目的:对先天性心脏病（congenial heart disease，CHD）新发现的 TBX20基因错义突变c.785C>T（T262M）进行功能研究，进一步探寻T262M与CHD发生机制之间的相关性。 方法:①应用生物信息在线软件PolyPhen2和Mutation Taster对基因突变T262M的致病性进行预测分析。②采用同源建模技术分别构建野生型 TBX20及突变型 TBX20-T262M的蛋白质结构模型，对所构建的突变型和野生型蛋白质三维结构进行比对分析，预测突变后蛋白质空间构象的变化及影响。③通过分子模拟对接技术预测分析突变型T262M与野生型 TBX20相比较的功能变化。④采用实时荧光定量聚合酶链反应技术检测野生型及突变型 TBX20 mRNA的表达情况。⑤采用双荧光素酶报告基因检测T262M对下游靶基因 ANF启动子活性的影响。 结果:①PolyPhen2和Mutation Taster软件预测结果均为T262M具有致病性，蛋白质功能可能受到影响。②同源建模显示T262M造成侧链氢键丢失，导致蛋白质构象发生改变。③分子模拟对接显示突变型T262M与 NKX2.5、 GATA4之间的结合力较野生型 TBX20提高。④实时荧光定量聚合酶链反应结果显示无论单独转染 TBX20表达质粒还是共转染 GATA4、 NKX2.5情况下，突变型T262M的mRNA表达量均明显高于野生型 TBX20，差异具有统计学意义（ P<0.05）。⑤体外细胞实验双荧光素酶报告基因检测结果显示突变型 TBX20-T262M对下游靶基因 ANF启动子活性的影响与野生型 TBX20相比差异无统计学意义（ P>0.05）。 结论:新发现的 TBX20基因错义突变T262M有致病性，导致蛋白质空间构象发生改变，与 NKX2.5和 GATA4结合力提高，可能通过上调mRNA表达参与CHD的发生。

目的 探讨金诺芬(auranofin,ANF)逆转非小细胞肺癌(non-small cell cancer,NSCLC)细胞奥希替尼(osimer-tinib,Osi)获得性耐药的作用.方法 利用Osi敏感性NSCLC细胞株H1975和PC9,建立Osi获得性耐药的NSCLC细胞株H1975/OR和PC9/OR;通过CCK-8法在FDA批准的1 470种药物分子库中高通量筛选Osi获得性耐药的逆转剂,Compusyn软件计算Osi与ANF联用时的药物联合指数;CCK-8、EdU细胞增殖、流式细胞术、Transwell实验检测Osi、ANF及两者联用对Osi获得性耐药NSCLC细胞生长增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响;RNA-seq检测联合用药与单独用药后耐药株中差异变化的mRNA,目的基因和蛋白表达量用qRT-PCR和Western blot进行验证.结果 与Osi敏感性H1975和PC9细胞相比,H1975/OR和PC9/OR在Osi处理后生长增殖能力明显升高,凋亡率明显降低,其耐药指数分别为70.31和136.99;在FDA批准的1 470种药物分子库中,只有ANF可同时增强Osi对两种耐药细胞株的杀伤作用;1μmol·L-1ANF 与 2 μmol·L-1 Osi 联用时,对 NSCLC 细胞Osi获得性耐药的逆转作用最为显著,可明显抑制耐药细胞株的生长增殖与侵袭、迁移能力,提高细胞凋亡率;联合用药后HSPB8和LC3-Ⅱ/LC3-I上调导致自噬增多.结论 ANF与Osi联用增强Osi对NSCLC耐药细胞的敏感性,其机制与HSPB8的上调导致自噬增多有关.

目的 比较BACT/ALERT VIRTUO和BACTEC? FX两种血培养系统对模拟菌血症标本的检测能力.方法 本研究采用模拟的血培养,选用血流感染常见的3种革兰阴性杆菌、2种革兰阳性球菌、1种专性厌氧菌和两种念珠菌,9种检测的抗菌药物.比较的系统为BACT/ALERT VIRTUO血培养系统配合FA Plus需氧瓶(FA+)和FN Plus厌氧瓶(FN+),BACTEC? FX血培养系统配合含树脂的需氧培养瓶(AF)和含溶血素的厌氧培养瓶(ANF),检测每种微生物的检出率和阳性检出时间,并用色谱方法检测FA+、FN+、AF和ANF对万古霉素、美罗培南和氟康唑的吸收率.结果 在模拟的血培养中,在有抗菌药物的情况下,几种培养瓶的阳性检出率为VIRTUO 系统的 FN+(42/50,84.00％)＞VIRTUO FA+(30/50,60.00％)＞FX AF(20/50,40.00％),FX ANF溶血素厌氧瓶因为无抗菌药物吸附能力,检出率为0.FA+、FN+、AF和ANF的阳性检出时间中位数分别是13.96、16.22、20.30 h和＞120 h.抗菌药物浓度测试结果表明,VIRTUO FN+厌氧瓶对美罗培南的吸附效果非常显著,2 min时即可吸附约90％的美罗培南.结论 两个系统在有抗菌药物存在时,检出率及阳性检出时间均有差异.对微生物的检出,BACT/ALERT VIRTUO血培养系统要优于BACTEC? FX血培养系统.

急性坏死性筋膜炎(acute necrotising fasciitis,ANF)是一种由细菌感染造成皮肤至筋膜大面积快速溃烂坏死,甚至伴有全身中毒症状的致命性疾病[1].早期表现为受累肢体或组织红、肿、热、痛、硬,又被称为“痛性红色肿胀”,其发病急、进展快、全身反应重,如不及时诊断治疗,轻则截肢、重则危及生命.笔者就2016年我院曾收治1例ANF患者的诊治体会报道如下.

目的 通过Sanger测序,检测圆锥动脉干畸形(CTA)患儿中ZFPM2基因的突变情况,并探讨其致病性及相关分子机制.方法 对复旦大学附属儿科医院收治的非综合征型CTA患儿的心肌组织标本cDNA进行Sanger测序,检测ZFPM2基因的突变情况.构建ZFPM2、GATA4的表达载体和ANF启动子载体,并将ZFPM2突变型引入表达载体.采用免疫共沉淀(Co-IP)结合Western blotting的方法研究野生型或突变型ZFPM2与GATA4的相互作用.采用荧光素酶报告基因系统研究野生型或突变型ZFPM2对ANF启动子活性的影响.通过mRNA注射研究hZFPM2突变对斑马鱼心脏表型的影响.结果 ①对107例非综合征型CTA患儿进行Sanger测序,男64例,年龄1月至14岁(中位年龄8个月);包括单纯型法洛四联症(TOF)39例,TOF合并卵圆孔未闭(PFO)29例,TOF合并房间隔缺损(ASD)6例,TOF合并PFO和动脉导管未闭(PDA)8例,25例为复杂表型[如房室间隔缺损(AVSD)和左位上腔静脉(LSVC)等].②在1例TOF合并PFO的患儿中,发现位于ZFPM2基因外显子4的1个杂合错义变异c.397A>Gp.M133V(rs77117583),它仅出现在东亚人群,突变频率为0.3‰,位于ZFPM2蛋白的N端转录抑制结构域,该结构域对于ZFPM2调控的GATA4依赖性转录是必需的.③HEK293T细胞和HL-1细胞中的Co-IP结果均表明ZFPM2发生M133V突变后与GATA4的结合增强.④荧光素酶报告基因实验:人胚肾细胞株HEK293T和小鼠心肌细胞株HL-1中的结果均表明,ZFPM2发生M133V突变后,其抑制GATA4对ANF的转录激活的作用增强.⑤mRNA注射斑马鱼胚胎后心脏发育畸形情况:未注射的对照组、WT组和M133V突变体组心脏畸形发生率分别为11.3％、15.0％和27.5％,M133V突变体组高于其他两组(P<0.05).心脏异常表现为:心脏的环化发生异常,心房和心室与正常心脏呈镜像.结论 在1例CTA患儿中检测到1个ZFPM2低频变异c.397A>G,p.M133V,它可能通过影响ZFPM2与GATA4的结合及GATA4转录调控来参与CTA的发生.

目的 研究吴茱萸次碱(Rut)对腹主动脉缩窄(AAC)大鼠左室肥厚的抑制作用及其可能的机制.方法采用雄性SD大鼠制备腹主动脉缩窄左室肥厚模型,50只大鼠随机分为5组:假手术组、模型对照组和Rut小、中、大(10,20,40 mg?kg-1?d-1)剂量组,每组10只.于造模手术次日,Rut灌胃给药,连续4周,假手术和模型组灌胃等容量0.9％氯化钠溶液.最后一次给药后8 h,BL-420 E生物机能实验系统测量大鼠左心室血流动力学,记录大鼠体质量(BW),测量左室质量(LVW),计算左室肥厚指数(LWHI),行病理切片苏木精-伊红(HE)染色,观察心肌形态学的改变.实时反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测大鼠心房利钠因子(ANF)、细胞外信号调节激酶2(ERK2)和丝裂素活化蛋白激酶磷酸酶-1(MKP-1)mRNA的表达,Western blotting检测MKP-1和p-ERK2的蛋白表达.结果与假手术组比较,模型对照组LVW和LWHI明显增加(P<0.01),伴左室压力上升或下降最大速率(±dp/dtmax)显著降低(P<0.01),心肌病理学损伤和ANF mRNA表达的明显增加(P<0.01).与模型对照组比较,Rut中、大剂量组腹主动脉缩窄大鼠的LWHI明显降低(P<0.05)、左室收缩压(LVSP)和左室舒张期末压(LVEDP)明显降低(P<0.05),±dp/dtmax升高(P<0.01).Rut中、大剂量还能下调ANF、ERK2 mRNA和ERK2蛋白的表达,上调MKP-1 mRNA和蛋白的表达.与模型对照组比较,Rut小剂量组大鼠各项检测指标则无明显变化(P>0.05).结论Rut能明显防治大鼠腹主动脉缩窄所致左室肥厚,其作用机制至少部分与其抑制MAPK/ERK信号通路有关.

The RasGAP SH3 domain-binding proteins (G3BPs) are a family of RNA-binding proteins that can co-ordinate signal transduction and post-transcriptional gene regulation.G3BPs have been shown to be involved in mediating a great diversity of cellular processes such as cell survival,growth,proliferation and apoptosis.But the potential roles of G3BPs in the pathogenesis and progression of cardiovascular diseases remain to be clarified.In the present study,we provide the first evidence that suggests the participation of G3BP2 in cardiac hypertrophy.In cultured neonatal rat cardiomyocytes (NRCMs),treatment with isoproterenol (ISO,0.1-100 μmol/L)significantly elevated the mRNA and protein levels of G3BP2.Similar results were observed in the hearts of rats subjected to 7D-injection of ISO,accompanied by obvious heart hypertrophy and elevated the expression of hypertrophy marker genes ANF,BNP and β-MHC in heart tissues.Overexpression of G3BP2 in NRCMs led to hypertrophic responses evidenced by increased cellular surface area and the expression of hypertrophy marker genes,whereas knockdown of G3BP2 significantly attenuated ISO-induced hypertrophy of NRCMs.We further showed that G3BP2 directly interacted with IκBα and promoted the aggregation of the NF-κB subunit p65 in the nucleus and increased NF-κB-dependent transcriptional activity.NF-κB inhibition with PDTC (50 μmol/L) or p65 knockdown significantly decreased the hypertrophic responses in NRCMs induced by ISO or G3BP2 overexpression.These results give new insight into the functions of G3BP2 and may help further elucidate the molecular mechanisms underlying cardiac hypertrophy.

目的:探讨长期高强度间歇训练(HIIT)诱导大鼠心肌肥大过程中心功能以及线粒体呼吸链活性的变化.方法:将90只健康Wistar大鼠随机分为HIIT组、持续中等强度训练(MICT)组和安静对照组(RC),每组按照观察时间点(2周、6周和10周)再分为3个亚组,共9组,每组10只.实验结束后利用超声心动图检测大鼠心功能,称量体重和心脏重量,心肌匀浆后用差速离心法提取心肌线粒体,分别测定心肌和线粒体柠檬酸合酶(CS)活性、呼吸链复合体Ⅰ～Ⅳ(C Ⅰ～Ⅳ)活性以及心肌过氧化物酶体增生物激活受体1 α(PGC-1α)、α-肌球蛋白重链(α-MHC)、β-MHC、心钠素(ANF)和脑钠素(BNP)蛋白表达量.结果:HIIT组、MICT组大鼠分别于第2～10周和第10周出现心肌肥大.第2周和10周时,各组心功能、呼吸链复合体活性以及各蛋白表达量均无显著性差异(P＞0.05).第6周时,HIIT组左心室射血分数(LVEF)、左心室缩短分数(LVFS)、心肌α-MHC蛋白表达量以及呼吸链复合体CⅠ、CⅢ、CⅣ活性低于RC组和MICT组(P＜0.05),心肌β-MHC和BNP表达量则高于RC组和MICT组(P＜0.05).结论:长期HIIT(而非MICT)能够诱导大鼠暂时性病理性心肌肥大以及心功能下降,其机制可能与心肌线粒体呼吸链复合体活性下调有关.

目的 观察吴茱萸次碱(rutaecarpine,Rut)对压力超负荷所致大鼠左心室结构及功能的影响.方法 通过腹主动脉缩窄术(abdominal aortic constriction,AAC)制作心肌肥厚模型,造模4周后,随机分为AAC组、吴茱萸次碱低、高剂量组(10、20 mg/kg/d,po)和假手术(Sham)组.连续给药4周后测量大鼠尾动脉血压,并利用高分辨率小动物超声系统检测大鼠心脏结构和功能改变;分离组织计算左心室肥厚指数(LVHI);H&E染色观察左室心肌组织形态学变化;qRT-PCR法检测心肌心房钠尿肽(atrial natriuretic peptide,ANF) mRNA表达.结果 与Sham组比较,AAC大鼠血压明显升高(P＜0.05),LVHI显著增加;超声结果显示左室前壁(LVAW)和后壁(LVPW)厚度均大于Sham组(P＜0.05);而收缩及舒张期左室内径(LVID)低于Sham组;心功能指标左心室收缩末期心室容积(LV Vol.s)及舒张末期心室容积(LV Vol.d)和每搏输出量(SV)小于Sham组(P ＜0.05,P＜0.01),表明左室肥厚且收缩与舒张功能出现异常.H&E染色显示AAC组心肌细胞排列紊乱且细胞间隙增宽,伴有肌丝部分断裂;心肌组织ANF mRNA表达明显增加;给予吴茱萸次碱低、高剂量治疗后,血压显著降低(P＜0.05),LVHI明显减小;收缩期及舒张期LVAW及LVPW显著下降(P ＜0.05,P＜0.01),同时收缩及舒张期LVID和LV Vol.及SV的值增大(P ＜0.05,P＜0.01),表明吴茱萸次碱可有效改善左心室结构和心肌收缩舒张功能障碍;H&E染色观察发现心肌细胞排列趋于整齐且细胞间隙缩窄,未见明显肌丝断裂;同时下调心肌ANF mRNA水平的表达(P＜0.05).结论 吴茱萸次碱可显著改善腹主动脉缩窄术所致大鼠左室结构及心功能损害.

目的 探索慢性阻塞性肺疾病(慢阻肺)肺小动脉重塑情况,观察其对近端肺动脉血液流变学、右心室结构和功能的影响及机制.方法 回顾性分析2016年9月至2017年3月宁夏医科大学总医院收治的因肺部肿瘤行手术治疗的患者共34例,其中男25例,女9例,年龄40～65岁,平均(56±8)岁.根据术前肺功能分为慢阻肺合并肺部肿瘤组(慢阻肺组)15例及肺功能正常合并肺部肿瘤组(对照组)19例.所有纳入患者术前接受心脏核磁共振扫描获取近端肺动脉血液流变学、右心室结构及功能改变.术中取病变周围正常的肺组织采用HE、改良Weigert弹力纤维染色观察肺小动脉形态学改变;免疫组化检测肺小动脉 α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、增殖细胞核抗原(PCNA)定位及表达;免疫印迹和实时荧光定量PCR检测肺组织 α-SMA蛋白及mRNA表达水平.结果 慢阻肺组与对照组平均肺动脉压(mPAP)分别为(24.0±3.7)和(22.8±1.6)mmHg(1 mmHg=0.133 kPa),组间比较差异无统计学意义(P>0.05).慢阻肺组主肺动脉扩张度(mPAD％)为(44±11)％,低于对照组[(57±14)％,P<0.05];慢阻肺组肺小动脉平滑肌厚度(WT)、平滑肌厚度占血管外径百分比(WT％)及平滑肌面积占血管总面积百分比(WA％)分别为(37±18)μm、(65±19)％和(55±23)％,均高于对照组[(19±3)μm、(29±5)％和(40±7)％,均P<0.05].右心室舒张末期(RVMED)、收缩末期心肌质量(RVMES)、平均反向流量(ANF)及反流分数(RF％)均高于对照组(均P<0.05),单位面积肺小动脉平滑肌细胞数及细胞增殖率较对照组增高(均P<0.01).慢阻肺组肺组织免疫组化 α-SMA蛋白和mRNA表达高于对照组(均P<0.05).相关分析结果显示WA％、WT％与mPAD呈负相关,与RVMES、RVMED、RF％呈正相关.结论 在尚未出现肺动脉高压的情况下,慢阻肺患者已存在以小动脉重塑和肺动脉血液流变学改变为特征的血管病变及右心心肌的结构改变,且小动脉重塑影响主肺动脉血液流变学改变进而影响右心心肌结构改变.