心-面-皮肤综合征(cardio-facio-cutaneous syndrome，CFCS)是一种罕见的遗传综合征，与丝裂原活化蛋白激酶(RAS-mitogen-activated protein kinase，RAS-MAPK)信号传导通路异常激活有关，由BRAF、MAP2K1、MAP2K2、KRAS基因生殖系突变所致，呈常染色体显性遗传。CFCS患者表现为多系统异常，包括颅面部畸形、先天性心脏病、皮肤异常、胃肠道异常、生长迟缓、神经认知障碍、癫痫等，与其他RAS通路病患者有许多重叠的临床表型。CFCS患者可通过典型的临床表现和基因检测明确诊断，早期诊断有助于评估相关基因型的严重并发症风险，改善患者预后。MEK抑制剂可有效改善部分CFCS动物模型的异常表型，但目前尚无有效的临床治疗方法，明确诊断后需行多学科评估与对症治疗。

目的:研究p38丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）基因沉默对大气细颗粒物（PM 2.5）染毒肝细胞（L02细胞）相关基因表达的影响。 方法:于2019年6至9月，根据GenBank提供的p38MAPK基因序列，设计合成3条干扰序列，退火后连接到PLVX-shRNA2-puro中，将重组慢病毒载体转染L02细胞。用实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）和蛋白免疫印迹（Western blotting）法对p38MAPK基因沉默效果进行鉴定。用浓度为50 μg/ml的PM 2.5水溶物和10 μmol/L阳性对照Cr 6+分别染毒L02细胞、p38MAPK基因沉默细胞24 h，同时设立空白对照组。用荧光定量PCR检测癌基因（c-fos、c-myc、k-ras）、抑癌基因（p53）和凋亡基因（Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9）的相对表达水平。 结果:p38MAPK基因沉默细胞中p38MAPK基因和蛋白表达水平较正常L02细胞明显下降（ P<0.05），p38MAPK基因沉默细胞株构建成功。与空白对照组比较，PM 2.5染毒L02细胞组癌基因c-fos、c-myc、k-ras和凋亡基因Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9表达水平升高，抑癌基因p53表达水平下降，差异均有统计学意义（ P<0.05）；与PM 2.5染毒L02细胞组比较，PM 2.5染毒p38MAPK基因沉默细胞组癌基因c-fos、c-myc、k-ras和凋亡基因Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9表达水平下降，抑癌基因p53表达水平升高，差异均有统计学意义（ P<0.05）。 结论:PM 2.5对L02细胞癌基因、抑癌基因和凋亡基因表达有明显影响，而p38MAPK基因沉默可抑制PM 2.5对L02细胞的影响。

甲状腺未分化癌(anaplastic thyroid cancer，ATC)是恶性程度最高的甲状腺癌，发病率低却死亡率高。ATC具有侵袭性强、进展迅速、预后差的特点，目前的治疗方案疗效均较差，因此迫切需要对其发病机制进行深入研究以更新治疗方法、提高患者生存率。既往研究发现多数ATC可由分化较好的甲状腺癌发展而来，且BRAF、RAS突变是ATC的关键驱动因素，TP53、PI3K通路、PTEN、TERT、SWI/SNF复合体亚基、NF2等突变也在ATC的发生中起重要作用。近年来的研究发现单一基因的突变往往不足以驱动ATC的发生，ATC通常是由分化程度较好的甲状腺癌经过多种基因突变的累积后发展而来。因此本文综述了ATC常见联合突变的作用，以加深对ATC发病机制的认识，并为寻找有效的治疗靶点提供依据。

目的:研究至宝三鞭丸对学习记忆障碍模型小鼠学习记忆能力的改善作用，探讨其作用机制。方法:采用东莨菪碱诱导小鼠学习记忆障碍模型，采用Morris水迷宫实验、跳台实验和避暗实验评价小鼠学习记忆能力。采用TCMSP、TCMID数据库及文献检索至宝三鞭丸组方药物的化学成分，通过ADMETlab 2.0筛选潜在活性成分，利用Swiss Target Prediction数据库进行靶点预测，通过Metascape数据库进行GO功能和KEGG通路富集分析，并构建PPI网络，进行MCODE模块分析。结果:与模型组比较，至宝三鞭丸高剂量组小鼠水迷宫实验逃避潜伏期缩短（ P<0.05），第四象限停留时间和穿越平台次数增多（ P<0.05）。获得至宝三鞭丸组方药物863个活性成分，401个潜在靶点，至宝三鞭丸改善认知障碍的作用通路涉及神经活性配体-受体通路、钙离子信号通路、Ras相关蛋白-A（Rap1）信号通路、PI3K-Akt信号通路、MAPK信号传导通路、5-羟色胺受体通路等。 结论:高剂量的至宝三鞭丸可改善学习记忆障碍模型小鼠学习记忆能力，其作用机制可能与调节MAPK信号通路等多条神经功能相关的信号通路有关。

目的:探讨胡椒碱对1，2-二甲基肼(DMH)/右旋糖酐硫酸钠(DSS)诱导实验性结肠癌肿瘤细胞生长和增殖的影响及其具体机制。方法:将36只小鼠分为对照组、模型组和胡椒碱组，每组12只。对照组给予生理盐水灌胃；模型组和胡椒碱组通过DMH/DSS复合法建立实验性结肠癌模型后分别给予生理盐水和胡椒碱3.6 mg/(kg·d)灌胃。观察肿瘤负荷和体积，HE染色法观察小鼠结肠的组织学变化，蛋白免疫印迹法(Western blot)检测RAS/PI3K/AKT相关通路蛋白的表达。结果:模型组体重增加值及cleaved PARP、cleaved caspase-3表达水平均显著低于对照组(均 P<0.05)，Bcl-2、Bax、pan-RAS、p-MEK、p-ERK、PI3K、p-AKT、NF-κBp65、c-Myc、cyclin D1蛋白表达水平均显著高于对照组(均 P<0.05)。胡椒碱组体重增加值及cleaved PARP、cleaved caspase-3表达水平均显著高于模型组(均 P<0.05)；Bcl-2、Bax、pan-RAS、p-MEK、p-ERK、PI3K、p-AKT、NF-κBp65、c-Myc、cyclin D1蛋白表达水平均显著低于模型组(均 P<0.05)。 结论:胡椒碱对DMH/DSS诱导的实验性结肠癌发生具有抑制作用，其抑制作用可能涉及到RAS/PI3K/AKT信号轴。

目的:鉴定并筛选胆管癌差异性甲基化基因以预测胆管癌患者的预后。方法:选择2019年10月至2020年5月福建省立医院8例胆管癌患者胆管癌组织及癌旁组织进行850K甲基化测序分析，获取差异性甲基化基因。从癌症基因组图谱（TCGA）数据库中下载2018年36例患者胆管癌全基因组甲基化数据及临床信息，从基因表达综合（GEO）数据库下载2012年胆管癌甲基化数据（GSE32879），从GEPIA2数据库下载2018年TCGA数据库胆管癌总生存（OS）及无病生存（DFS）差异生存基因组数据。联合送检样本850K甲基化测序分析的差异甲基化位点（DMP）和差异甲基化区域（DMR）结果、TCGA和GEO数据库中甲基化基因以及胆管癌生存基因，在Sangerbox VENN工具中进行多数据集合分析，交集筛选得出共同差异性甲基化基因。在Sangerbox中运用最小 P值法确定基因表达的临界值，分为差异性甲基化基因高、低表达组，比较两组胆管癌患者OS、DFS、疾病特异性生存（DSS）、无病间隔（DFI）、无进展间隔（PFI）。进行基因本体（GO）和京都基因与基因组百科全书（KEGG）富集分析。 结果:8例患者的胆管癌组织与癌旁组织850K甲基化测序共鉴定出121 954个DMP，DMR中共鉴定出差异性甲基化基因1 399个；交集鉴定得出共同预后相关基因氨基葡萄糖（N-乙酰）转移酶1（GCNT1）和神经营养受体酪氨酸激酶3（NTRK3）。GCNT1在胆管癌组织中表达高于癌旁组织，差异有统计学意义（ P=0.040）；NTRK3在胆管癌组织中表达高于癌旁组织，差异无统计学意义（ P=0.790）。采用最小 P值法，以GCNT1及NTRK3联合表达情况预测胆管癌患者预后，按两基因表达量总和排序，以排序的30%为临界值时，胆管癌高表达组及低表达组间DFS差异最为显著（ P<0.001）；两组间OS差异无统计学意义（ P=0.065）。GO功能分析结果显示，GCNT1与蛋白质糖基化、大分子糖基化、糖化、糖蛋白生物合成过程、糖蛋白代谢过程、转移酶活性和转移糖基、蛋白质O-聚糖基化、O-聚糖加工等有关；NTRK3与神经营养素信号通路、Ras信号通路、EGFR酪氨酸激酶抑制、ErbB信号通路、磷脂酶D信号通路、癌症中枢碳代谢、自然杀伤细胞介导的细胞毒性等有关。KEGG分析结果显示，GCNT1主要与黏蛋白型O-聚糖生物合成、代谢途径等系统功能相关联，NTRK3主要与细胞表面受体通路、细胞内信号转导、刺激反应的正向调节、跨膜受体蛋白酪氨酸激酶信号通路、酶联受体蛋白信号通路、MAPK信号通路级联及调节、蛋白质磷酸化信号转导等系统功能相关联。 结论:胆管癌差异性甲基化基因GCTNT1、NTRK3表达对胆管癌患者预后有一定预测作用。

目的:探讨 K-ras基因对PM 2.5染毒人支气管上皮（HBE）细胞部分癌基因和抑癌基因表达的影响。 方法:于2019年9月，根据 K-ras基因mRNA序列，设计合成干扰序列，转染HBE细胞构建 K-ras基因沉默细胞。用10、50 μg/ml PM 2.5混悬液及10 μmol/L Cr 6+分别染毒HBE细胞和 K-ras基因沉默细胞，实时荧光定量PCR检测 c-myc、 c-fos、 N-ras、 cyclin-D1、 p16、 p53基因的mRNA表达水平，Western blot检测c-myc和p53蛋白表达水平。 结果:K-ras基因沉默细胞中 K-ras基因mRNA表达水平下降（80.5%±3.6%），K-ras蛋白表达水平下降（58.9%±4.7%）（ P<0.01）。各浓度PM 2.5染毒HBE细胞组、 K-ras沉默细胞组及10 μmol/L Cr 6+染毒HBE细胞组、 K-ras沉默细胞组 c-myc、 c-fos、 N-ras、 cyclin-D1基因mRNA表达水平均高于未染毒相应细胞对照组， p16和 p53基因mRNA表达水平低于未染毒相应细胞对照组（ P<0.01）；10 μg/ml PM 2.5染毒 K-ras沉默细胞组 c-myc、 c-fos、 p16基因mRNA表达水平低于10 μg/ml PM 2.5染毒HBE细胞组， p53基因mRNA表达水平高于10 μg/ml PM 2.5染毒HBE细胞组（ P<0.01）；50 μg/ml PM 2.5染毒 K-ras沉默细胞组 c-fos、 N-ras、 cyclin-D1、 p16和 p53基因mRNA表达水平均低于50 μg/ml PM 2.5染毒HBE细胞组（ P<0.01）。50 μg/ml PM 2.5染毒HBE细胞组c-myc蛋白表达水平高于未染毒HBE细胞组，p53蛋白表达水平低于未染毒HBE细胞组（ P<0.05）；50 μg/ml PM 2.5染毒 K-ras沉默细胞组c-myc蛋白表达水平高于未染毒 K-ras沉默细胞组（ P<0.05）。 结论:PM 2.5可引起HBE细胞癌基因表达升高， K-ras基因沉默能抑制PM 2.5诱导HBE细胞癌基因的表达。

目的:分析8种人胰腺癌细胞株中常见肿瘤相关基因突变，为胰腺癌基础研究中选择合适的细胞株提供依据。方法:体外培养8种人胰腺癌细胞株(AsPC-1、BxPC-3、Capan-1、Capan-2、MIA PaCa-2、PANC-1、Patu8988和T3M4，均购自美国模式培养物集存库)，采用二代测序技术检测113个肿瘤相关基因突变情况，结合京都基因与基因组百科全书(KEGG)数据库对突变基因进行功能分析。结果:二代测序结果显示，8种人胰腺癌细胞株中共确定36个基因、79个位点发生突变。鼠类肉瘤病毒癌基因(KRAS)、肿瘤蛋白P53(TP53)、细胞周期依赖性激酶抑制基因(CDKN2A)和胰腺癌缺失基因(DPC4/SMAD4)在8种胰腺癌细胞株中的突变率分别为87.5%(7/8)、100.0%(8/8)、50.0%(4/8)和37.5%(3/8)。AsPC-1和Capan-1细胞中同时存在上述4个基因的突变，BxPC-3细胞株是KRAS野生型胰腺癌，CDKN2A基因在AsPC-1、Capan-1、Capan-2和Patu8988细胞中检测到突变，而DPC4/SMAD4在AsPC-1、Capan-1和T3M4细胞中发生突变。其他发生率较高的突变基因包括AT丰富结合域1A(ARID1A)基因(AsPC-1、Capan-1、Capan-2、MIA PaCa-2和T3M4发生突变)、环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREBBP)基因(Capan-1、Capan-2、MIA PaCa-2和T3M4发生突变)、NOTCH1(BxPC-3、Capan-2、MIA PaCa-2和T3M4发生突变)、腺瘤性息肉病(APC)基因(AsPC-1、Capan-1和Patu8988发生突变)和E1A结合蛋白P300(EP300)基因(BxPC-3、MIA PaCa-2和T3M4发生突变)。突变基因功能主要涉及Ras/丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路、细胞周期调控、Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)通路、NOTCH信号通路、染色质重塑复合物家族、转化生长因子β(TGF-β)信号通路、DNA损伤修复、Hedgehog和磷脂酰肌醇3激酶丝氨酸/苏氨酸激酶(PI3K-Akt)信号通路等。结论:8种胰腺癌细胞株具备人胰腺癌组织的基因学特征，不同细胞株具有不同的基因突变特点，实验研究中应根据不同细胞的基因突变情况合理选择细胞株并分析研究结果。

Background::Thymic carcinomas (TCs) and thymic neuroendocrine neoplasms (TNENs) are two aggressive subtypes of thymic malignancy. Traditional therapy for advanced TCs and TNENs has limited outcome. New genomic profiling of TCs and TNENs might provide insights that contribute to the development of new treatment approaches.Methods::We used gene panel sequencing technologies to investigate the genetic aberrations of 32 TC patients and 15 TNEN patients who underwent surgery at Shanghai Chest Hospital between 2015 and 2017. Patient samples were sequenced using a 324-gene platform with licensed technologies. In this study, we focused on clinically relevant genomic alterations (CRGAs), which are previously proven to be pathogenic alterations, to identify the pathology-specific mutational patterns, prognostic signatures of TCs and TNENs.Results::The mutational profiles between TCs and TNENs were diverse. The genetic alterations that ranked highest in TCs were in CDKN2A, TP53, ASXL1, CDKN2B, PIK3C2G, PTCH1, and ROS1, while those in TNENs were in MEN1, MLL2, APC, RB1, and TSC2. Prognostic analysis showed that mutations of ROS1, CDKN2A, CDKN2B, BRAF, and BAP1 were significantly associated with worse outcomes in TC patients, and that mutation of ERBB2 indicated shortened disease-free survival (DFS) and overall survival (OS) in TNEN patients. Further investigation found that the prognosis-related genes were focused on signal pathways of cell cycle control, chromatin remodeling/DNA methylation, phosphoinositide 3-kinases (PI3K)/protein kinase B (AKT)/mammalian target of rapamycin (mTOR), and receptor tyrosine kinase (RTK)/RAS/mitogen-activated protein kinase (MAPK) signaling. Conclusion::We profiled the mutational features of 47 Chinese patients with thymic malignancy of diverse pathologic phenotypes to uncover the integrated genomic landscape of these rare tumors, and identified the pathology-specific mutational patterns, prognostic signatures, and potential therapeutic targets for TCs and TNENs.

目的:探讨Ras蛋白激活类似物3（RASAL3）在肝内胆管癌（iCCA）中的表达并深入研究其促进iCCA进展的作用机制。方法:收集185例iCCA患者肿瘤与癌旁组织标本，应用免疫组化、RT-qPCR和Western blot法检测RASAL3的表达，并同时检测人胆管癌细胞株和人胆管上皮细胞中RASAL3和FXYD6的mRNA和蛋白表达情况，CCK-8法检测细胞增殖及Na +-K +-ATP酶活性。 结果:RASAL3在胆管癌组织和细胞株中高表达；生存分析结果显示RASAL3高表达与胆管癌的不良预后相关（ P<0.05）。敲降RASAL3抑制胆管癌细胞的增殖；沉默RASAL3降低FXYD6表达水平，抑制Na +-K +-ATP酶活性。 结论:iCCA中RASAL3表达水平显著上调，RASAL3可通过激活FXYD6，上调Na +-K +-ATP酶活性促进iCCA的发展。