采用营养液栽培的方法,研究了不同浓度(0、5 和 1 0 mg·L-1 )镉(Cd)对 1 0 种砧用南瓜幼苗生长状况、丙二醛(MDA)、地上部Cd含量及转移系数(TF)的影响,利用隶属函数法综合评价其耐 Cd 能力与 Cd 吸收积累能力,以期筛选到优良的砧用南瓜.结果表明:(1 )‘多美 1 0 9’、‘鑫力 3 号’、‘强力 1 号’、‘黑籽南瓜’和‘云南黑籽南瓜’在 2 种浓度Cd处理下全株生物量均显著低于对照,并以‘黑籽南瓜’和‘云南黑籽南瓜’下降幅度最大、耐性最差,而‘野木一雄’、‘青佳砧甲’、‘津油 1 08’和‘抗线 1 号’在 Cd处理下均与对照差异不显著,生长势良好,耐性强.(2)在 2 种浓度Cd处理下,‘津油 1 08’幼苗体内各抗氧化酶活性较高,根系和叶片的 MDA 含量与对照无显著差异,未受到膜脂过氧化伤害;‘野木一雄’幼苗各抗氧化酶活性较高,MDA 含量升高幅度较小,为对照的 1 .0 1～1.56倍,受到膜脂过氧化伤害相对较小;而‘多美 109’、‘强力 1 号’和‘云南黑籽南瓜’幼苗在 2 种浓度 Cd处理下,各抗氧化酶活性显著下降,体内 MDA含量升高幅度大,分别为对照的 1.30～2.46、1.33～3.11、1.45～3.24 倍,受伤害程度最大.(3)‘津油 108’与‘青佳砧甲’在 2 种浓度 Cd处理下地上部 Cd 含量和 TF均较小,Cd 吸收能力最弱,其次是‘野木一雄’,而‘亮丽佳’、‘黑籽南瓜’和‘云南黑籽南瓜’地上部 Cd含量和 TF最大,Cd吸收能力最强.(4)隶属函数值综合评价结果显示,10 种砧用南瓜幼苗对Cd的耐性大小依次为:‘津油 108’＞‘野木一雄’＞‘鑫力3 号’＞‘青佳砧甲’＞‘抗线1 号’＞‘多美109’＞‘黑籽南瓜’＞‘亮丽佳’＞‘强力1 号’＞‘云南黑籽南瓜’.研究认为,砧用南瓜品种对镉胁迫的耐受性存在明显差异,并以‘津油 108’最佳,其在镉胁迫下生长势良好,耐性强,且镉吸收和转运能力最弱.

以云南栽培的3个黑籽南瓜(Cucurbita ficifolia)品种(白皮、花皮和绿皮品种)为试材,在室内接种评价枯萎病抗性基础上,研究了3种材料受枯萎病菌胁迫后NBS抗病基因同源序列HQRGA2 (GenBank登录号MG946756)的表达差异,以及活性氧产生和抗氧化酶活性差异.结果 显示,3种黑籽南瓜HQRGA2的表达均受枯萎病菌诱导,与感病白皮品种和中抗花皮品种相比,抗病绿皮品种HQRGA2的表达水平增加迅速且持续能力强,呈增加-降低的表达特点.接种枯萎病菌后,感病品种和中抗品种O2-产生速率呈上升趋势,抗病品种则在侵染中后期急剧升高.感病品种和中抗品种的POD活性、MDA含量主要呈升-降-升的变化趋势,SOD活性则主要呈先升后降的变化趋势;而抗病品种的POD和SOD活性变化平稳,MDA含量呈逐步增加的趋势.枯萎病抗性与侵染早期POD和SOD活性呈负相关,与后期MDA含量呈正相关,而CAT活性与抗性并无一致性,感病品种和抗病品种的变化平稳,中抗品种表现为平稳-升高.由此表明,枯萎病菌侵染黑籽南瓜后,产生了较高水平的O2-,感病品种主要依赖SOD和POD,中抗品种依赖POD、SOD和CAT来清除活性氧,以增加植株的抗氧化能力.与感病品种相比,抗病品种能迅速启动并维持NBS类抗病基因序列的高量表达,其抗氧化酶可维持较高的活性水平,但对枯萎病菌胁迫不敏感.

以4种砧木和‘春秋王2号’(Cucumis sativus‘ Chunqiuwang No.2’)黄瓜为嫁接试材,在人工气候箱内对嫁接苗和自根苗进行了连续3d的低温(昼12 ℃/夜5℃)、高温(昼42℃/夜35℃)和常温(昼25 ℃/夜18℃)3组处理,分析温度胁迫对嫁接苗和自根苗的伤害指数、光合特性和抗氧化系统的影响,明确不同砧木嫁接苗对低温和高温抗性机制的异同,为黄瓜设施栽培生产中不同季节选择嫁接砧木提供依据.结果 表明:(1)低温胁迫下,黑籽南瓜(Cucurbita fici folia Bouché)砧嫁接苗冷害指数最低,其次为日本南瓜(Cucurbita moschata)砧嫁接苗,两者的相对叶绿素含量、净光合速率(Pn)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)和可溶性蛋白含量比常温对照增加较多,且两者丙二醛(MDA)含量较低.(2)高温胁迫下,‘五叶香’丝瓜(Luffa cylindrica ‘Wuyexiang’)砧嫁接苗热害指数最低,同时叶绿素含量、抗坏血酸过氧化物酶(APX)活性和可溶性蛋白含量均相对较高,MDA含量最低;‘甬砧8号’(Cucurbita maxima×Cucurbita moschata‘Yongzhen No.8’)白籽南瓜砧和日本南瓜砧嫁接苗热害指数也较低,且SOD、CAT和APX活性较高.(3)不同嫁接组合的抗性综合评价结果显示,黑籽南瓜砧嫁接苗的耐寒性最强,丝瓜砧嫁接苗的耐热性最强,日本南瓜砧嫁接苗和‘甬砧8号’砧嫁接苗对高温和低温均具有一定的耐受性.研究发现,黑籽南瓜砧等嫁接组合可以通过维持光合性能,提高抗氧化酶活性,增加渗透调节物质含量来缓解高低温度胁迫造成的过氧化伤害,从而表现出对高低温胁迫的较强抵抗力.

为探明环境条件影响黄瓜果面蜡粉形成的机制,以‘山农5号’黄瓜为接穗,‘黄诚根2号’南瓜(去蜡粉能力强)和‘云南黑籽南瓜’(去蜡粉能力弱)为砧木进行嫁接,在日光温室不同栽培茬口(冬春茬和秋冬茬)下研究了硅吸收分配和果面蜡粉量差异,并在人工气候室内模拟不同季节环境条件[T1:温度28℃/18 ℃(昼/夜),相对湿度55％/65％,光照强度600μmol· m-2·s-1;T2:温度22℃/12 ℃(昼/夜),相对湿度85％/95％,光照强度300μmol·m-2·s-1],研究其对硅吸收分配和硅转运蛋白基因表达的影响.结果 表明:日光温室栽培条件下,与秋冬茬相比,冬春茬黄瓜商品成熟果实表面蜡粉量显著增加,其中以‘云南黑籽南瓜’嫁接黄瓜受影响较大,自根黄瓜和‘黄诚根2号’嫁接黄瓜受影响较小;相同栽培季节,均以‘云南黑籽南瓜’嫁接黄瓜果面蜡粉量和器官硅含量最多,自根黄瓜次之,‘黄诚根2号’嫁接黄瓜最少.人工气候室内,T1环境下黄瓜各器官硅含量、叶片和根系硅转运蛋白基因表达量均高于T2;相同环境条件下,黄瓜各器官硅含量和叶片硅转运蛋白基因表达量均为‘云南黑籽南瓜’嫁接黄瓜＞自根黄瓜＞‘黄诚根2号’嫁接黄瓜.综上,环境条件改变了黄瓜植株对硅的吸收分配,进而影响果面蜡粉形成,适宜的环境条件有利于减少果面蜡粉量;高温、强光、低湿环境导致黄瓜果面蜡粉量增多,砧木对嫁接黄瓜硅吸收和果面蜡粉形成有显著影响.

以云南栽培的枯萎病抗病品种绿皮黑籽南瓜(Cucurbita ficifolia)为材料,采用二代转录组和全长转录组测序相结合的方法,对黑籽南瓜NBS类抗病基因进行鉴别和筛选.结果 显示:以NB-ARC作为参考氨基酸序列,共鉴定了43条CfNBS (NBS-type gene from C.ficifolia)类基因全长序列,分属于TNL、CNL、TN、RPW8-N和N类5个亚基因家族,典型的TNL和CNL类分别有2个和13个.系统进化树分析表明,CfNBS类基因可以分为4大类群,黑籽南瓜的NBS类抗病基因数量较少但其基因进化类型比其他瓜类物种丰富.与二代转录组进行比对,筛选获得11个差异表达的黑籽南瓜NBS类关键基因,包括4个抗病蛋白、2个蛋白激酶、2个TMV抗性蛋白和3个未知功能蛋白,qRT-PCR分析表明有10个CrBS类关键基因在枯萎病菌接种后48和96 h出现上调或下调表达,可能参与了黑籽南瓜对枯萎病菌侵染不同时间点的抗病应答过程.11个CfNBS类关键基因的GO (Gene Ontology)功能富集分析表明,其涉及的生物学过程显著富集在防卫反应、谷胱甘肽转运、改良氨基酸转运等10条GO条目中,涉及分子功能富集在ADP结合、受体丝氨酸/苏氨酸激酶结合、细胞壁结构成分3个GO条目中.而富集通路最多的是与TMV抗性蛋白同源的2个基因(CL19588contig1和CL21402contig1),说明这2个基因在抗病应答过程中起到了重要作用.11个CfNBS类关键基因qRT-PCR组织表达特异性分析表明,在根、茎、叶和果实中表达量最高的基因分别是CL34065Contig1、CL52011Contig1、CL6035Contig1和CL 19588Contig1.以上结果可为开展黑籽南瓜NBS类抗病基因的克隆和功能验证,以及解析黑籽南瓜响应枯萎病菌胁迫的抗性应答机制提供参考.

目的:评价肾康宁胶囊联合用药治疗肾阳虚证患者的临床疗效和安全性.方法:选取2018年5月至2018年10月间黑龙江中医药大学附属第二医院等收治的肾阳虚型患者360例作为研究对象,以区组随机法均分为对照组、联合观察组和葡萄糖酸锌组,每组120例,并给予对应方案进行治疗.记录3组患者在治疗前、治疗4周后、治疗8周后的夜尿量、尿频(日尿)次数、尿失禁现象、尿急次数,进行中医证候的量化评分,评估3组的临床总有效率及单项症状的消失率、生命质量和不良反应等.结果:3组患者在治疗后其夜尿、尿失禁、尿频、尿急的中医证候量化积分均优于治疗前(P<0.01).患者的总有效率如下:治疗4周后分别为联合观察组74.34％、葡萄糖酸锌组59.32％、对照组56.25％,治疗8周后分别为联合观察组92.92％、葡萄糖酸锌组77.12％、对照组63.39％.结论:肾康宁胶囊联合用药治疗肾阳虚排尿疾病患者疗效显著,可以明显减少夜尿和日尿次数,改善尿失禁、尿频、尿急症状,提高患者生命质量,且安全可靠.

黑籽南瓜(Cucurbita ficifolia)是云南特有的具有高抗枯萎病遗传性状的瓜类种质资源.为鉴定黑籽南瓜中NBS-LRR类基因的抗病功能,该研究从其叶片中克隆了NBS类基因CfRFN2(GenBank ID:MK618462),测序全长为4303 bp,完整的编码框长度为4092 bp,编码1363个氨基酸残基,该基因注释为拟南芥抗病蛋白At4g27190类转录体X1的同源基因,含有1个NB-ARC和2个LRR结构域,属于具有信号肽的可溶性蛋白.核苷酸相似性分析显示,CfRFN2与其他瓜类NBS类基因相似性在87％～98％之间;系统进化树分析表明,CfRFN2蛋白和瓜类的其他NBS类抗病蛋白聚为一个分支,其中CfRFN2蛋白与中国南瓜和美洲南瓜的RPS2、印度南瓜的RPS2-like亲缘关系最近,其次是黄瓜的At4g27190和苦瓜的At4g27220,与甜瓜的Atg27190亲缘关系相对较远;组织表达特性分析表明,CfRFN2基因在黑籽南瓜叶片中表达量最高,其次是茎,而在果皮和根中表达量较低.该研究采用烟草脆裂病毒载体系统,构建了黑籽南瓜VIGS沉默载体pTRV2-CfRFN2,含沉默载体的农杆菌侵染黑籽南瓜幼苗后接种枯萎病菌,qRT-PCR检测表明,接种后2 d和4 d的转pTRV2-CfRFN2沉默组植株的CfR-FN2基因表达量比接种后同时期的野生型植株显著降低(分别下降34.75％和98.27％),病情指数增加为野生型的1.32倍,初步证明黑籽南瓜CfRFN2基因具有抗枯萎病的功能,推测该基因可能在黑籽南瓜抗枯萎病防御过程中发挥着重要作用.该研究中NBS类基因CfRFN2的克隆和VIGS验证为黑籽南瓜更多优异基因的克隆和功能验证奠定了前期基础,也为发掘黑籽南瓜优异抗病基因和开展瓜类分子育种提供新信息.