目的:探讨外源性左旋肉碱对过度内质网应激介导的严重烫伤大鼠肝细胞焦亡的影响及其分子机制。方法:采用实验研究方法。将15只6~8周龄雌性SD大鼠按随机数字表法（分组方法下同）分为假伤组、单纯烫伤组、烫伤+肉碱组，每组5只，单纯烫伤组和烫伤+肉碱组大鼠背部制作30%体表总面积的Ⅲ度烫伤，其中烫伤+肉碱组大鼠另外给予腹腔注射左旋肉碱。伤后72 h，采用全自动生化仪检测肝损伤生物化学指标天冬氨酸转氨酶（AST）和丙氨酸转氨酶（ALT）水平，样本数为5。伤后72 h，采用苏木精-伊红染色观察肝组织损伤情况。伤后72 h，采用实时荧光定量反转录PCR（RT-qPCR）法检测肝组织中细胞焦亡相关标志物核苷酸结合寡聚化结构域蛋白样受体热蛋白结构域相关蛋白3（NLRP3）、胱天蛋白酶1（caspase-1）、消皮素D和白细胞介素1β（IL-1β）以及内质网应激相关标志物葡萄糖调节蛋白78（GRP78）、CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白（CHOP）的mRNA水平；采用蛋白质印迹法检测肝组织中GRP78、CHOP、NLRP3、caspase-1、caspase-1/p20、消皮素D-N、剪切型IL-1β蛋白表达水平，样本数均为5。取人肝癌细胞HepG2，分为二甲基亚砜（DMSO）组、0.1 μmol/L衣霉素组、0.2 μmol/L衣霉素组、0.4 μmol/L衣霉素组、0.8 μmol/L衣霉素组，分别作相应处理。培养24 h后，采用细胞计数试剂盒8法检测细胞活力并筛选衣霉素干预浓度（样本数为5）。取HepG2人肝癌细胞，分为DMSO组、单纯衣霉素组和衣霉素+肉碱组，分别作相应处理。培养24 h后，采用蛋白质印迹法检测细胞中GRP78、CHOP、NLRP3、caspase-1、caspase-1/p20、消皮素D-N、剪切型IL-1β蛋白表达水平，样本数均为3。对数据行单因素方差分析和LSD- t检验。 结果:伤后72 h，单纯烫伤组大鼠血清中AST和ALT水平分别为（640±22）、（157±8）U/L，均分别明显高于假伤组的（106±13）、（42±6）U/L（ t值分别为-46.78、-25.98， P<0.01）；烫伤+肉碱组大鼠血清中AST和ALT水平分别为（519±50）、（121±10）U/L，均明显低于单纯烫伤组（ t值分别为4.93、6.06， P<0.01）。伤后72 h，假伤组大鼠肝组织形态基本正常，未见明显的炎症细胞浸润；与假伤组相比，单纯烫伤组大鼠肝组织可见大量的炎症细胞浸润，细胞排列紊乱；与单纯烫伤组相比，烫伤+肉碱组大鼠肝组织可见少量的炎症细胞浸润。伤后72 h，单纯烫伤组大鼠肝组织中NLRP3、caspase-1、消皮素D和IL-1β mRNA表达水平均明显高于假伤组（ t值分别为34.42、41.93、30.17、15.68， P<0.01）；烫伤+肉碱组大鼠肝组织中NLRP3、caspase-1、消皮素D和IL-1β mRNA表达水平均明显低于单纯烫伤组（ t值分别为34.40、37.20、19.95、7.88， P<0.01）。伤后72 h，与假伤组相比，单纯烫伤组大鼠肝组织中NLRP3、caspase-1、caspase-1/p20、消皮素D-N、剪切型IL-1β蛋白表达水平均明显升高（ t值分别为12.28、26.92、5.20、10.02、24.78， P<0.01）；与单纯烫伤组相比，烫伤+肉碱组大鼠肝组织中NLRP3、caspase-1、caspase-1/p20、消皮素D-N、剪切型IL-1β蛋白表达水平均明显下降（ t值分别为10.99、27.96、12.69、8.96、12.27， P<0.01）。伤后72 h，单纯烫伤组大鼠肝组织中GRP78、CHOP的mRNA水平均明显高于假伤组（ t值分别为21.00、16.52， P<0.01），烫伤+肉碱组大鼠肝组织中GRP78、CHOP的mRNA水平均明显低于单纯烫伤组（ t值分别为8.92、8.21， P<0.01）；单纯烫伤组大鼠肝组织中GRP78、CHOP的蛋白表达水平均明显高于假伤组（ t值分别为22.50、14.29， P<0.01），烫伤+肉碱组大鼠肝组织中GRP78、CHOP的蛋白表达水平均明显低于单纯烫伤组（ t值分别为14.29、5.33， P<0.01）。培养24 h后，与DMSO组相比，0.1 μmol/L衣霉素组、0.2 μmol/L衣霉素组、0.4 μmol/L衣霉素组、0.8 μmol/L衣霉素组细胞存活率均明显下降（ t值分别为4.90、9.35、18.64、25.09， P<0.01）；选择0.8 μmol/L作为后续衣霉素的干预浓度。培养24 h后，与DMSO组相比，单纯衣霉素组细胞GRP78、CHOP的蛋白表达水平均明显升高（ t值分别为10.48、17.67， P<0.01）；与单纯衣霉素组相比，衣霉素+肉碱组细胞GRP78、CHOP的蛋白表达水平均明显下降（ t值分别为8.08、13.23， P<0.05或 P<0.01）。培养24 h后，与DMSO组相比，单纯衣霉素组细胞NLRP3、消皮素D-N蛋白表达水平均明显升高（ t值分别为13.44、27.51， P<0.01），caspase-1、caspase-1/p20、剪切型IL-1β蛋白表达水平均无明显变化（ P>0.05）；与单纯衣霉素组相比，衣霉素+肉碱组细胞NLRP3、消皮素D-N蛋白表达水平均明显下降（ t值分别为20.49、21.95， P<0.01），caspase-1、caspase-1/p20、剪切型IL-1β蛋白表达水平均无明显变化（ P>0.05）。 结论:在严重烫伤大鼠中，外源性左旋肉碱可能通过抑制过度内质网应激介导的细胞焦亡相关通路发挥对肝损伤的保护作用。

目的:探讨痤疮丙酸杆菌生物膜诱导人原代角质形成细胞发生炎症反应的分子机制。方法:体外构建痤疮丙酸杆菌生物膜模型，激光共聚焦显微镜观察其三维立体结构。将培养的人原代角质形成细胞分成3组：二甲基亚砜（DMSO）对照组（仅加入0.01% DMSO）、痤疮丙酸杆菌悬浮菌组（加入痤疮丙酸杆菌悬浮菌，简称悬浮菌组）、痤疮丙酸杆菌生物膜悬液组（加入痤疮丙酸杆菌生物膜悬液，简称生物膜悬液组）。实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测孵育6 h后各组白细胞介素6（IL-6）、IL-8以及肿瘤坏死因子α（TNF-α） mRNA相对表达水平，酶联免疫吸附试验（ELISA）检测孵育24 h后各组IL-6、IL-8及TNF-α游离蛋白水平，Western印迹法检测角质形成细胞Toll样受体2（TLR2）蛋白表达水平。进一步用TLR2/丝裂原激活蛋白激酶（MAPK）/核因子κB（NF-κB）信号通路关键分子的阻断剂（C29、ST2825、BAY11-7082、SB203580、U0126-EtOH）联合痤疮丙酸杆菌生物膜悬液作用于人原代角质形成细胞，同时设DMSO对照组和痤疮丙酸杆菌生物膜悬液阳性对照组，然后检测IL-6、IL-8及TNF-α mRNA和游离蛋白表达水平。多组间比较采用单因素方差分析，两两多重比较采用Bonferroni法。结果:激光共聚焦显微镜下，痤疮丙酸杆菌生物膜形成草坪般的三维立体结构，生物膜生长状态良好。RT-qPCR及ELISA显示，生物膜悬液组、悬浮菌组、DMSO对照组炎症因子IL-6、IL-8、TNF-α mRNA及游离蛋白表达水平差异均有统计学意义（mRNA： F = 89.70、312.17、46.09，均 P < 0.001；游离蛋白： F = 886.12、634.25、307.01，均 P < 0.001）；生物膜悬液组IL-6、IL-8、TNF-α mRNA及游离蛋白表达均显著高于悬浮菌组和DMSO对照组（均 P < 0.001）；悬浮菌组IL-6 mRNA表达及TNF-α游离蛋白表达均显著高于DMSO对照组（ P < 0.001、= 0.003），但IL-6游离蛋白、TNF-α mRNA、IL-8 mRNA及游离蛋白表达与DMSO对照组相比差异无统计学意义（均 P > 0.05）。Western印迹结果显示，生物膜悬液组和悬浮菌组TLR2蛋白表达均明显高于DMSO对照组。经不同MAPK/NF-κB通路抑制剂预处理及痤疮丙酸杆菌生物膜悬液共孵育，C29组、ST2825组、BAY11-7082组、SB203580组、U0126-EtOH组及DMSO对照组IL-6、IL-8、TNF-α mRNA及游离蛋白表达水平均显著低于生物膜悬液组（均 P < 0.05）。 结论:痤疮丙酸杆菌生物膜诱导人角质形成细胞发生炎症反应能力较强，可能通过激活TLR2/MAPK/NF-κB信号通路实现。

目的:探究组蛋白去乙酰化酶3(HDAC3)在肾缺血再灌注诱导的急性肾损伤中的作用及其机制。方法:2021年4月至2021年10月于武汉大学人民医院使用C57BL/6雄性小鼠60只建立肾缺血再灌注损伤(I/R)模型，等量随机分为假手术(Sham)组、缺血再灌注(I/R)组、I/R+二甲基亚砜(DMSO)组、I/R+HDAC3抑制剂AES-135低、中、高剂量组。用苏木精-伊红(HE)染色评估肾损伤情况；血清尿素氮(BUN)和肌酐(Cr)定量肾功能水平；蛋白质印记(WB)法检测HDAC3及凋亡蛋白表达水平；过氧化氢(H 2O 2)、丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)评估氧化应激水平。组间比较采用方差分析和Tukey-Kramer检验。 结果:HDAC3的蛋白表达水平随着缺氧时间的延长逐渐增高，在缺氧45 min组蛋白组表达水平明显高于Sham组(2.147±0.166比1.013±0.023， F＝173.4， P<0.01)。高剂量抑制剂组小鼠BUN及Cr水平明显低于I/R组(BUN：26.54±1.16比60.43±3.06；Cr：68.67±6.02比161.70±4.16， F＝161.8， P<0.01)。高剂量抑制组小鼠的凋亡蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(bax)、裂解的半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3(cleaved Caspase-3)的水平明显低于I/R组(bax：3.483±0.136比2.273±0.064；cleaved Caspase-3：1.827±0.069比1.347±0.028， F＝7.2， P<0.05)，高剂量抑制组小鼠的氧化应激相关H 2O 2、MDA及SOD的水平明显低于I/R组(H 2O 2：3.82±0.21比5.89±0.19；MDA：1.34±0.11比2.12±0.09；SOD：154.56±7.21比71.33±6.51， F＝243.9， P<0.01)。 结论:HDAC3在肾缺血再灌注损伤中上调，抑制HDAC3通过减少细胞凋亡及氧化应激水平，减轻肾缺血再灌注损伤。

目的:探讨Toll样受体4（TLR4）特异性抑制剂TAK242对脓毒症大鼠模型肝脏的保护机制。方法:将18只雄性SD大鼠按随机数字表法分为3组，每组6只，采用腹腔注射脂多糖（LPS）15 mg/kg制备脓毒症模型；TAK242干预组于制模前腹腔注射TAK242（5 mg/kg）进行预处理，脓毒症模型组和对照组则注射等量溶剂〔10%二甲基亚砜（DMSO）+ 90%玉米油〕。6 h后取大鼠腹主动脉血，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测各组大鼠血清丙氨酸转氨酶（ALT）和天冬氨酸转氨酶（AST）水平；处死大鼠取肝组织，采用蛋白质免疫印迹试验（Western blotting）检测各组大鼠肝组织TLR4、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3（caspase-3）、核转录因子-κB p65及其磷酸化（NF-κB p65，p-NF-κB p65）的表达水平，采用免疫组织化学（免疫组化）染色观察肝组织NF-κB p65蛋白表达，采用苏木素-伊红（HE）染色评估肝细胞损伤情况。结果:脓毒症模型组ALT和AST水平均较对照组显著升高〔ALT（μg/L）：26.639±7.814比2.847±2.150，AST（μg/L）：28.442±8.417比5.779±3.019，均 P<0.01〕，TAK242干预组ALT和AST水平则较脓毒症模型组明显降低〔ALT（μg/L）：7.269±3.398比26.639±7.814，AST（μg/L）：3.580±3.115比28.442±8.417，均 P<0.01〕。光镜下显示，脓毒症模型组肝细胞排列紊乱，细胞水肿明显，炎症细胞浸润增多；TAK242干预组肝细胞排列整齐，肝细胞水肿明显减轻，炎症细胞浸润减少。Western blotting结果显示，脓毒症模型组肝组织caspase-3蛋白表达较对照组明显升高（caspase-3/GAPDH：0.794±0.164比0.482±0.055， P<0.05），TAK242干预组caspase-3蛋白表达则较脓毒症模型组明显降低（caspase-3/GAPDH：0.482±0.056比0.794±0.164， P<0.05），说明TAK242可减轻脓毒症大鼠肝脏细胞凋亡。脓毒症模型组肝组织IL-6、TNF-α和TLR4蛋白表达及p-NF-κB p65/NF-κB p65比值均明显高于对照组（IL-6/GAPDH：1.442±0.204比1.019±0.024，TNF-α/GAPDH：1.089±0.098比0.806±0.005，TLR4/GAPDH：1.292±0.085比0.941±0.087，p-NF-κB p65/NF-κB p65比值：1.936±0.081比1.579±0.183，均 P<0.05），TAK242干预组肝组织IL-6、TNF-α和TLR4蛋白表达及p-NF-κB p65/NF-κB p65比值均较脓毒症模型组明显降低（IL-6/GAPDH：1.035±0.042比1.442±0.204，TNF-α/GAPDH：0.572±0.096比1.089±0.098，TLR4/GAPDH：0.984±0.078比1.292±0.085，p-NF-κB p65/NF-κB p65比值：1.484±0.255比1.936±0.081，均 P<0.05），说明LPS诱导的脓毒症可激活肝组织TLR4/NF-κB通路所介导的炎症反应，给予TAK242阻断TLR4通路后，TLR4/NF-κB通路的激活被抑制，从而减轻脓毒症大鼠肝组织的炎症反应。免疫组化染色显示，脓毒症模型组肝组织NF-κB p65阳性表达较对照组明显增加；TAK242干预组NF-κB p65阳性表达则较脓毒症模型组明显减少，细胞核内几乎无阳性表达。 结论:TAK242通过阻断肝脏TLR4/NF-κB通路可减轻脓毒症大鼠的肝功能损伤，起到保护肝脏的作用。

目的:探讨大鼠扩大肝切除后早期炎性反应中的分子特征，筛选肝脏外科手术后肝衰竭的潜在治疗靶点。方法:SD大鼠实施70%常规肝切除术(PH70)和80%扩大肝切除术(PH80)，残存肝脏行转录组测序、筛选差异表达基因和进行加权基因共表达网络分析(WGCNA)；实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)和蛋白质印迹法(Western blot)验证过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)的表达；继而在实施PH80大鼠中，使用PPARα激活剂WY14643(WY14643组)、PPARα拮抗剂GW6471(GW6471组)和二甲基亚砜组(DMSO组)预处理，苏木精-伊红(HE)染色和Suzuki标准评定肝脏病理损伤。自动生化分析仪检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)，酶联免疫吸附法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)。组间差异比较采用 t检验和单因素方差分析。 结果:转录组测序和WGCNA构建10个差异表达基因聚类模块，性状相关系数显示浅蓝色模块与PH80后1、12 h显著相关(皮尔森相关系数＝0.36、0.36， P<0.05)；选择浅蓝色模块中关键基因PPARα，显示PPARα在PH80后1 h表达显著降低( F＝57.32， P<0.05)，与炎性因子TNFα和IL-6峰值水平正相关(皮尔森相关系数＝0.93、0.93， P<0.05)；WY14643组较DMSO组，ALT[(543.1±201.9) U/L比(2 514.7±158.2) U/L， t＝8.90， P<0.05]、AST[(814.7±88.2) U/L比(1 185.1±57.7) U/L， t＝5.85， P<0.05]、TNFα[(107.3±2.0) U/L比(116.9±4.5) U/L， t＝ 3.34， P<0.05]和IL-6水平[(2 611.1±604.8) U/L比(3 655.9±363.8) U/L， t＝3.75， P<0.05]和Suzuki评分[(0.7±0.3)分比(1.6±0.2)分， t＝3.67， P<0.05]均显著减低。 结论:转录组测序和WGCNA初步揭示了大鼠PH80后早期炎性反应中的分子特征，PPARα有望成为肝脏外科手术后肝衰竭的潜在治疗靶点。

目的:观察盲肠结扎穿孔术（CLP）诱导的脓毒症小鼠肝损伤时不同途径铁死亡的发生，探讨线粒体乙醛脱氢酶2（ALDH2）是否通过抑制铁死亡减轻脓毒症肝损伤。方法:选取60只8周龄雄性C57BL/6J小鼠，按随机数字表法分为假手术（Sham)组、CLP组、铁死亡抑制剂铁抑素-1（Fer-1）组、ALDH2特异性激动剂Alda-1组、铁螯合剂右雷佐生（DXZ）组、二甲基亚砜（DMSO）组，每组10只。采用CLP法建立小鼠脓毒症肝损伤模型；Sham组仅开腹不结扎和穿刺盲肠。DMSO组、Fer-1组、DXZ组和Alda-1组分别于CLP术前1 h腹腔注射10 mL/kg 5% DMSO、5 mg/kg Fer-1、50 mg/kg DXZ和10 mg/kg Alda-1。术后24 h，麻醉小鼠取眼球血及肝组织。苏木素-伊红（HE）染色，镜下观察肝脏结构和炎症浸润情况；检测各组血清丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）水平及肝组织丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、活性氧（ROS）水平；蛋白质免疫印迹试验（Western blotting）检测肝组织ALDH2、铁死亡相关蛋白谷胱甘肽过氧化物酶4（GPX4）、铁死亡抑制蛋白1（FSP1）和转铁蛋白受体1（TFR1）的蛋白表达。结果:与Sham组相比，CLP组小鼠术后24 h肝脏可见不同程度淤血、肝细胞排列紊乱及炎症细胞浸润；与CLP组相比，Fer-1组、DXZ组和Alda-1组小鼠肝脏形态学有改善，损伤减轻，炎症细胞浸润减少。与Sham组相比，CLP组血清ALT、AST水平及肝组织MDA、ROS含量和TFR1蛋白表达显著升高，肝组织SOD活性及ALDH2、GPX4和FSP1蛋白表达显著降低。与CLP组相比，Fer-1组、DXZ组和Alda-1组血清ALT、AST水平显著降低〔ALT（U/L）：45.76±10.81、37.30±2.98、36.40±12.75比73.06±12.20，AST（U/L）：61.57±2.69、52.41±6.92、56.05±8.29比81.59±5.46，均 P<0.05〕，肝组织MDA、ROS含量及TFR1蛋白表达显著降低〔MDA（μmol/L）：0.60±0.10、0.57±0.18、0.83±0.39比1.61±0.30，ROS（荧光强度）：270.34±9.64、276.02±62.33、262.05±18.55比455.38±36.07，TFR1/GAPDH：0.90±0.04、1.01±0.09、0.55±0.08比1.18±0.06，均 P<0.05〕，肝组织SOD活性及ALDH2、GPX4、FSP1蛋白表达显著升高〔SOD（kU/g）：88.77±8.20、88.37±4.47、93.43±7.24比50.27±3.57，ALDH2/GAPDH：1.10±0.15、1.02±0.07、1.14±0.07比0.70±0.04，GPX4/GAPDH：1.02±0.12、0.99±0.08、1.05±0.19比0.71±0.10，FSP1/GAPDH：1.06±0.24、1.02±0.08、0.93±0.09比0.66±0.03，均 P<0.05〕。DMSO组各指标与CLP组差异无统计学意义。 结论:GPX4和FSP1介导的铁死亡均参与脓毒症小鼠肝损伤，激动ALDH2、抑制铁死亡可减轻肝损伤，ALDH2可能通过调控GPX4和FSP1介导的铁死亡发挥保护作用。

目的 利用超高效液相色谱-质谱(UHPLC-MS)非靶标技术探索胃复方干预SGC-7901荷瘤裸鼠的潜在代谢通路,为研究胃复方的体内代谢机制提供基础.方法 将胃癌细胞SGC-7901接种于6只裸鼠右侧乳垫处皮下,制备供瘤鼠模型.供瘤鼠瘤块长至10 mm×10 mm左右时,剥离瘤体进行鼠间传代接种,建立SGC-7901皮下移植瘤模型.将24只实验鼠按随机数字表法分为对照组和胃复方高、中、低剂量组,每组6只.对照组裸鼠每天给予0.2 mL生理盐水灌胃,胃复方高、中、低剂量组裸鼠每天给予0.2 mL相应药物灌胃,均连续给药14 d.通过祼鼠体质量、瘤体质量、抑瘤率分析干预效果,采用HE染色观察肿瘤标本.使用R程序包提取代谢物信息后,运用SIMCA软件进行主成分分析(PCA)及正交偏最小二乘法-判别分析(OPLS-DA),在Metabo Analyst软件中筛选出意义最大的代谢通路.结果 与对照组比较,中剂量胃复方抑制肿瘤生长效果较好(P<0.05),抑瘤率为35.97%,其次是高剂量和低剂量(P<0.05),抑瘤率分别为30.29%、30.07%.给药14 d内,对照组裸鼠体质量均高于胃复方高、中、低剂量组;第11天起,胃复方高、中剂量组裸鼠体质量均明显低于对照组(P<0.05).胃复方干预荷瘤裸鼠后,筛选出19种显著差异代谢物,包括甜菜碱、葫芦巴碱、水苏碱、蛋氨酸亚砜、L-酪氨酸、2,3-二羟基-3-甲基丁酸酯、肌酸、鸟氨酸、L-脯氨酸、N-乙酰亮氨酸等,其中精氨酸和脯氨酸代谢通路,烟酸和烟酰胺代谢通路,苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸代谢通路为3条关键代谢通路.结论 胃复方能抑制SGC-7901荷瘤裸鼠肿瘤生长,可能与调节体内氨基酸代谢通路有关.

目的 研究芹糖葛根素对非酒精性脂肪肝(NAFLD)模型小鼠的防治作用,及其对肝脂代谢的影响.方法 将32只雄性C57BL/6J小鼠随机分为正常组、模型组和低、高剂量实验组,每组8只.正常组给予普通维持饲料;其余3组饲养高脂饮食构建NAFLD模型.低、高剂量实验组分别灌胃给予5、10 mg·kg-1芹糖葛根素;正常组与模型组均灌胃给予等量二甲基亚砜.4组小鼠每天给药1次,连续给药8周.观察小鼠体质量变化,用试剂盒检测小鼠血清中谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)含量和肝组织中总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)含量,用蛋白质印迹法检测乙酰辅酶A羧化酶1(ACC1)和磷酸化5'-磷酸腺苷活化蛋白激酶(p-AMPK)蛋白的表达水平.结果 正常组、模型组和低、高剂量实验组的体质量分别为(32.69±1.37)、(45.51±3.29)、(41.18±3.22)和(38.28±2.62)g,血清 GPT 分别为(36.53±6.44)、(134.56±39.91)、(121.54±43.38)和(75.92±25.98)U·L-1,小鼠血清 GOT 分别为(60.81±8.74)、(188.51±39.70)、(156.02±41.67)和(126.79±16.49)U·L-1,肝 TC 分别为(2.17±0.24)、(6.46±1.22)、(5.86±0.66)和(3.62±0.45)mmol·L-1,肝 TG 分别为(0.57±0.09)、(1.39±0.27)、(1.28±0.34)和(0.73±0.19)mmol·L-1,ACC1蛋白相对表达水平分别为1.01±0.04、2.00±0.02、1.47±0.08 和 1.20±0.09,p-AMPK 蛋白相对表达水平分别为 1.03±0.09、0.33±0.02、0.66±0.04 和 0.95±0.08.模型组的上述指标与高剂量实验组和正常组相比较,在统计学上差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 芹糖葛根素通过调控AMPK信号通路,从而改善NAFLD小鼠的脂代谢.

目的:探讨SMARCA4(SWI/SNF-related,matrix-associated,actin-dependent regulator of chromatin,subfamily A,member 4)在铁死亡中的作用和分子机制.方法:(1)培养人纤维肉瘤细胞系HT1080,设置对照[二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)]组和不同浓度(31.25、62.5和125 nmol/L)Ras选择性致死小分子3(Ras-selec-tive lethal small molecule 3,RSL3;铁死亡诱导剂)处理组,每组3个复孔;利用Western blot检测细胞中SMARCA4蛋白水平.(2)利用2条小干扰RNA敲减HT1080细胞的SMARCA4基因,并将细胞分为阴性对照组和SMARCA4基因敲减(siSMARCA4-1和siSMARCA4-2)组,每组3个复孔;利用Western blot检测3组细胞中SMARCA4蛋白水平;利用高内涵细胞成像分析系统检测DMSO、坏死抑素2外消旋体(necrostatin 2 racemate,Nec-1s;坏死性凋亡抑制剂)、N-苯甲基氧化碳酰-缬氨酸-丙氨酸-天冬氨酸-氯化丙酮[Z-VAD(OMe)-FMK,Z-VAD;广谱caspase抑制剂/凋亡阻断剂]和铁抑素1(ferrostatin-1,Fer-1;铁死亡抑制剂)处理后3组细胞的存活率;利用RT-qPCR和流式细胞术检测3组细胞的铁死亡指标:前列腺素内过氧化物合成酶2(prostaglandin-endoperoxide synthase 2,PTGS2)基因转录、脂质过氧化、总活性氧(reactive oxygen species,ROS)、不稳定铁池(labile iron pool,LIP)和谷胱甘肽;利用RT-qPCR检测3组细胞中铁代谢基因、调控铁死亡的ROS调节基因和胆固醇合成关键基因的转录水平;利用高内涵细胞成像分析系统检测胆固醇处理后3组细胞的存活率.(3)对已发表的在线数据进行共同差异基因分析和基因本体论(gene on-tology,GO)富集分析.结果:(1)RSL3处理降低SMARCA4蛋白水平(P＜0.05).(2)敲减SMARCA4导致细胞铁死亡.(3)敲减SMARCA4不通过影响LIP或调控铁死亡的ROS调节基因的转录水平而导致铁死亡.(4)敲减SMARCA4影响细胞膜、脂筏相关通路和胆固醇合成;(5)补充胆固醇可以挽救敲减SMARCA4导致的铁死亡(P＜0.01).结论:铁死亡诱导剂RSL3处理降低人纤维肉瘤HT1080细胞中的SMARCA4蛋白水平,且敲减SMARCA4通过抑制胆固醇合成导致HT1080细胞铁死亡.

目的 建立糜烂性毒剂氮芥(nitrogen mustard,HN2)诱导小鼠急性肝损伤模型和HN2染毒HepG2细胞(人源性肝癌细胞系)损伤模型,探讨自噬在糜烂性毒剂致急性肝损伤中的作用及机制.方法 体内模型中,将20只C57BL/6雄性小鼠随机分为正常对照组和HN2染毒组;HN2染毒组小鼠给予腹腔注射盐酸氮芥(2 mg/kg),正常对照组小鼠给予腹腔注射等体积的生理盐水.染毒3天后收集血清和肝组织,测定血清天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)和丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)活性,进行肝组织苏木精-伊红(hematoxy-lin-eosin,HE)染色病理检测,电镜观察线粒体等细胞器形态,Western blot检测肝组织自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/Ⅰ比值和p62的蛋白表达.体外模型中,HepG2细胞分为正常对照组和HN2染毒组;正常对照组细胞给予含二甲基亚砜(dime-thyl sulfoxide,DMSO)(0.1％)的无血清培养基处理36 h.HN2染毒组细胞给予盐酸氮芥(8μmol/L)处理36h.采用细胞计数试剂盒(cell counting kit 8,CCK-8)检测细胞活性,单丹磺酰尸胺(monodansylcadaverine,MDC)探针法检测线粒体自噬改变,自噬双标腺病毒(mRFP-GFP-LC3)检测肝细胞自噬流的改变;在细胞模型中,给予自噬激动剂雷帕霉素(rapamycin,RAPA)和自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)预处理干预,检测细胞活力水平.结果 在体内模型中,与正常对照组比较,HN2染毒组小鼠血清ALT和AST活性显著升高(P均＜0.05),同时肝组织存在大量炎细胞浸润并伴有肝实质细胞损伤;肝实质细胞内出现大量自噬体,肝组织LC3-Ⅱ/Ⅰ比值升高(P＜0.05),同时p62的蛋白表达显著下调(P＜0.05).在体外模型中,与正常对照组相比,HN2染毒组细胞活性显著降低(P＜0.05),MDC荧光强度显著升高,自噬体数量增加(P均＜0.05).在HN2染毒细胞模型中,给予自噬激动剂RAPA预处理后细胞活力显著升高(P＜0.05),而给予自噬抑制剂3-MA预处理后细胞活力显著降低(P＜0.05).结论 HN2染毒能够诱导肝细胞发生自噬,细胞自噬可能是糜烂性中毒的关键性保护性反应,本研究为糜烂性毒剂诱导急性肝损伤的有效防治提供了新方向.