目的:评价海马乙醛脱氢酶2(ALDH2)在大鼠心肌缺血再灌注后记忆功能减退中的作用。方法:健康雄性SD大鼠24只，2~3月龄，体重220~280 g，采用随机数字表法分为3组( n＝8)：假手术组(S组)、心肌缺血再灌注组(I/R组)和ALDH2激动剂ALDA-1组(ALDA-1组)。采用结扎左冠状动脉前降支30 min再灌注120 min的方法制备心肌缺血再灌注损伤模型。ALDA-1组于缺血前5 min腹腔注射ALDA-1 10 mg/kg。于造模前6 d开始进行Morris水迷宫定位航行训练，模型制备后24 h进行Morris水迷宫空间探索实验。行为学实验结束以后处死大鼠，取海马组织，HE染色观察病理学结果，TUNEL法确定细胞凋亡指数(AI)，比色法检测ALDH2活性，ELISA法检测4-羟基壬烯酸(4-HNE)和MDA含量，Western blot法检测ALDH2和4-HNE的表达水平。 结果:与S组比较，I/R组穿越原平台位置次数减少，目标象限停留时间缩短，海马组织ALDH2活性降低，4-HNE表达上调，4-HNE、MDA含量和AI升高( P<0.05)；与I/R组比较，ALDA-1组穿越原平台位置次数增加，目标象限停留时间延长，ALDH2活性升高，4-HNE表达下调，4-HNE、MDA含量和AI降低( P<0.05)；3组海马组织ALDH2表达差异无统计学意义( P>0.05)。 结论:大鼠心肌缺血再灌注后记忆功能减退的发生机制可能与海马ALDH2活性降低，促进醛类物质蓄积有关。

目的:评价Alda-1对猪心脏停搏复苏后心肌组织细胞铁死亡的影响。方法:普通级国产健康雄性大白猪22头，体重35~43 kg，采用随机数字表法分为3组：假手术组(S组， n＝6)、心脏停搏复苏组(CA-CPR组， n＝8)和Alda-1组( n＝8)。S组只进行动物准备，CA-CPR组和Alda-1组通过右心室电极放电诱发心脏停搏8 min、心肺复苏8 min的方法制备猪心脏停搏复苏模型。Alda-1组于复苏后5 min静脉注射Alda-1 0.88 mg/kg，另2组注射等量溶媒。于造模前及复苏后1、2和4 h(T 0~3)时应用PiCCO法测定每搏输出量(SV)和全心射血分数(GEF)。于T 0~3及复苏后24 h(T 4)时，经股静脉采集静脉血标本，应用ELISA法检测血清cTnI浓度。随后处死动物，取左室心肌组织，应用Western blot法检测长链脂酰辅酶A合成酶4 (ACSL4)与谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)的表达，普鲁士蓝染色法检测铁沉积水平，ELISA法检测4-羟基-2-壬烯醛(4-HNE)含量，比色法检测丙二醛(MDA)和还原型谷胱甘肽(GSH)含量。 结果:与S组比较，CA-CPR组和Alda-1组T 1~3时SV和GEF降低，T 1~4时血清cTnI浓度升高，心肌ACSL4表达上调，GPX4表达下调，铁沉积水平、4-HNE和MDA含量升高，GSH含量降低( P<0.05)；与CA-CPR组比较，Alda-1组T 2，3时SV和GEF升高，T 3，4时血清cTnI浓度降低，心肌ACSL4表达下调，GPX4表达上调，铁沉积水平、4-HNE和MDA含量降低，GSH含量升高( P<0.05)。 结论:Alda-1可减轻猪心脏停搏复苏后心肌损伤，进而改善心功能障碍，其机制可能与抑制细胞铁死亡有关。

目的:探讨乙醛脱氢酶2特异性激活剂Alda-1是否通过抑制长链脂酰辅酶A合成酶4?/谷胱甘肽过氧化物酶4（ACSL4/GPx4）通路介导的铁死亡过程来减轻猪心肺复苏（CPR）后脑损伤。方法:将22只普通级健康雄性白猪按照随机数字表法分为假手术（Sham）组（ n＝6）、CPR模型组（ n＝8）和Alda-1干预组（CPR+Alda-1组， n＝8）。采用经右心室电刺激致颤诱导心搏骤停8 min后CPR 8 min的方法制备猪CPR模型；Sham组仅进行相关准备操作。CPR+Alda-1组于复苏后5 min静脉注射Alda-1 0.88 mg/kg；Sham组和CPR模型组注射等量生理盐水。各组分别于制模前及复苏后1、2、4、24 h取股静脉血，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测神经元特异性烯醇化酶（NSE）和S100β蛋白的血清水平。于复苏后24 h采用神经功能缺损评分（NDS）评估动物神经功能状态；然后处死动物取大脑皮质，采用普鲁士蓝染色法检测铁沉积水平，采用比色法检测丙二醛（MDA）和还原型谷胱甘肽（GSH）含量，采用蛋白质免疫印迹试验（Western blotting）检测ACSL4及GPx4的蛋白表达水平。 结果:与Sham组比较，CPR模型组和CPR+Alda-1组NSE及S100β血清水平均随复苏后时间延长呈持续升高趋势，且复苏后24 h NDS评分及大脑皮质铁沉积水平和MDA含量明显升高，大脑皮质GSH含量及GPx4蛋白表达明显下降，ACSL4蛋白表达明显上调，说明CPR术后大脑皮质细胞发生铁死亡，且ACSL4/GPx4通路参与该组织细胞铁死亡的过程。与CPR模型组比较，CPR+Alda-1组复苏后2 h起NSE及S100β血清水平即明显降低〔NSE（μg/L）：24.1±2.4比28.2±2.1，S100β（ng/L）：2?279±169比2?620±241，均 P<0.05〕，且复苏后24 h NDS评分及大脑皮质铁沉积水平和MDA含量明显降低〔NDS评分（分）：120±44比207±68，铁沉积：（2.61±0.36）%比（6.31±1.66）%，MDA（μmol/g）：2.93±0.30比3.68±0.29，均 P<0.05〕，大脑皮质GSH含量及GPx4蛋白表达明显升高〔GSH（mg/g）：4.59±0.63比3.51±0.56，GPx4蛋白（GPx4/GAPDH）：0.54±0.14比0.21±0.08，均 P<0.05〕，ACSL4蛋白表达明显下调（ACSL4/GAPDH：0.46±0.08比0.85±0.13， P<0.05），说明Alda-1可能通过调控ACSL4/GPx4通路减轻猪CPR后大脑皮质细胞铁死亡程度。 结论:Alda-1可减轻猪CPR后脑损伤，该保护作用可能与抑制ACSL4/GPx4通路介导的铁死亡过程有关。

目的:观察盲肠结扎穿孔术（CLP）诱导的脓毒症小鼠肝损伤时不同途径铁死亡的发生，探讨线粒体乙醛脱氢酶2（ALDH2）是否通过抑制铁死亡减轻脓毒症肝损伤。方法:选取60只8周龄雄性C57BL/6J小鼠，按随机数字表法分为假手术（Sham)组、CLP组、铁死亡抑制剂铁抑素-1（Fer-1）组、ALDH2特异性激动剂Alda-1组、铁螯合剂右雷佐生（DXZ）组、二甲基亚砜（DMSO）组，每组10只。采用CLP法建立小鼠脓毒症肝损伤模型；Sham组仅开腹不结扎和穿刺盲肠。DMSO组、Fer-1组、DXZ组和Alda-1组分别于CLP术前1 h腹腔注射10 mL/kg 5% DMSO、5 mg/kg Fer-1、50 mg/kg DXZ和10 mg/kg Alda-1。术后24 h，麻醉小鼠取眼球血及肝组织。苏木素-伊红（HE）染色，镜下观察肝脏结构和炎症浸润情况；检测各组血清丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）水平及肝组织丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、活性氧（ROS）水平；蛋白质免疫印迹试验（Western blotting）检测肝组织ALDH2、铁死亡相关蛋白谷胱甘肽过氧化物酶4（GPX4）、铁死亡抑制蛋白1（FSP1）和转铁蛋白受体1（TFR1）的蛋白表达。结果:与Sham组相比，CLP组小鼠术后24 h肝脏可见不同程度淤血、肝细胞排列紊乱及炎症细胞浸润；与CLP组相比，Fer-1组、DXZ组和Alda-1组小鼠肝脏形态学有改善，损伤减轻，炎症细胞浸润减少。与Sham组相比，CLP组血清ALT、AST水平及肝组织MDA、ROS含量和TFR1蛋白表达显著升高，肝组织SOD活性及ALDH2、GPX4和FSP1蛋白表达显著降低。与CLP组相比，Fer-1组、DXZ组和Alda-1组血清ALT、AST水平显著降低〔ALT（U/L）：45.76±10.81、37.30±2.98、36.40±12.75比73.06±12.20，AST（U/L）：61.57±2.69、52.41±6.92、56.05±8.29比81.59±5.46，均 P<0.05〕，肝组织MDA、ROS含量及TFR1蛋白表达显著降低〔MDA（μmol/L）：0.60±0.10、0.57±0.18、0.83±0.39比1.61±0.30，ROS（荧光强度）：270.34±9.64、276.02±62.33、262.05±18.55比455.38±36.07，TFR1/GAPDH：0.90±0.04、1.01±0.09、0.55±0.08比1.18±0.06，均 P<0.05〕，肝组织SOD活性及ALDH2、GPX4、FSP1蛋白表达显著升高〔SOD（kU/g）：88.77±8.20、88.37±4.47、93.43±7.24比50.27±3.57，ALDH2/GAPDH：1.10±0.15、1.02±0.07、1.14±0.07比0.70±0.04，GPX4/GAPDH：1.02±0.12、0.99±0.08、1.05±0.19比0.71±0.10，FSP1/GAPDH：1.06±0.24、1.02±0.08、0.93±0.09比0.66±0.03，均 P<0.05〕。DMSO组各指标与CLP组差异无统计学意义。 结论:GPX4和FSP1介导的铁死亡均参与脓毒症小鼠肝损伤，激动ALDH2、抑制铁死亡可减轻肝损伤，ALDH2可能通过调控GPX4和FSP1介导的铁死亡发挥保护作用。

缺血再灌注损伤(IRI)是指血供中断再通后，组织器官损伤加重的过程，其损伤机制复杂，主要包括氧化应激、钙超载、炎性反应等，由此引起的临床疾病称为再灌注综合征。乙醛脱氢酶2(ALDH2)是人体乙醇代谢过程中的关键酶，主要功能是将乙醛代谢成无毒的乙酸。近年来有大量研究表明，ALDH2在缺血再灌注损伤中有明确的保护性作用，其特异性激动剂Alda-1也被广泛运用于IRI相关研究中。本文就ALDH2的结构、功能、基因多态性和在各器官IRI中的研究进展进行了综述，探讨ALDH2成为IRI治疗靶点的可能性。

目的 论证乙醛脱氢酶2(ALDH2)在高糖诱导神经元损伤中的作用.方法 采用体外高糖培养的HT-22神经元细胞模型,利用ALDH2的激动剂Alda-1,探索ALDH2对体外高糖培养神经元的作用.首先探索了ALDH2在不同浓度和不同处理时间的表达规律,然后利用Alda-1处理高糖培养的HT-22神经元细胞,通过TUNEL、Hoechst-PI染色、检测LDH表达评价神经元损伤情况.最后检测ROS、MDA、SOD、GSH-Px、IL-1β和IL-18,评价氧化应激和神经炎症情况.结果 高糖可以抑制ALDH2表达,且呈浓度和时间依赖性.上调ALDH2可抑制神经元凋亡,Alda-1可以减少Hoechst+/PI+细胞数量及程序性坏死标志物RIP和MLKL的表达(P<0.05).Alda-1可以抑制神经元氧化应激和神经炎症.结论 ALDH2可通过抑制程序性死亡、氧化应激和神经炎症发挥神经元保护作用.

Aldehyde dehydrogenase 2 (ALDH2) is a key mitochondrial enzyme in the metabolism of aldehydes and may have beneficial cardiovascular effects for conditions such as cardiac hypertrophy,heart failure,myocardial I/R injury,reperfusion,arrhythmia,coronary heart disease and atherosclerosis.In this study we investigated the role of ALDH2 in the progression of atherosclerosis and the underlying mechanisms,with a focus on endoplasmic reticulum (ER) stress.A clinical study was performed in 248 patients with coronary heart disease.The patients were divided into two groups according to their ALDH2 genotype.Baseline clinical characteristics and coronary angiography were recorded,and the coronary artery Gensini score was calculated.Serum levels of 4-hydroxy-2-nonenal (4-HNE) were detected.The clinical study revealed that the mutant ALDH2 genotype was an independent risk factor for coronary heart disease.ALDH2 gene polymorphism is closely associated with atherosclerosis and the severity of coronary artery stenosis.Serum levels of 4-HNE were significantly higher in patients with the mutant ALDH2 genotype than in patients with the wild-type ALDH2 genotype.As an in vitro model of atherosclerosis,rat smooth muscle cells (SMCs) were treated with oxygenized low-density lipoprotein (ox-LDL),which significantly elevated the levels of ER markers glucose-regulated protein78 (GRP78),protein kinase R-like ER kinase (PERK),phosphorylated eukaryotic translation initiation factor α subunit (p-elF2α),activating transcription factor-4 (ATF-4),CEBP homologous protein (CHOP) and 4-HNE in the cells.All the ox-LDL-induced responses were significantly attenuated in the presence of Alda-1 (an ALDH2 activating agent),and accentuated in the presence of daidzin (an ALDH2 inhibitor).Furthermore,pretreatment with ALDH2 activator Alda-1 significantly decreased ox-LDL-induced apoptosis.Similarly,overexpression of ALDH2 protected SMCs against ox-LDL-induced ER stress as well as ER stress-induced apoptosis.These findings suggest that ALDH2 may slow the progression of atherosclerosis via the attenuation of ER stress and apoptosis in smooth muscle cells.

目的 探讨基质金属蛋白酶14( MMP-14)、基质金属蛋白酶组织抑制因子4( TIMP-4)是否参与线粒体乙醛脱氢酶2(ALDH2)抗高糖诱导的原代大鼠心肌细胞损伤.方法不同浓度葡萄糖干预原代大鼠心肌细胞,MTT法检测不同时间点细胞活力,确定高糖诱导的心肌细胞损伤模型.实验分为正常对照组(NG,5.5 mmol·L-1)、NG + ALDH2激动剂Alda-1 组、高糖组(HG,30 mmol·L-1),HG + Alda-1组. MTT法和DHE染色分别检测细胞活力及氧化应激水平,Western blot检测ALDH2、MMP-14、TIMP-4蛋白表达.结果 根据细胞活力检测确定30 mmol·L-1葡萄糖干预48 h为损伤模型.与NG组比较,HG组细胞活力、ALDH2、MMP-14蛋白表达、MMP-14/TIMP-4比值均降低,氧化应激、TIMP-4蛋白水平升高;与HG组比较,Alda-1干预后细胞活力、AL-DH2及MMP-14蛋白表达、MMP-14/TIMP-4比值升高,氧化应激及TIMP-4蛋白表达降低.结论 激动ALDH2 可改善高糖引起的心肌细胞损伤,可能与抑制氧化应激、促进MMP-14蛋白表达、抑制TIMP-4蛋白表达有关.

目的 探讨线粒体乙醛脱氢酶2(ALDH2)在过氧化氢(H2O2)诱导的心肌细胞氧化应激损伤中的变化.方法 正常体外培养的H9C2心肌细胞,取对数生长期细胞建立H2O2氧化应激损伤模型,分为正常对照组、正常+ALDH2激动剂Alda-1组、H2O2损伤组、H2O2+ALDH2激动剂Alda-1组、H2O2+ALDH2抑制剂Daidzin组;MTT比色法测定各组心肌细胞活力,DHE荧光染色检测各组心肌细胞氧化应激水平,分光光度法和Western blotting法分别检测ALDH2活性及蛋白水平变化.结果 与正常对照组相比,正常+ALDH2激动剂Alda-1组心肌细胞活力、氧化应激水平、ALDH2活性水平和蛋白表达均无明显变化(P＞0.05);H2O2损伤组心肌细胞活力明显下降,DHE荧光染色显示氧化应激水平明显升高,ALDH2活性和蛋白表达降低(P＜0.05);给予Alda-1激动ALDH2后,与H2O2损伤组相比,心肌细胞活力升高,氧化应激水平下降,ALDH2活性和蛋白表达均明显升高(P＜0.05);给予Daidzin阻断ALDH2后,与-2O2损伤组相比,心肌细胞活力、氧化应激水平、ALDH2活性水平和蛋白表达均无明显变化(P＜0.05).结论H2O2直接诱导H9C2心肌细胞ALDH2活性及蛋白表达下降;提高心肌ALDH2表达可减轻H2O2诱导的氧化应激损伤.

目的 研究慢性病理性神经痛对低氧性肺动脉高压发生发展的影响及可能机制.方法 30只SD大鼠随机分为5组:常氧组、慢性痛+常氧组、低氧组、慢性痛+低氧组和慢性痛+低氧+ Alda1(乙醛脱氢酶2特异性激动剂)组,每组6只.慢性痛采用经典的大鼠背根节慢性压迫(chronic compression of dorsal root ganglia,CCD)模型.造模成功后用间断性低压低氧法建立大鼠低氧性肺动脉高压模型,然后分离大鼠三级肺小动脉,检测不同组大鼠的肺血管环舒张、收缩功能变化,同时测定各组大鼠血液循环中4-羟基壬烯酸(4-hydroxy-2-nonenal,4-HNE)的水平和肺动脉上乙醛脱氢酶(Aldehyde dehydrogenase,ALDH)2的表达.结果 低氧导致肺小动脉的舒张功能减弱(P＜0.05),收缩功能亢进;但是在慢性痛状态下,低氧组大鼠肺小动脉舒张功能进一步减弱(P＜0.01),而肺小动脉收缩功能更加亢进(P＜0.01).与此同时,低氧促进大鼠血液中4-HNE的水平升高(P＜0.01),而慢性痛+低氧组大鼠循环血液中4-HNE的水平增高更为显著(P＜0.01),提示慢性痛+低氧组大鼠肺动脉舒缩、功能异常可能是由长期慢性神经痛产生大量的4-HNE造成的.使用ALDH2的激动剂Alda1后能够显著改善慢性痛和低氧导致的肺小动脉舒张、收缩功能异常,促进肺小动脉舒张(P＜0,01),抑制收缩(P＜0.01),而且Alda-1能够显著上调慢性痛和低氧降低的ALDH2的表达(P＜0.01),减少循环血中4-HNE的水平(P＜0.01).结论 慢性病理性神经痛促进循环中4-HNE的水平增高,加重肺小动脉舒张、收缩功能异常,降低ALDH2的表达,促进低氧性肺动脉高压的发生发展.慢性神经痛可能是促进、加重低氧性肺动脉高压发生发展的诱因之一.