目的:探讨3-正丁基苯酞(DL-3-n-Butylphthalide，NBP)对慢性酒精中毒模型小鼠的情绪记忆的改善作用及可能机制。方法:24只C57/BL6成年雄性小鼠，随机分为对照组(CON组， n＝8)，模型组(AT组， n＝8)，治疗组(AT＋NBP组， n＝8)。AT组及AT＋NBP组小鼠采用酒精灌胃方法建立慢性酒精中毒小鼠模型。AT＋NBP组在酒精造模期间每天一次给予40 mg/kg的NBP灌胃，AT组和CON组给予等剂量的玉米油灌胃，连续14 d。采用旷场实验评估小鼠焦虑样行为，悬尾实验评估抑郁样行为，Morris水迷宫和新物识别评估小鼠记忆能力，Tunel染色评估神经元凋亡数量。原代培养小鼠神经元，在细胞水平上给予酒精和NBP干预，采用荧光钙成像技术检测神经元内的钙离子浓度变化。采用SPSS 17.0进行描述性分析， t检验和方差分析。 结果:AT＋NBP组小鼠在旷场中间区域探索时间较AT组长[(50.68±7.82)s，(38.50±13.93)s； t＝－2.16， P<0.05)]；空间记忆测试中，AT＋NBP组在目标象限探索时间较AT组长[(28.02±7.13)s，(20.98±5.58)s； t＝－2.20， P<0.05]；AT＋NBP组在短记忆测试中2 h时其认知系数RI(0.83±0.08)比AT组(0.68±0.10)高( t＝－3.13， P<0.05)。与CON组比，AT组小鼠前额叶皮层神经元凋亡增加[(17.33±2.51)个，(115.67±6.50)个； t＝－24.41， P<0.001]，AT＋NBP组较AT组减少[(45.00±5.57)个]( t＝14.29， P<0.001)；AT组海马齿状回神经元凋亡[(13.75±4.79)个]也较AT＋NBP组少[(5.75±3.30)个]( t＝2.75， P<0.05)；神经细胞内钙离子浓度检测结果显示，3种浓度的酒精(100 mmol/L、200 mmol/L、300 mmol/L)均导致神经细胞内相对荧光单位(RFU)△F/F显著增加[(1.43±0.32)，(2.31±1.39)，(1.21±0.73)； t＝－7.67，－2.85，－2.86，均 P<0.05]，与之相对应地使用NBP干预的3组神经细胞内RFU变化相对稳定[(－0.04±0.01)，(－0.03±0.01)，(－0.04±0.02)； t＝7.96，2.96，2.92，均 P<0.05]。 结论:3-正丁基苯酞可以改善慢性酒精中毒模型小鼠的学习记忆能力，这可能与抑制中毒模型小鼠神经元凋亡、影响神经元细胞内钙离子稳态有关。

目的 探究三七茎叶总皂苷改善缺血性脑卒中、促进缺血性脑卒中损伤后血管新生作用及机制.方法 采用网络药理学技术预测三七茎叶总皂苷促进缺血性脑卒中损伤后血管新生可能的机制,利用分子对接技术对筛选出的核心靶点与主要成分的结合进行初步验证.雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组及三七茎叶总皂苷低、中、高剂量(73、146、292 mg/kg)组和 3-正丁基苯酞(3-n-butylphthalide,NBP,60 mg/kg)组,每组 20 只.建立大鼠脑中动脉阻塞/再灌注(middle cerebral artery occlusion/reperfusion,MCAO/R)模型,给药 7 d后取材.每隔 1 d对大鼠进行神经功能评分;通过 2,3,5-氯化三苯基四氮唑(2,3,5-triphenyltetrazolium chloride,TTC)染色、苏木素-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色观察大鼠脑梗死体积及脑神经细胞形态状况;通过激光多普勒血流仪观察大鼠梗死脑侧血流恢复情况;通过光学相干断层扫描血管成像观察大鼠脑微血管新生状况;通过ELISA和Western blotting测定与血管新生相关蛋白表达.结果 网络药理学分析显示,共收集到 60 个三七茎叶总皂苷活性成分和 297 个关键靶点,与血管新生和缺血性脑卒中取交集后得到 64 个交集靶点,并且三七茎叶总皂苷主要成分与这些核心靶点均有较好结合力.三七茎叶总皂苷促进血管新生改善缺血性脑卒中的关键通路主要富集在磷脂酰肌醇 3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)、缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)等通路.动物实验结果显示,与模型组比较,三七茎叶总皂苷能够显著降低MCAO/R大鼠神经功能评分(P＜0.01),改善大鼠神经功能,降低大脑梗死体积(P＜0.01、0.001),减少脑组织损伤,恢复梗死脑侧脑血流(P＜0.05、0.01、0.001),促进梗死脑侧皮层微血管密度(P＜0.05、0.01、0.001),提高血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)水平和HIF-1α、PI3K、p-Akt/Akt蛋白表达(P＜0.05、0.01、0.001).结论 三七茎叶总皂苷能够显著改善MCAO/R大鼠脑损伤,有效促进MCAO/R大鼠缺血脑区血管新生,促血管新生机制可能与提高MCAO/R大鼠大脑中VEGF、bFGF、HIF-1α表达和激活PI3K/Akt通路有关.

目的 采用UPLC-Q-TOF-MS/MS研究腰痹通胶囊在大鼠尿液和胆汁中的代谢产物,并归纳主要代谢途径.方法 通过空白对照法寻找尿液和胆汁中可能的代谢产物,依据所获得的精确相对分子质量和二级碎片离子对代谢产物进行推测.结果 在正、负离子模式下尿液中共检测到31个代谢产物,胆汁中共检测到35个代谢产物,主要为藁本内酯、3-丁基苯酞、蛇床子素、洋川芎内酯A、川芎内酯A、大黄素、紫花前胡醇或紫花前胡苷元或二氢山芹醇、紫堇杷明碱或异紫堇杷明碱、紫堇鳞茎碱或异紫堇鳞茎碱或元胡菲碱、别隐品碱、阿魏酸、隐绿原酸、当归醇类等化合物的Ⅰ相或Ⅱ相代谢产物,主要代谢途径为内酯环水解、羟基化、去甲基、脱水、脱氢、脱羟基、氢化、甲基化、甲基氧化、葡萄糖醛酸化、硫酸酯化、N-乙酰半胱氨酸结合、半胱氨酸结合、半胱氨酸-甘氨酸结合、谷胱甘肽结合等.此外,胆汁中检测到3个原型成分,即芍药苷、芍药内酯苷和人参皂苷Rg1.结论 建立的UPLC-Q-TOF-MS/MS方法能够分析出腰痹通胶囊在大鼠尿液和胆汁中的代谢产物,初步阐明了腰痹通胶囊的体内代谢特征,为腰痹通胶囊在体内发挥疗效的药效物质基础研究提供了依据.

目的 探讨dl-3-正丁基苯酞对内皮素诱导脑缺血大鼠行为学的改善作用及其作用机制.方法 采用向纹状体、皮层注射内皮素-1制作大鼠脑缺血模型.大鼠随机分为假手术组、模型组和dl-3-正丁基苯酞组.dl-3-正丁基苯酞组每日ig 70 mg/kg,起始于缺血后1周,持续给药2周.采用平衡木实验、粘性标签试验和圆筒试验评价神经功能恢复情况,应用免疫荧光技术观察海马齿状回新生神经细胞的情况.结果 dl-3-正丁基苯酞对脑缺血大鼠运功功能的恢复有明显的改善,明显促进海马齿状回的新生神经细胞增多,增加双皮质素(DCX)阳性细胞总树突长度.结论 dl-3-正丁基苯酞不仅能够对脑缺血后大鼠的运动功能有明显的改善,而且促进脑缺血后大鼠的神经再生,对脑缺血所致的神经细胞损坏的治疗提供参考.

随着人们寿命的延长及脑血管疾病的增加,血管性认知功能障碍患病率逐年增加.然而,目前针对血管性认知功能障碍的治疗却以对症治疗为主且疗效有限.近些年来,研究发现丁苯酞对血管性认知功能障碍有着独特的疗效和更好的安全性.因此,总结丁苯酞对血管性认知功能障碍的作用机制,为今后丁苯酞在临床治疗中提供可靠的理论依据.

目的 观察丁基苯酞(NBP)对过氧化氢(H2O2)诱导下视网膜Müller细胞凋亡的保护作用.方法 体外培养的人视网膜Müller细胞分为正常对照组、模型组(H2O2组)、实验组(H2O2+NBP组).H2O2组、H2O2+NBP组细胞培养液中加入200 μmol/LH2O2刺激2h后,H2O2组更换为完全培养基,H2O2+NBP组更换为含l μmol/L NBP的完全培养基.正常对照组为常规培养细胞.苏木精-伊红(HE)染色观察各组细胞形态改变;噻唑蓝(MTT)比色法检测NBP作用24、48 h后各组细胞活性;Hoechst33258染色观察各组细胞凋亡情况;LIVE/DEAD(R)细胞活性/细胞毒性试剂盒检测各组细胞生存力;二氯荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)+内质网(ER)红色荧光探针(ER-Tracker Red)双染色观察各组细胞ER中活性氧(ROS)的表达水平.单因素方差分析联合Dunnett统计学方法进行数据分析.结果 HE染色结果显示,H2O2+NBP组细胞数量较H2O2组增加.MTT比色法检测结果发现,NBP作用24、48 h后,正常对照组与H2O2组、H2O2组与H2O2+NBP组细胞生存力比较,差异均有统计学意义(t=28.96、3.658、47.58、20.33,P＜0.001、0.022).Hoechst33258结果显示,H2O2+NBP组细胞少数细胞核边集呈新月状且细胞核碎裂减少,其余细胞蓝色荧光均匀.LIVE/DEAD@细胞活性/细胞毒性试剂盒检测结果显示,H2O2组中呈红色荧光的死亡细胞明显增多,呈绿色荧光的活细胞数量显著减少;H2O2+NBP组呈绿色荧光的活细胞数量增多,呈红色荧光的死亡细胞减少.DCFH-DA+ER-TrackerRed双染色结果显示,H2O2组细胞中绿色荧光强度明显增强;H2O2+NBP组细胞中绿色荧光强度较H2O2组明显降低.结论 NBP通过抑制ROS的产生缓解H2O2诱导的人视网膜Müller细胞凋亡.

目的 研究消旋-3-正丁基苯酞(dl-3-n-Butylphthalide,NBP)对溴化乙锭( ethidium bromide,EB)诱导脱髓鞘模型作用及其机制.方法 将36只SD大鼠随机平均分为3组:EB组、NBP组、假手术组.建立EB诱导中枢神经系统(CNS)脱髓鞘模型.通过LFB染色检测各组大鼠脱髓鞘程度;HE染色检测各组大鼠白质组织炎细胞浸润;Tunel法检测各组大鼠少突胶质细胞(oligodendrocytes,OLs)凋亡情况;免疫组织化学染色方法检测 MBP、caspase-9的表达; Western blot方法检测MBP、Cyt C的表达.结果 LFB髓鞘染色和HE染色证实定向侧脑室注射成功诱导CNS脱髓鞘;与假手术组相比,EB组CNS存在大量OLs凋亡,凋亡细胞阳性表达百分率明显高于假手术组(P<0. 05), MBP表达明显少于假手术组(P<0. 05),Cyt C、caspase-9表达多于假手术组(P<0. 05).与EB组相比,NBP组脱髓鞘明显减轻,OLs凋亡减少,凋亡细胞阳性表达百分率低于EB组(P<0. 05),MBP表达高于EB组(P<0. 05),Cyt C、caspase-9表达少于EB组(P<0. 05).结论 NBP对EB诱导的CNS脱髓鞘的保护作用可能与抑制OLs内线粒体介导的内源性凋亡有关.

目的 探讨dl-3-丁基苯酞(NBP)衰老的小胶质细胞诱导的帕金森病细胞模型中的保护作用及机制.方法 采用大鼠小胶质细胞原代培养和PC12细胞株的传代培养法,佛波酯诱导小胶质细胞异常活化,不同剂量的NBP预处理PC12细胞,然后加入低剂量鱼藤酮以建立与衰老小胶质细胞共育系统,模拟帕金森病体外细胞模型,在倒置显微镜下观察PC12细胞形态,同时用流式细胞仪检测各组PC12线粒体膜电位及细胞内活性氧监测,Annexin V-PI双染法监测PC12凋亡.结果 与正常组相比,老化小胶质细胞共育的PC12细胞线粒体膜电位下降,细胞内ROS生成增多(P＜0.01),而0.01～100μM的NBP均可不同程度地抑制这一变化.结论 NBP通过抑制线粒体通透性、减少氧化应激等机制来降低PC12细胞凋亡,对神经元起保护作用.

缺血性脑卒中后,小胶质细胞被激活,表现为M1和M2两种极化表型,许多药物可以促进缺血性脑卒中后小胶质细胞由M1型向M2型转化,如芬戈莫德、3-正丁基苯酞及其衍生物、姜黄素、西地那非、Exendin-4、雷公藤红素、Omega-3多元不饱和脂肪酸、Malibatol A、红景天苷等.

目的:研究dl-3-正丁基苯酞(NBP)对脑损伤大鼠的神经保护作用.方法:将100只7周龄清洁级雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠随机分成5组,分别为假手术组、模型组、NBP低、中和高剂量组,每组20只.使用控制性皮层撞击损伤建立中型大鼠颅脑损伤模型.将NBP溶解在大豆油中,NBP低、中和高剂量组分别按照每天20、40和80 mg/kg的剂量灌胃,假手术组和模型组灌胃等体积的大豆油,共给药2周.采用改良神经功能缺损评分(mNSS)对大鼠的神经系统状况进行评价.检测各组大鼠治疗后的脑组织含水量以及脑组织中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平.TUNEL方法鉴定细胞的凋亡.通过RT-PCR、Western blot或免疫组化检测脑组织中Nrf2、NQO-1、HO-1、ApoJ、MMP9、AQP4、Caspase-3和AKT的表达.结果:NBP治疗2周后,NBP低、中和高剂量组大鼠的mNSS评分和神经元凋亡率以剂量依赖性方式显著降低(P＜0.05).与模型组比较,NBP低、中和高剂量组大鼠的脑含水量均显著降低(P＜0.05).与模型组比较,NBP低、中和高剂量组大鼠的MDA显著降低,而SOD和GSH-Px显著升高(P＜0.05).与模型组比较,NBP低、中和高剂量组大鼠的细胞核Nrf2显著升高,而细胞质Nrf2显著降低(P＜0.05).与模型组比较,NBP低、中和高剂量组大鼠的NQO-1和HO-1蛋白表达水平显著升高(P＜0.05).与模型组比较,NBP低、中和高剂量组大鼠的AQP4、MMP-9、ApoJ和Caspase-3的mRNA和蛋白表达水平均显著降低,而AKT显著升高(P＜0.05).结论:NBP对创伤性颅脑外伤大鼠具有一定的神经保护作用.