21-羟化酶缺乏症（21-hydroxylase deficiency, 21-OHD）累及各个年龄阶段，可严重影响患者的生活质量，且失盐型病死率高，需要及时诊断并规范治疗。17-羟孕酮（17-hydroxyprogesterone, 17-OHP）是筛查、诊断和监测21-OHD的传统指标。然而，17-OHP存在一些局限性：新生儿筛查假阳性率较高、波动较大以及受青春期及月经周期影响等。所以，需要更好的指标以协助临床诊疗。近年来，一些研究提出21-脱氧皮质醇（21-deoxycortisol, 21-DF）可能是21-OHD更特异的标志物，其具有以下优点：21-DF在早产儿或其他形式的先天性肾上腺皮质增生症中不升高，且不受采血时间影响；21-DF是可靠的非经典21-OHD的诊断标志物；21-DF只来源于肾上腺。因此，该文对17-OHP的局限性及21-DF的相对优越性进行综述。

目的:观察液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）与免疫法检测多种类固醇激素的一致性。寻找多种类固醇激素在21-羟化酶缺乏症（21-OHD）中的诊断价值、筛选随访指标。方法:2019年5月至2020年5月，武汉儿童医院收集实验组为109例接受规范治疗的经典型21-OHD患者，对照组为94名正常儿童。同时用免疫法和LC-MS/MS法检测17-羟孕酮（17-OHP）、雄烯二酮（Δ4-A）、睾酮和皮质醇。采用LC-MS/MS法检测另外16种肾上腺类固醇激素。实验组分为过度治疗组（17-OHP<4 ng/ml）、控制良好组（4 ng/ml≤17-OHP<12 ng/ml）和控制欠佳组（17-OHP≥12 ng/ml）。分析免疫法与LC-MS/MS检测结果的一致性，比较21-OHD患者与对照组LC-MS/MS血清多种类固醇浓度差异，发掘多种类固醇激素检测的诊断价值，比较不同疗效21-OHD患者20种类固醇浓度差异，筛选更有价值的随访指标。结果:（1）LC-MS/MS与免疫法同时检测的4项指标中，T、17-OHP的一致性高。免疫法测定的皮质醇和Δ4-A浓度高于LC-MS/MS。（2）LC-MS/MS检测的肾上腺分泌的20种类固醇激素中21-OHD患者较对照组有6种激素明显偏高，6种激素明显偏低，8种没有统计学差异。（3）抑制过度组17-OHP降低、11-脱氧皮质醇升高；控制欠佳组17-OHP、孕烯醇酮、孕酮、17-羟孕烯醇酮、21-脱氧皮质醇、Δ4-A、雌酮升高。结论:LC-MS/MS可一次性检测多种类固醇激素，评价维度更多面。随访中20种激素中仅8种与患者控制状态密切相关，可减少不必要的消耗。

目的 建立可溯源的干血片样本19种类固醇激素液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)标准曲线.方法 收集乙二胺四乙酸抗凝新鲜全血,用0.9%NaCl溶液清洗血细胞,将清洗后的血细胞和无类固醇激素的血浆按0.55∶0.45比例混合,制备模拟全血.根据拟制备标准曲线浓度添加不同量类固醇激素至模拟全血样本中,制备不同浓度的类固醇激素标准曲线干血片.采用液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)检测各标准曲线干血片类固醇激素含量,分析其线性范围,并对类固醇激素标准曲线干血片进行性能验证.结果 类固醇激素标准曲线干血片中孕烯醇酮、孕酮、可的松、脱氢表雄酮的线性范围为0.25～100 ng/mL,11-脱氧皮质酮、21-脱氧皮质醇、18-羟皮质醇、11-酮睾酮的线性范围为0.05～20 ng/mL,皮质酮、11-羟睾酮的线性范围为0.025～10 ng/mL,17-羟孕酮、18-羟皮质酮、11-脱氧皮质醇、雄烯二酮、11-羟雄烯二酮、睾酮的线性范围为0.1～40 ng/mL,皮质醇的线性范围为1.5～600 ng/mL,17-羟孕烯醇酮的线性范围为0.2～80 ng/mL,硫酸脱氢表雄酮的线性范围为25～10 000 ng/mL;相关系数(r2)≥0.997.结论 建立的干血片样本类固醇激素标准曲线具有良好的线性,可实现相关项目测量结果的溯源.

目的 建立液相色谱-串联质谱技术(liquid chromatographytandem mass spectrometry,LC-MS/MS)检测干血滤纸片(dried blood spots,DBS)中类固醇激素谱的方法.方法 取含不同浓度类固醇激素(包括雄烯二酮、睾酮、17-羟孕酮、孕酮、11-脱氧皮质醇、21-脱氧皮质醇、皮质醇)的2个DBS(直径3 mm),用含已知类固醇激素内标的1∶1甲醇/乙腈萃取,孵育震荡后氮气吹干,复溶后LC-MS/MS检测.评价方法的线性、精确度、准确度.收集7例21-羟化酶缺乏症患儿及23例正常婴幼儿DBS样本,LC-MS/MS测定样本中类固醇激素浓度.结果 7种类固醇激素批内和批间精确度为3.3％～10.9％,准确度为100.4％～116.5％,最低检测限为0.03～0.25μg/L,最低定量限为0.125～1.000μg/L;不同浓度的类固醇激素实测浓度与加入浓度之间的相关系数为0.997 ～ 0.999.21-羟化酶缺乏症患儿DBS样本中雄烯二酮、17-羟孕酮、孕酮、21-脱氧皮质醇、皮质醇浓度均显著高于正常男性婴幼儿,具有统计学意义(P＜0.05).结论 本研究建立了LC-MS/MS测定DBS中类固醇激素谱的方法,具有较好的精确度、准确度及浓度线性关系,可用于临床类固醇激素检测,有助于先天性肾上腺皮质增生症的临床诊断及治疗效果评价,并有望用于此病的新生儿筛查.

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目的 运用代谢组学和网络药理学探讨脑心通胶囊活血化瘀的作用机制.方法 24只大鼠随机分为空白组、模型组和药物组,每组8只.药物组给予脑心通胶囊1.5 g/kg灌胃,空白组和模型组灌胃给予等量的0.5％羧甲基纤维素钠溶液,每日早、晚各1次,共7次.实验第3天第5次给药后模型组和药物组给予肾上腺素(0.8 mg/kg两次)制备急性血瘀证模型.超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱技术分析大鼠血浆代谢轮廓,采用Progenesis QI和Simca-P软件进行多元统计分析及差异内源性代谢物筛查,通过MetaboAnalyst数据库对代谢通路进行分析.通过MBRole 2.0数据库对差异内源性代谢物的作用靶标进行筛选,利用网络药理学方法对脑心通胶囊中主要活性成分及其作用靶标进行筛选,采用Cytoscape软件构建差异内源性代谢物-靶标-脑心通胶囊活性成分网络.结果 正常组和模型组比较鉴定得到白三烯A4、21-脱氧皮质醇、7α-羟基-3-氧代-4-胆甾烯酸酯、17α,21-二羟基孕烯醇酮、1-磷酸鞘氨醇和鹅去氧胆酸6个差异内源性代谢物,涉及花生四烯酸代谢、类固醇激素的合成、初级胆汁酸的生物合成和鞘脂代谢四条代谢途径.脑心通胶囊中的47个活性成分可通过对4个差异内源性代谢物(白三烯A4、21-脱氧皮质醇、1-磷酸鞘氨醇和鹅去氧胆酸)的调节发挥活血化瘀作用,涉及花生四烯酸代谢、类固醇激素的合成和鞘脂代谢途径.结论 本研究从代谢组学和网络药理学角度阐释了脑心通胶囊的活血化瘀作用机制,为脑心通胶囊的深入研究提供依据,为中成药的作用机制研究提供新思路.

目的 采用液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)技术,对传统新生儿先天性肾上腺皮质增生症(CAH)筛查方法进行改进.方法 对73例时间分辨荧光法(TRFIA)初筛异常的疑似CAH息儿,先用基因分析技术为诊断标准分为CYP21A2基因突变患者、携带者和非CAH21新生儿,再用LC-MS/MS测定17-羟孕酮(17-OHP)和21-脱氧皮质醇(21-DF)浓度,最后比较LC-MS/MS技术与TRFIA法的差异.结果 73例研究对象中,CAH21患者6例,携带者9例,非CAH21新生儿58例.LC-MS/MS法的17-OHP浓度1.65～218.63 ng/mL,21-DF浓度0.112～23.300 ng/mL;其中,CAH21患儿的17-OHP浓度显著高于携带者或非CAH21新生儿(均P＜0.001);21-DF浓度:CAH21患儿＞携带者＞非CAH21新生儿(分别P＜0.001和P＜0.05).Deming回归和Bland-Altman偏差分析:LC-MS/MS技术与TRFIA法检测结果的关联性良好,但后者明显高于前者.根据LC-MS/MS技术检测正常人群上述两指标的参考范围,前者假阳性27例,为TRFIA法40.30％;后者假阳性13例,为TRFIA法19.40％.结论 LC-MS/MS技术应用对初筛阳性的疑似CAH患儿进行原干血片测定17-OHP和21-DF浓度,可降低TRFIA过高的假阳性率.