目的:研究结核分枝杆菌Rv0446c的抗原表位及其免疫原性，为结核病的免疫诊断技术及疫苗研发提供候选抗原及表位。方法:利用生物信息学软件TE-predict和IEDB的T细胞表位预测软件对结核分枝杆菌抗原Rv0446c进行T细胞表位预测，用ELISPOT实验检测表位在2019年1月到2020年12月期间来自佛山市第四人民医院和福州肺科医院的结核病患者（50例）、肺部疾病患者（39例）及健康志愿者（55例）中的免疫反应性。将60只6周龄BALB/c小鼠随机分成10组，每组6只，分别采用PBS、血蓝蛋白（KLH）、高剂量结核分枝杆菌抗原Ag85B（50 μg/只）、低剂量Ag85B（20 μg/只）、高计量P120、低剂量P120、高计量P121、低剂量P121、高剂量P123、低剂量P123（P120、P121、P123高剂量为100 μg/只、低剂量为50 μg/只）多肽对其皮下免疫，每只小鼠免疫3次，每次间隔2周，末次免疫后4周，应用ELISA方法检测各组小鼠脾细胞产生的IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10细胞因子水平。结果:预测的7条表位多肽中，ELISPOT试验筛选出4条阳性T细胞表位多肽P120、P121、P122、P123，在结核病患者中检测灵敏度和特异度分别为30.0%、18.0%、6.0%、22.0%和96.8%、98.9%、100%、96.8%。与对照PBS组和KLH组比较，P120多肽能刺激小鼠产生较高水平的IFN-γ、IL-4、IL-10，P121多肽刺激小鼠产生较高水平的IFN-γ和IL-4（均 P<0.05），P123多肽刺激小鼠产生较高水平的IFN-γ（均 P<0.05）。P120、P121、P123多肽刺激小鼠产生的IL-2的水平高于PBS组低于Ag85B-L组和Ag85B-H组（均 P<0.05），但与KLH组差异无统计学意义（均 P>0.05）。 结论:Rv0446c蛋白及其T细胞表位具有较好的免疫原性及免疫反应性，能刺激机体产生强烈的细胞免疫应答，可用于结核病的临床诊断技术研究和新型结核亚单位疫苗的构建。

目的:探讨重组卡介苗(BCG)的抗膀胱癌作用，评估膀胱内灌注重组BCG对大鼠生存的影响。方法:构建稳定表达白细胞介素(IL)-15和Ag85B的重组BCG菌株(BCG-IL-15-Ag85B)，建立大鼠膀胱癌模型，分为BCG-IL-15-Ag85B灌注组，BCG灌注组和磷酸盐缓冲液(PBS)灌注组。观察并记录各组大鼠的生存情况，测量各组大鼠肿瘤的体积，以评估抗肿瘤效果；流式细胞术检测不同组别膀胱组织内嗜中性粒细胞和淋巴细胞的水平，荧光定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测不同组别中巨噬细胞炎症蛋白1α(MIP1α)和MIP2 mRNA的表达水平。组间比较采用独立样本 t检验。 结果:成功构建可表达IL-15融合蛋白的重组BCG，BCG-IL-15-Ag85B可显著延长荷瘤大鼠的生存时间以及抑制肿瘤的生长。BCG-IL-15-Ag85B灌注组(607.33±18.45)的中性粒细胞数目明显高于BCG灌注组(405.00±24.64)和PBS灌注组(204.67±20.55)，差异有统计学意义( t＝11.386， P<0.05)；BCG-IL-15-Ag85B灌注组(114.67±15.82)的淋巴细胞数目明显高于BCG灌注组(50.00±10.00)和PBS灌注组(17.67±2.52)，差异有统计学意义( t＝5.984， P<0.05)。BCG-IL-15-Ag85B灌注组(2.78±0.57)的MIP1α mRNA的表达水平明显高于BCG灌注组(1.76±0.13)和PBS灌注组(1.00±0.06)，差异有统计学意义( t＝5.327， P<0.05)。BCG-IL-15-Ag85B灌注组(2.96±0.62)的MIP2 mRNA的表达水平明显高于BCG灌注组(1.88±0.16)和PBS灌注组(1.00±0.07)，差异有统计学意义( t＝5.674， P<0.05)。 结论:膀胱内灌注BCG-IL-15-Ag85B增强了膀胱组织的免疫应答，提高了抗肿瘤效果，为膀胱癌的临床治疗提供新思路和新策略。

目的:利用表达结核分枝杆菌蛋白Ag85B、ESAT-6、Rv2031c和Rv2626c的重组腺病毒(Ad-AE-R2)滴鼻黏膜免疫小鼠，探究其对哮喘小鼠气道炎症的免疫预防作用。方法:本研究为实验研究，采用单纯随机抽样方法。将18只6~8周龄BALB/c雌性小鼠随机分为3组：空白对照组、哮喘模型组和免疫预防组，每组6只。免疫预防组滴鼻免疫10 8 PFU Ad-AE-R2，空白对照组和哮喘模型组滴鼻等量生理盐水。小鼠免疫3周后，利用卵清蛋白诱导免疫预防组和哮喘模型组小鼠哮喘。空白对照组用生理盐水雾化作为对照。末次激发小鼠哮喘24 h后，麻醉处死各组小鼠，检测小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)和外周血中IgE和γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素5(IL-5)、IL-13等细胞因子的含量，HE染色观察肺组织病理学改变。 结果:与空白对照组相比，哮喘模型组BALF和血清中的IgE含量增加(均 P<0.05)，BALF中IFN-γ/IL-5下降( P<0.01)。与哮喘模型组相比，免疫预防组BALF中IL-13含量降低( P<0.01)，BALF和血清中IFN-γ/IL-5升高(均 P<0.05)。小鼠肺组织病理切片HE染色结果表明，与空白对照组相比，哮喘模型组小鼠肺组织结构出现明显损伤，气道黏膜上皮细胞局部脱落，管壁及基底膜显著增厚，气道及血管周围可见大量炎症细胞浸润；与哮喘模型组相比，免疫预防组小鼠肺组织中的炎症性病理改变明显减轻。 结论:利用卵清蛋白成功诱导小鼠气道炎症，建立小鼠哮喘模型。Ad-AE-R2黏膜免疫可以提升小鼠气道Th1型免疫反应，促进Th1/Th2型细胞因子平衡，对小鼠哮喘具有一定的预防保护效果，为哮喘的免疫预防提供研究参考。

目的:探讨丁型肝炎患者的流行状况及临床特征。方法:筛查2010年1月1日至2020年12月31日陆军军医大学西南医院感染病研究所HBsAg阳性病例832 144例，进行HDV-Ag和(或)HDV-IgG检测，共13 585例。最终收集157例丁型肝炎患者的资料，年龄22~85(53±13)岁，其中男性122例，女性35例。对丁型肝炎的流行状况、临床特征及随访28天的转归、及其影响因素进行分析。结果:近10年间，丁型肝炎筛查率仅1.6%(13 585/832 144)，2011年筛查率最高，达4.13%(962/23 289)；筛查阳性率平均1.17%(157/13 346)，2012年筛查阳性率最高，达3.56%(58/1 627)。病源分布：重庆66.24%(104/157)、四川22.93%(36/157)、贵州8.28%(13/157)、云南1.27%(2/157)、江西和西藏各0.64%(1/157)。病情程度：18.47%(29/157)慢性轻中度肝炎、23.57%(37/157)慢性重度肝炎、28.66%(45/157)慢加急性肝衰竭、27.39%(42/157)代偿或失代偿肝硬化、1.91%(3/157)原发性肝细胞癌。病情进展的发生率由高到低依次为：慢加急性肝衰竭48.89%(22/48)>原发性肝细胞癌33.33%(1/3)>肝硬化25.58%(11/43)>慢性重度肝炎18.92%(7/37)>慢性轻中度肝炎6.90%(2/29)( P<0.05)。其中，7.64%(12/157)合并肝性脑病；3.82%(6/157)合并其他病毒感染，包括HCV、EBV、CMV。Logistic回归分析，高龄、合并肝性脑病、高胆红素血症、凝血酶原时间延长是影响丁型肝炎患者转归的独立危险因素。 结论:近10年，丁肝的筛查率低，阳性率不高。HDV感染会加速肝炎进展，增加发生肝脏不良事件风险，值得重视。

目的 探究Al(OH)3和CpG寡核苷酸免疫佐剂对结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)Ag85B蛋白免疫原性的影响.方法 将Mtb Ag85B蛋白在大肠埃希菌中进行重组表达,经亲和层析纯化后分别与Al(OH)3、CpG寡核苷酸(简称CpG)及Al(OH)3和CpG组成的复合佐剂[Al(OH)3+CpG]配伍,经皮下免疫BALB/c小鼠,初免后 28d加强免疫1 次,分别于初免后14、42 和56d采集免疫血清,采用ELISA检测血清中Ag85B特异性IgG、lgG1、IgG2a和IgG2b水平;初免后 42 d,每组取 4 只小鼠无菌分离脾淋巴细胞,利用酶联免疫斑点检测各组细胞中分泌γ干扰素和白介素 4 的淋巴细胞数量,采用流式细胞术检测各组细胞中CD4+T和CD8+T淋巴细胞的比例.结果 1.5 μg或 4.5 μg Ag85B重组蛋白与Al(OH)3+CpG配伍免疫后均诱导了高水平的Ag85B特异性IgG,免疫效果优于该蛋白与 2 种佐剂单独配伍组.1.5 μg或 4.5 μg Ag85B重组蛋白与 Al(OH)3+CpG配伍免疫血清中IgG亚型为IgG1、IgG2a和IgG2b混合型,其中IgG2a和IgG2b水平均高于Al(OH)3配伍免疫组,差异均有统计学意义(P均<0.001).酶联免疫斑点检测显示,4.5 μg Ag85B重组蛋白与Al(OH)3+CpG配伍免疫小鼠的脾淋巴细胞中分泌γ干扰素和白介素 4 的淋巴细胞数量均高于Al(OH)3配伍免疫组,差异均有统计学意义(P均<0.05);流式细胞术检测显示,1.5 μg或4.5 μg Ag85B重组蛋白与Al(OH)3+CpG配伍免疫小鼠的T淋巴细胞中CD4+T淋巴细胞的占比均高于Al(OH)3 配伍免疫组.结论 Al(OH)3 和CpG联合使用可能协同增强Ag85B重组蛋白的免疫原性.

目的 探讨老年慢性阻塞性肺疾病(COPD)合并结核分枝杆菌感染的危险因素及对γ-干扰素(IFN-γ)、可溶性白细胞介素-2受体(sIL-2R)、抗原85B(Ag85B)水平的影响.方法 选取2018年8月-2023年5月宜兴市人民医院收治的104例老年COPD合并结核分枝杆菌感染患者为研究组,随机选取同期104例单纯COPD患者为对照组,分析老年COPD患者合并结核分枝杆菌感染的危险因素,检测两组患者血清IFN-γ、sIL-2R、Ag85B表达水平.结果 多因素Logistic回归分析结果显示,年龄大、吸烟史、粉尘暴露史、吸入糖皮质激素、营养不良均是老年COPD患者合并结核分枝杆菌感染的危险因素(OR=1.992、2.092、2.162、1.964、2.132;P＜0.05);研究组血清IFN-γ、sIL-2R、Ag85B水平均高于对照组(P＜0.05),且随结核病变程度加重而上升(P＜0.05).结论 老年COPD合并结核分枝杆菌感染与年龄、吸烟史、粉尘暴露史、吸入糖皮质激素及营养不良等密切相关,并导致血清IFN-γ、sIL-2R、Ag85B水平升高,且随结核病变程度加重而上升.

目的 建立检测重组结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)Ag85b蛋白原液纯度的反向高效液相色谱法,并进行验证.方法 设计4因素3水平正交试验,将面积、拖尾因子、峰面积、峰面积RSD作为评价指标进行分析,摸索最适检测条件,并依据《中国药典》四部(2020版)9101药品质量标准分析方法验证指导原则进行专属性、线性范围、精密度、耐用性等验证.结果 当检测条件为有机相洗脱比例30％～95％、检测温度35 ℃、进样量3 μg、95％有机相洗脱时间15 min时,各评价指标结果均较好,在该检测条件下线性相关系数(R2)为0.998 5,线性范围为1.8～4.2 μg;重复性RSD为0.01％;中间精密度RSD为0.16％;在柱温与流速细微变动下均具有良好的耐用性.结论 建立了重组MTBAg85b蛋白原液纯度检测的反向高效液相色谱法,该方法专属性强,精密度、耐用性好,可用于重组MTBAg85b蛋白原液质量控制.

目的 探讨B及T淋巴细胞弱化因子(BTLA)、细胞毒性T淋巴细胞抗原-4(CTLA-4)基因多态性与肝癌经动脉插管化疗栓塞(TACE)联合靶向治疗疗效及预后相关性.方法 选取2021年1月至2021年12月期间南通大学附属医院介入放射科收治的新发85例肝癌患者作为研究对象,均行TACE联合靶向治疗,根据RECIST实体瘤疗效评价标准将患者分为治疗有效组(n=58)、疾病进展组(n=27),比较2组临床资料、BTLA、CTLA-4基因多态性,分析BTLA、CTLA-4基因多态性与疗效的相关性,并于治疗后18个月电话随访生存状况,对比不同基因型患者生存状况,分析其与生存预后的相关性.结果 CTLA-4rs231775、rs733618、rs3087243、rs4553808 位点、BTLA rs2171513、rs3112270、rs1982809、rs16859629 位点基因型均符合 Hardy-Weinberg遗传平衡定律;治疗有效组BTLA rs3112270位点AG、GG基因型比例、rs1982809位点GA、AA比例、rs16859629位点CC基因型、CTLA-4 rs231775位点AA基因型比例、rs3087243位点GA、AA基因型低于疾病进展组,BTLA rs3112270位点AA基因型比例、rs1982809位点GG比例、rs16859629位点TT基因型、CTLA-4rs231775位点GG基因型比例、rs3087243位点GG基因型高于疾病进展组(P＜0.05);单因素、多因素分析显示,BTLArs3112270A＞G、rs1982809 G＞A、rs 16859629 T＞C、CTLA-4 rs231775 A＞G、rs3087243 G＞A与疗效相关(P＜0.05);BTLA rs3112270位点AA、AG基因型患者18个月生存率高于GG基因型患者,rs1982809位点GG、GA基因型患者18个月生存率高于AA基因型患者,rs16859629位点TT基因型患者18个月生存率高于TC、CC基因型患者(P＜0.05);CTLA-4 rs231775位点GG、GA基因型患者18个月生存率高于AA基因型患者、rs3087243位点GG基因型18个月生存率高于GA、AA基因型患者(P＜0.05);单因素、多因素分析显示,BTLA rs3112270 A＞G、rs1982809 G＞A、rs16859629 T＞C、CTLA-4 rs231775 A＞G、rs3087243 G＞A 与生存预后相关(P＜0.05).结论 BTLA 基因 rs3112270、rs1 982809、rs16859629、CTLA-4 基因rs231775、rs3087243位点多态性与肝癌TACE联合靶向治疗疗效、预后密切相关,以期为预估TACE治疗提供参考.

目的:探讨结核分枝杆菌分泌性抗原Ag85B在肺结核组织中的分布特点,初步分析其在肺结核病理学诊断中的应用价值.方法:收集医院病理科手术切除的肺结核组织标本19例,以非肺结核肺组织(肺癌切除标本正常组织断端20例)为阴性对照.通过免疫组化检测Ag85B的表达情况,并与抗酸染色进行对比.结果:Ag85B免疫组化阳性信号主要沉积在结核坏死灶及周围,分布与抗酸杆菌相关、范围更广.19例肺结核标本中,10例抗酸染色阳性,抗酸染色敏感度为52.63％(10/19);10例抗酸染色阳性的标本免疫组织化学染色全部阳性,9例抗酸染色阴性的标本中免疫组化阳性的标本有6例,免疫组化敏感度为84.21％(16/19).20例阴性对照组中,3例免疫组化呈阳性,免疫组化特异度为85.00％(17/20).结论:Ag85B免疫组化阳性信号表达范围比抗酸杆菌分布更广,较抗酸染色具有更高的敏感性,可作为结核确诊的一种补充手段.

目的 探讨免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)及PCR技术在淋巴结结核病理学诊断中的应用价值.方法 收集首都医科大学附属北京胸科医院病理科保存的2012年1月至2013年7月之间的48例手术根治切除淋巴结结核患者(结核组)和21例非淋巴结结核患者(非结核组)的石蜡包埋组织标本,分别应用IHC染色、荧光定量PCR和抗酸染色法对标本进行检测,以临床最后诊断为金标准,比较各方法的检测效能.结果 IHC染色、荧光定量PCR及抗酸染色检测的敏感度分别为52.1％ (25/48)、60.4％ (29/48)及27.1％(13/48);IHC染色和荧光定量PCR检测敏感度均高于抗酸染色,差异均有统计学意义(χ2值分别为6.27、10.84, P值分别为0.012、0.001);而IHC(:染色与荧光定量PCR比较,敏感度差异无统计学意义(;X2=0.68,P=0.411).IHC染色、荧光定量PCR及抗酸染色法检测非结核组结果均为阴性,特异度均为100％(21/21).IHC染色、荧光定量PCR及抗酸染色法的阴性预测值分别为47.7％(21/44)、52.5％(21/40)、37.5％(21/56);符合率分别为66.7％(46/69)、72.5％(50/69)、49.3％(34/69),IHC染色、荧光定量PCR均优于抗酸染色法.结论 IHC染色、荧光定量PCR与抗酸染色法相比,可提高阳性检出率,在淋巴结结核的病理学诊断中具有良好应用价值.