre-F三聚体的定量检测,无需Octet或者Biacore等精密仪器,具有操作简单、定量准确、成本低、便于推广应用等优点.

目的 为复方藤芷膏开发新剂型,并考察其透皮主要成分.方法 以凝胶贴膏剂基质的感官评价、初黏力、持黏力为综合指标,以NP-700、甘羟铝、EDTA-2Na、甘油、PVPK-90、酒石酸、纯化水的使用量作为课题的主要考察因素.依次采用单因素设计实验法和正交设计实验法在不同材料用量配比下优选凝胶贴膏剂的最佳基质配方.基于超高效液相色谱-电喷雾离子源-四极杆飞行时间质谱联用技术(UPLC-ESI-QTOF-MS/MS),采用垂直Franz扩散池法进行透皮实验,检测复方藤芷凝胶贴膏剂的透皮主要成分并确定.结果 复方藤芷凝胶贴膏剂的最佳配方为NP-700 4.0 g,甘羟铝 0.5 g,EDTA-2Na 0.2 g,二氧化钛 2.0 g,甘油 40 g,PVPK-90 5.0 g,酒石酸 0.7 g,纯化水50 g,载药含量10%.透皮结果初步鉴定出3个化合物,包括大黄素、盐酸小檗碱及欧前胡素.结论 研究所得复方藤芷凝胶贴膏剂膏体均匀,表面光滑,易于涂布.成型后具有优良的初始黏力和保持黏力,易剥离,无残留,保湿性好,对皮肤无刺激性和致敏性.透皮成分的确定为寻找其药效物质基础及进一步建立全面的质量控制方法提供了依据.

目的:探讨不同生产工艺对人用狂犬病疫苗(人二倍体细胞)可能存在的致敏反应的影响。方法:在4种不同生产工艺人用狂犬病疫苗免疫后的临床血清中随机选取360份血清样本，ELISA法检测不同生产工艺疫苗和不同采血时间点血清样本中的总IgE水平，采用SPSS19.0软件进行统计学分析。结果:总IgE检测结果显示，4种疫苗免疫后的血清总IgE阳性率均为20% (6/30)，总IgE的均值最低为9 IU/ml，最高为210 IU/ml，重复测量的方差分析显示不同时间采血检测的总IgE水平差异无统计学意义( P＝0.284)，多步浓缩纯化的人二倍体细胞疫苗的总IgE水平明显低于Vero细胞疫苗( P＝0.024)。 结论:免疫剂量的增加不会导致总IgE水平的升高，人用狂犬病疫苗(人二倍体细胞)的生产工艺能够对可能的致敏性杂质进行去除，具有良好的安全性。

2022年6月广州某键合金丝、键合银丝生产制造企业发生一起源头隐匿的一氧化碳中毒事故，造成10人中毒，其中，1人为一氧化碳中毒，9人为一氧化碳接触反应；症状为头晕、乏力、呕吐，5~7 h后指脉碳氧血红蛋白饱和度为4%~10%，血气生化分析碳氧血红蛋白饱和度为1.9%~5.8%。在企业碳载纯化装置中的气体检测一氧化碳浓度为34.46~37.26 mg/m 3。判断事故为碳载纯化装置运行异常产生一氧化碳气体随输气管道输送至作业岗位导致的一氧化碳中毒。本文通过排查毒物来源和中毒原因，为同类工艺预防类似事件提供警示，为化学中毒风险识别提供新的思路。同时，警示同类企业应充分考虑特定情况下的中毒风险，加强设备维护检修，防止类似事件的发生。

目的:筛选适合纯化竹节参总皂苷的大孔树脂，并确定其纯化工艺参数。方法:以总皂苷含量为指标，采用静态吸附试验，结合吸附动力学参数筛选大孔树脂类型；通过动态吸附试验考察竹节参提取物大孔树脂纯化的工艺参数，确定竹节参总皂苷的制备工艺。结果:D101大孔树脂对竹节参总皂苷有较好的吸附和解吸附效果，其最佳纯化工艺参数为：上样质量浓度为0.1 g/ml(以生药计)，上样体积为100 ml，即树脂上样量相当于3.3 g生药/ml；洗脱时先以3倍柱体积的蒸馏水、20%乙醇除杂，再用6倍柱体积的70%乙醇洗脱富集总皂苷，上样和洗脱流速为0.5 ml/min，总皂苷转移率可达85.6%。结论:D101大孔树脂可有效富集和纯化竹节参总皂苷，可为竹节参药材的开发和利用提供依据。

目的:优选消癌平胶囊的最佳水提醇沉工艺。方法:采用正交试验法，以通关藤苷G含量和干浸膏率为指标，考察煎煮次数、煎煮时间、加水量对消癌平胶囊水提取工艺的影响；考察醇沉浓度、相对密度、静置时间对其醇沉工艺的影响。结果:优选的水提工艺为加6倍量的水煎煮3次，每次1.5 h；优选的醇沉工艺为水提液浓缩至相对密度为1.15(60 ℃)，冷却后加入乙醇，使含醇量为70%，静置12 h，除去沉淀。结论:优选的水提醇沉工艺稳定可行、重现性好，可为消癌平胶囊的提取纯化提供参考。

目的:制备和鉴定抗CD47胞外区蛋白多克隆抗体。方法:通过逆转录PCR(reverse transcription-PCR，RT-PCR)扩增CD47分子胞外区基因序列，分别重组到原核表达载体pET32a(＋)和pET31b(＋)中，利用大肠杆菌表达CD47蛋白，并优化异丙基硫代半乳糖苷(isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside，IPTG)诱导蛋白表达工艺，表达出CD47蛋白。用纯化的CD47蛋白免疫Balb/c小鼠，获得小鼠多克隆抗体，使用亲和层析法纯化CD47多抗，并对多抗进行酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA )效价检测和Western blot特异性鉴定。结果:成功构建pET32a(＋)-CD47和pET31b(＋)-CD47重组质粒。按照实验设置不同条件诱导表达蛋白后，选出最佳表达载体pET32a(＋)-CD47。在大肠杆菌中获得表达最佳蛋白表达工艺。表达制备CD47蛋白，经过五次免疫后，得到CD47多抗。用ELISA法检测制备多抗的效价能达到1∶128 000。Western blot检测结果显示，自制的CD47多抗能准确检测出小鼠心脏组织样品。结论:成功制备了CD47胞外区蛋白多抗，为进一步研究CD47生物学功能奠定了基础。

目的:分别用新型复合层析介质Capto Core700和传统分子筛介质Sepharose 4FF纯化MDCK细胞制备的H5N1型流感病毒浓缩液，并比较分离纯化效果。方法:用Capto Core700与Sepharose 4FF纯化灭活H5N1型流感病毒浓缩液，透射电镜分析不同样品中病毒颗粒的形态；分别用单向免疫扩散法(single radial immunodiffusion, SRID)、福林酚法(Lowry法)、双抗体夹心ELISA、qPCR检测不同层析介质纯化前后病毒血凝素含量、总蛋白质含量、宿主细胞蛋白质(host cell protein, HCP)含量和宿主细胞DNA(host cell DNA, HCD)含量，计算病毒抗原回收率和杂质去除率；用动物实验检测不同纯化病毒的免疫原性，并用 t检验分析两种层析介质纯化效果差异。 结果:Capto Core700与Sepharose 4FF纯化的H5N1型流感病毒在透射电镜下均呈典型的流感病毒形态；两种层析介质纯化后病毒血凝素回收率差异无统计学意义( P>0.05)，但前者的杂质(总蛋白质、HCP、HCD)去除率均高于后者，且差异有统计学意义( P<0.05)；动物实验表明两种层析介质纯化的病毒样品均具有良好的免疫原性。 结论:相对于Sepharose 4FF层析介质，Capto Core700在保证病毒抗原蛋白回收率的基础上可以更有效地去除HCP、HCD和总蛋白质等工艺相关杂质。本研究为MDCK细胞生产H5N1型流感病毒疫苗纯化工艺开发提供了参考。

目的:调查吉林省医疗机构软式内镜终末漂洗水质量管理现状，并分析影响纯化水质量的因素。方法:采用方便抽样法，于2020年1—5月选取吉林省75所医疗机构为研究对象，采用自制的软式内镜终末漂洗水质量管理现状调查问卷对75所医疗机构内镜中心管理人员进行调查。同时，对医疗机构的内镜终末漂洗水进行现场采样，采集水处理设备终端、储水罐出口以及使用终端出水口水样，共159份，采用倾注及过滤法进行细菌总数检测。本研究共发放问卷75份，回收有效问卷72份，有效回收率为96.00%。结果:40.28%（29/72）的医疗机构终末漂洗水生物学检测结果合格，且不同等级医疗机构终末漂洗水生物学检测合格率比较差异无统计学意义（ P>0.05）。医疗机构终末漂洗水生产设备配置方面，终末漂洗用水类型、是否具备水处理设备、水处理工艺、是否安装原水预处理装置、是否安装消毒装置是终末漂洗水生物学检测结果的影响因素（ P<0.05）；终末漂洗水生产设备维护方面，在安装原水预处理及滤膜等设备的医疗机构中，是否记录终末漂洗水维护情况、是否定期更换滤膜、是否消毒储水罐及管路消毒情况是终末漂洗水生物学检测结果的影响因素（ P<0.05）；终末漂洗水质量监测方面，终末漂洗水质量相关监测制度的制订及监测情况的记录是终末漂洗水生物学检测结果的影响因素（ P<0.05）。 结论:各医疗机构应提高相关部门对内镜终末漂洗水质量控制的重视，加大财政支持和科研支撑力度，制订并完善相关规范，统一行业标准及行为，从而确保软式内镜终末漂洗用水质量，保证医疗安全。

本研究通过中心复合设计,采用响应曲面法优化沙漠小球藻GTD4C-2(Chlorella sp.GTD4C-2)胞内多糖(in-tracellular polysaccharide,IPSs)提取工艺.得到最佳提取条件:提取时间:1 h;提取温度:80℃;固液比(g/mL):1:25.通过最佳提取条件,提取的IPSs进行离子色谱分离纯化,而后采用高效凝胶色谱、气相色谱与质谱联用和傅里叶红外技术对IPSs进行结构分析.此外,还对其进行DPPH和羟基自由基清除能力检测.得到分子量稳定的IPS-2和IPS-3两种酸性糖,分子量分别为53.1 kDa和25.6 kDa;硫酸基含量分别为(5.69±0.11)％和(8.46±0.03)％;且单糖组成均为葡萄糖、半乳糖.体外抗氧化能力(以vC为阳性对照):VC＞IPSs＞IPS-3＞IPS-2.从沙漠小球藻中分离得到的多糖具有抗氧化能力,且粗提IPSs抗氧化活性强于IPS-2和IPS-3.沙漠小球藻多糖在食品,药品和保健品等方面具有广阔的应用前景.