旨在通过形态学观察、rDNA ITS序列分析以及Biolog微生物鉴定系统对霉菌进行鉴定,并通过计算平均吸光值(AWCD)了解霉菌的生长情况以及各类碳源的消耗量,运用数据分析霉菌的碳源利用情况.结果表明,结合rDNA ITS序列、形态学观察以及Biolog鉴定系统确定菌株为黑曲霉;比较8类碳源消耗情况,可知对氨基酸类、脂类、酸类的利用最多,根据碳源代谢情况列出15种最先利用碳源.鉴定菌株为黑曲霉,且该菌株的最适碳源为P-羟苯乙酸,可作为耐酸曲霉代谢研究的材料.

通过抗感水稻细菌性条斑病(简称细条病)的品种的水根际可培养细菌群落结构和代谢功能多样性分析,探讨其根际细菌多样性差异与水稻抗细条病的相关性.采集孕穗期水稻品种CG2和IR24的植株根际土壤,采用多种培养基进行可培养细菌的分离、鉴定,并通过16S rRNA序列构建系统进化树;利用Biolog技术分析不同品种根际微生物的代谢功能差异.结果显示:不同水稻品种的根际土壤可培养细菌分析发现抗病品种CG2以芽孢杆菌为优势菌群,而感病品种IR24以节杆菌为优势种群;对条斑病菌有抑制的菌株,筛选后以芽孢杆菌为主,且抗病品种的比率达47％以上,而感病材料中只有2.3％;抗病品种根际微生物群落的Shannon多样性指数(H′),Shannon均匀度指数(SE),Simpson指数(D),McIntos指数(U)和McIntosh均匀度指数(ME)分别增加了8.80％,48.49％,11.76％,41.88％和0.52％;主成份分析表明抗病品种CG2的根际土壤微生物与感病品种IR24相比,对碳水化合物,氨基酸类、酯类、醇类、胺类和酸类的利用率分别提高了12.52％、66.53％、3.78％、7.49％、27.98％和40.67％.研究表明,从根际土壤细菌数量和种类上看,抗病品种CG2的根际土壤细菌数量和种类与感病品种相比,细菌群落结构多样性更为丰富,发挥生防作用的菌群更多,为水稻条斑病的生物防治提供了思路和资源.

[背景]生产上过高的氮肥投入是我国农业可持续发展的重要限制因子之一.利用生物固氮是减少氮肥施用量最为有效的途径,植物内生固氮菌资源的挖掘和利用对我国农业可持续发展具有重要实践意义.[目的]筛选高效甘蔗内生固氮菌,并对其联合固氮效率及促生长功能进行评价.[方法]从广西甘蔗茎基部组织分离筛选到一株内生固氮菌株NN08200,利用乙炔还原法测定固氮酶活性,通过菌落PCR扩增nifH基因确定菌株为固氮菌;通过菌株培养性状和菌体形态观察、Biolog细菌鉴定系统和16S rRNA基因序列分析确定该菌株的分类;采用盆栽接种测定菌株对甘蔗的实际促生长作用,并利用15N同位素稀释法测定其相对固氮效率.[结果]菌株NN08200的固氮酶活性达到2 445 nmol C2H4/(h·mL),菌株的nifH基因长度为339 bp,与甘蔗内生固氮醋酸杆菌Gluconacetobacter diazotrophicus PAL5菌株的nifH相似性达99％;根据菌株培养性状和菌体形态观察、Biolog细菌鉴定系统和16S rRNA基因序列分析结果,菌株NN08200属于泛菌属(Pantoea sp.)细菌;盆栽接种菌株NN08200能显著提高甘蔗幼苗的株高和干重,15N同位素分析结果表明接种该菌株甘蔗植株的根、茎和叶从空气中获得氮素的百分率分别为7.49％、15.02％和10.79％,其联合固氮效率显著优于甘蔗内生固氮模式菌株G.diazotrophicus PAL5,利用后者接种的甘蔗根、茎和叶从空气中获得氮的百分率分别为3.53％、9.44％和4.87％.[结论]菌株Pantoea sp.NN08200是高效甘蔗内生固氮菌,其固氮促生长效果明显高于G.diazotrophicus PAL5菌株,可望研发成为优良固氮微生物肥料生产菌种,并可进一步用于甘蔗联合固氮菌作用机理的相关研究.

目的 对从菌种保藏中心获得以及样品分离的14株伯克霍尔德菌进行鉴定分析,为该菌的鉴定和溯源分析提供参考.方法 分别用生理生化(API20NE和Biolog碳源分析系统)、基因型(自动化核糖体分型、16S rDNA和recA序列分析)的方法对11株标准菌株和3株未知菌进行了鉴定,并对结果进行了分析比较.结果 生理生化的方法能够鉴定到属的水平,Biolog能够区分BCC与非BCC类群微生物;16S rDNA序列分析能够鉴定到属水平,对于非BCC的部分菌可以鉴定到种水平,并且能够将BCC正确分类;recA序列分析能够将包含BCC的部分菌正确鉴定到种水平;Riboprinter技术能够鉴定到属水平,但是该技术能够对菌进行溯源分析.结论 在进行该菌的鉴定时,可以参考中国药典2015年版四部9204微生物鉴定技术指导原则的要求,根据自身的需求、技术能力以及能够承担的成本,选择适宜的鉴定方法和技术,依据多相鉴定原则进行鉴定分析,第一步判断是否属于伯克霍尔德菌属,第二判断是否属于BCC,第三尽可能准确鉴定到种水平,有必要的情况下进行溯源分析以确认污染来源.

目的 应用Biolog微生物鉴定系统鉴定比较鼠疫菌弱毒株(614F株)及其耐受菌株(R-2-12、R-2-51和R-2-56)生化、营养等表型特征.方法 参照Biolog微生物鉴定系统标准规程A,使用Retro Spect's分析软件进行分析.结果 利用Biolog微生物鉴定系统GenⅢ鉴定板检测显示,鼠疫菌614F株及其耐受菌株(R-2-56)不能发酵麦芽糖、密二糖、鼠李糖;614F株L-脯氨酸反应阳性,而614F株耐受中间代R-2-12、R-2-51株和耐受株R-2-56 L-脯氨酸反应阴性;614F株氨曲南反应阴性,而614F株耐受中间代R-2-12、R-2-51株和耐受株R-2-56氨曲南反应阳性.结论 614F株与其耐受菌株(R-2-12、R-2-51、R-2-56)比较生化表型无改变,但营养特征(脯氨酸)反应和抗生素(氨曲南)反应有差别.提示鼠疫菌弱毒菌614F株耐受株在耐受过程中营养需求和抗生素的抗性发生改变.

在中国农业微生物菌种中心(ACCC)菌株的定期转接保藏过程中,发现解淀粉芽孢杆菌ACCC 19742在同一培养基上出现两种不同的菌落形态,将这两个不同形态的菌株编号为19742-1和19742-2.通过形态学、生理生化及基因组分析相结合鉴定不同菌落形态ACCC 19742,并进一步确定该菌株的分类地位.首先将菌株进行分离与纯化,其次将纯化后的菌株进行16S rRNA及gyrB基因扩增及序列分析,通过MEGA 7.0软件构建系统发育树;API 20NE、BIOLOG及脂肪酸等分析菌株的生理生化特性;全基因组分析菌株的ANI和DDH值.两株菌在API 20NE中,仅葡萄糖酸盐同化反应存在差异;脂肪酸检测中主要组成相同,仅是百分含量方面略有差别;两株菌的16S rRNA基因相似性为100％,gyrB基因的相似性为99.4％;全基因组测序表明,两株菌的ANI值为99.95％,DDH值为99.62％.综合遗传学特征和表型特征,证实两者为来源于同一菌株不同的形态变异型,而并非污染所致.同时,19742-1和19742-2与Bacillus velezensis NRRL_B 41580T的ANI及DDH值最高,分别为97％和77％,且16S rRNA和gyrB系统进化分析也表明,该菌株在分类地位上属于贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis),而非解淀粉芽孢杆菌.这为菌株的保藏提供了一定的参考价值.

运用磷脂脂肪酸(phospholipid fatty acid,PLFA)和Biolog方法,研究了秸秆不还田不施肥(CK)、秸秆还田+尿素1(N分配∶麦收后∶水稻移栽前∶分蘖期∶孕穗期=0∶6∶2∶2,T1)、秸秆还田+尿素2(N分配:麦收后∶水稻移栽前∶分蘖期∶孕穗期=3∶3∶2∶2,T2)、秸秆还田+沼液+尿素(N分配∶麦收后∶水稻移栽前∶分蘖期∶孕穗期=3(沼液)∶3(2沼液+1尿素)∶2(尿素)∶2(尿素),T3)4种氮肥运筹方式对水稻各生育期(分蘖期、孕穗期、成熟期)土壤微生物群落结构的影响.结果 表明:1)T3处理显著提高了各生育期土壤中的有效氮含量,其中成熟期有效氮含量显著高于分蘖期和孕穗期;T1～ T3处理的有效磷和速效钾含量在各生育期均高于CK,且分蘖期的含量高于孕穗期和成熟期;稻田各生育期与各处理的交互作用对土壤有效氮、有效磷、速效钾含量均有显著影响;2)T3能提高稻田土壤中微生物碳源代谢强度,碳水化合物、氨基酸、聚合物、羧酸是稻田土壤微生物利用的主要碳源,稻田各生育期与各处理的交互作用对微生物利用碳水化合物和羧酸的能力有显著影响;3)T2、T3能显著提高土壤微生物生物量;T2处理真菌/细菌比较高,以真菌为主导,更有利于稻田土壤生态系统的稳定.表明秸秆还田同步施用氮肥(尿素或沼液)能提高土壤微生物活性,改善土壤环境.

[背景]参豉为人参与大豆采用自淡豆豉中分离获得的优势益生菌株共同发酵而成.已证明对气虚血瘀模型大鼠血液指标具有明显的调节作用,但对肠道微生态作用尚不明确.[目的]以气虚血瘀模型大鼠为材料,探讨参豉对肠道微生态是否具有调节作用.[方法]采用长期“力竭游泳+饥饿”方法建立大鼠气虚血瘀模型,造模同时分别灌胃给药参豉高、中、低剂量(每日6、3、1.5 g/kg体重)及补阳还五汤剂60 d后,分析肠道6种常驻菌群数量变化;并采用Biolog-ECO自动微生物鉴定系统研究大鼠肠道微生物的代谢情况.[结果]参豉能够促进气虚血瘀模型大鼠肠道中有益菌脆弱拟杆菌、乳酸菌及双歧杆菌的增殖,调节肠杆菌及肠球菌数量使其趋于正常水平,并抑制有害菌产气荚膜梭菌的增殖.Biolog结果显示参豉高剂量组AWCD值与空白组接近;培养48 h时,模型组Shannon 指数、Shannon均匀度、Simpson指数以及Mclntosh指数均显著高于空白组,差异显著(P＜0.05或P＜0.01),而参豉高剂量组Shannon指数、Shannon均匀度、Simpson指数与空白组相接近,差异无统计学意义(P＞0.05),与模型组相比差异极显著(P＜0.01);聚类分析与主成分分析显示参豉各剂量组与空白组、模型组、补阳还五汤组差异明显,可能与不同剂量参豉对气虚血瘀模型大鼠肠道微生态的调节作用相关.[结论]参豉对气虚血瘀模型大鼠肠道菌群具有明显的改善作用.

为了解海口市白沙门污水处理厂活性污泥中细菌抗生素耐性情况,采用平板分离技术分离、纯化细菌,并通过BIOLOG微生物鉴定系统对筛选到的细菌进行鉴定,同时采用Kirby-Bauer纸片琼脂扩散法进行药敏试验并进行抗生素耐性分析.本研究共分离到18株细菌,分属8个属,14个种,其中G+和G-均为9株.抗生素药敏性试验结果表明,所有菌株均耐药,菌株单重耐药率、双重耐药性及多重耐药性分别为50％、38.9％、和11.1％.菌株对9种常用抗生素:头孢他啶、环丙沙星、庆大霉素、链霉素、氨苄西林、红霉素、氯霉素、四环素、卡那霉素的耐药率分别为61.1％、0％、5.6％、16.7％、50％、16.7％、11.1％、0％、5.6％.综上所述,白沙门污水处理厂活性污泥中的细菌耐药性比较严重,存在潜在的环境生态和人畜健康风险.本研究揭示了当前白沙门污水处理厂活性污泥中细菌对常见抗生素耐药的严重现状,为建议污水处理厂加强出水及污泥中抗生素耐药性及耐药基因的检测并评估其生态影响提供基础,避免出水及污泥中的抗性菌和耐药基因可能带来的风险问题.

目的:观察调神畅情针法对帕金森病伴失眠模型大鼠睡眠潜伏期、睡眠持续时间及肠道菌群AWCD值、Shnnon指数的影响.方法:60只SD大鼠按随机数字表法分为正常组、假手术组、模型组、药物组、常规针刺组、调神畅情组,每组10只.采用单侧纹状体双靶点注射6-OHDA法制备PD模型;在PD模型基础上采用改良法配制的PCPA混悬液制备PD伴失眠模型.采用不同的干预方法,戊巴比妥钠翻正实验观察各时间点各组大鼠睡眠情况,BIOLOG微生物鉴定系统分析肠道菌群AWCD值、Shannon指数,并进行统计学分析.结果:模型组大鼠睡眠潜伏期延长、睡眠持续时间缩短,肠道菌群AWCD值及Shannon指数显著降低,较正常组有极显著差异(P<0.01).药物组大鼠睡眠潜伏期缩短、睡眠持续时间延长,与模型组相比改善显著(P<0.01),肠道菌群AWCD值及Shannon指数无明显变化(P>0.05);两针刺组大鼠睡眠潜伏期缩短、睡眠持续时间延长,改善明显(P<0.05),AWCD值、Shannon指数显著升高(P<0.05);与药物组相比,调神畅情组改善大鼠失眠疗效无显著差异(P>0.05),常规针刺组改善大鼠失眠疗效与其存在差异(P<0.05),两针刺组AWCD值及Shannon指数优势显著(P<0.05);与常规针刺组相比,调神畅情组失眠症状改善明显(P<0.05),AWCD值、Shannon指数升高显著(P<0.05).结论:调神畅情针法可明显改善PD伴失眠大鼠的失眠症状;并且可显著提高肠道菌群活性及多样性.