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阿司匹林阻断高脂血症诱导的足细胞内质网应激的机制
编辑人员丨1周前
目的:探讨阿司匹林(aspirin,ASP)对高脂血症诱导的足细胞内质网应激的影响及可能机制。方法:培养足细胞分为4组:对照组、ASP(100 μg/ml)组、ox-LDL(100 μg/ml)组和ASP+ox-LDL组,在6 h、12 h、24 h、48 h以实时定量PCR法检测蛋白激酶R样内质网激酶(protein kinase R-1ike endoplasmic reticulum kinase,PERK)、真核细胞起始因子2α(eukaryotic translation initiation factor 2α,eIF2α)、活化转录因子4(activating transcription factor-4,ATF4)、CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CAAT/enhancer binding protein homologous protein,CHOP)的表达;在24 h时以Western印迹法检测磷酸化(p)-PERK、p-eIF2α的表达;在12 h时以Western印迹法检测ATF4的表达。结果:在足细胞培养24 h时,ox-LDL组和ASP+ox-LDL组PERK、eIF2α的表达水平达高峰,在12 h时,该两组ATF4、CHOP的表达水平达高峰。在足细胞培养6 h、12 h、24 h、48 h时,与对照组比较,ox-LDL组PERK、eIF2α、ATF4、CHOP的表达水平明显较高(均 P<0.05);与ox-LDL组比较,ASP+ox-LDL组上述各指标表达明显较低(均 P<0.05)。在足细胞培养24 h时,与对照组比较,ox-LDL组p-PERK、p-eIF2α的表达水平明显较高(均 P<0.05);与ox-LDL组比较,ASP+ox-LDL组p-PERK、p-eIF2α的表达水平明显较低(均 P<0.05)。在足细胞分组培养12 h时,各组ATF4蛋白水平的表达与mRNA表达相似。ASP组与对照组间上述各项指标表达差异无统计学意义。 结论:高脂血症可能通过诱导PERK和eIF2α的磷酸化、激活ATF4转录及诱导CHOP高表达,引起足细胞内质网应激,而阿司匹林可能部分阻断了PERK通路,进而可能对足细胞具有保护作用。
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编辑人员丨1周前
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运动和白藜芦醇预处理对脑缺血再灌注大鼠脑损伤及内质网应激的影响
编辑人员丨2023/9/16
目的:通过测量4周跑台运动和白藜芦醇预处理对脑缺血再灌注(CI/R)大鼠神经功能缺失、脑梗死体积、脑组织含水量、脑神经细胞凋亡及脑组织内质网应激因子相关蛋白表达的影响,探讨跑台运动和白藜芦醇预处理改善CI/R大鼠脑损伤的可能机制.方法:将114只健康成年雄性SD大鼠随机分为假手术组、CI/R模型组、CI/R运动组、CI/R白藜芦醇组及CI/R白藜芦醇+运动组.运动组递增负荷跑台运动4周,白藜芦醇组灌胃4周.预处理4周后采用大脑中动脉闭塞再灌注法诱导大鼠CI/R模型.再灌注后24 h评估大鼠神经功能缺损评分,干湿法测量大鼠脑组织含水量,2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)法测量大鼠脑梗死体积,原位末端转移酶标记技术(TUNEL)法检测大鼠脑组织神经细胞凋亡情况,蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测大鼠脑组织葡萄糖调节蛋白78(GRP78)及CAAT区/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)蛋白表达.结果:1)CI/R模型组大鼠神经功能评分、脑梗死体积、缺血侧脑含水量、脑组织神经凋亡细胞及脑组织CHOP和GRP78蛋白表达较假手术组均显著增加(P<0.05);2)所有干预组大鼠神经功能评分、脑梗死体积、脑组织神经凋亡细胞及脑组织CHOP蛋白表达比较CI/R模型组均显著下降,GRP78蛋白表达均显著增加,而CI/R白藜芦醇+运动组大鼠缺血侧脑含水量显著下降;3)与CI/R运动组及CI/R白藜芦醇组比较,CI/R白藜芦醇+运动组大鼠除脑组织含水量无显著差异外,上述其他指标均进一步降低,GRP78蛋白表达进一步增加.结论:4周跑台运动和白藜芦醇均能降低CI/R大鼠脑梗死体积及神经功能评分,两者联合干预较单一干预效果更为显著,且只有联合组可降低CI/R大鼠脑水肿,其机制可能与运动和白藜芦醇抑制内质网应激及神经细胞凋亡,进而发挥抗脑缺血再灌注损伤作用.
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编辑人员丨2023/9/16
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氨氯地平减轻腹主动脉缩窄性高血压大鼠心肌内质网应激
编辑人员丨2023/8/6
目的 观察高血压大鼠心肌组织葡萄糖调节蛋白94(GRP94)和CAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)的表达,探讨氨氯地平与内质网应激高血压大鼠心室肥厚的关系.方法 将SD大鼠随机分为假手术组、腹主动脉缩窄术(AAB)组和氨氯地平干预(AAB+Aml)组,每组40只.给予氨氯地平10 mg/(kg·d).随机分为2、4和8周3个亚组,测定平均动脉压(MAP);计算左心室质量/体质量(LVM/BW);HE染色观察心肌细胞的形态;免疫组化及Western blot检测心肌组织GRP94和CHOP的表达.结果 随着术后时间的延长,AAB组MAP逐渐升高,明显高于假手术组[2周(144±10)比(118±9)、4周(163±8)比(120±7)、8周(177±10)比(120±6)mmHg](P<0.05);AAB组LVM/BW显著高于假手术组[2周(2.21±0.17)比(1.91±0.12)、4周(2.45±0.16)比(2.01±0.14)、8周(2.68±0.15)比(2.05±0.09)mg/g](P<0.05);AAB组心肌细胞较假手术组明显肥大;术后2周AAB组心肌组织GRP94明显表达,4周达最高值,8周减低;AAB组GRP94表达量高于假手术组(P<0.05);随术后时间的延长,CHOP蛋白含量逐渐增加,8周达最高值.使用氨氯地平后,AAB+Aml组较AAB组MAP降低[2周(126±6)比(144±10)、4周(125±8)比(163±8)、8周(128±5)比(177±10)mmHg](P<0.05);使用氨氯地平后,AAB+Aml组较AAB组LVM/BW降低[2周(2.21±0.17)比(1.94±0.15)、4周(2.45±0.16)比(2.13±0.08)、8周(2.68±0.15)比(2.18±0.10)mg/g](P<0.05);使用氨氯地平后AAB+Aml组较AAB组心肌细胞肥大程度减低.AAB+Aml组心肌组织GRP94及CHOP表达量低于AAB组(P<0.05).结论 氨氯地平可能通过减弱高血压触发的内质网应激而保护心肌细胞及减弱心室肥厚.
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编辑人员丨2023/8/6
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对比剂通过内质网应激诱导人肾小管上皮细胞凋亡
编辑人员丨2023/8/6
目的 探讨内质网应激在对比剂诱导人肾小管上皮细胞(HKC)凋亡中的作用.方法 在缺血、缺氧(0.2%胎牛血清,5% CO2-95%N2饱合混合气体)环境下,以HKC为研究对象,将HKC细胞株随机分为3组:空白组、对比剂组(加入120 g I/L碘普罗胺预处理2 h)和N-乙酰半胱氨酸(NAC)组(加入10 mmol/L NAC预处理2h,再加120 g I/L碘普罗胺处理2 h).细胞增殖试剂盒(CCK-8)法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡,实时荧光定量聚合酶链反应(real-time PCR)检测细胞中半胱氨酸蛋白酶-12(caspase-12)、葡萄糖调节蛋白-78 (GRP78)和CAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)的mRNA表达水平,蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞中caspase-12、GRP78和CHOP的蛋白表达水平.结果 对比剂可呈时间依赖性抑制HKC活性,与0h相比,1 h HKC活性显著降低(0.351±0.066比0.447±0.087,P<0.05);流式细胞术结果示对比剂可促进缺血缺氧HKC凋亡(P<0.05);real-time PCR结果示,对比剂组和NAC组GRP78和CHOP的mRNA水平明显高于空白组(P<0.05),对比剂组caspase-12的mRNA水平明显高于空白组和NAC组(P<0.05);Western blot结果示,对比剂明显增加了caspase-12、GRP78和CHOP的蛋白表达,而NAC明显降低了caspase-12的表达,但不能明显降低对比剂诱导的GRP78和CHOP高表达(P<0.05).结论 在缺血缺氧条件下,对比剂诱导HKC活性下降、凋亡,此作用可能与细胞内氧化应激及内质网应激相关.
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编辑人员丨2023/8/6
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姜黄素通过内质网应激途径诱导肺癌A549细胞凋亡
编辑人员丨2023/8/6
目的:观察姜黄素诱导肺癌A549细胞的凋亡并探讨其相关机制.方法:传代培养肺癌A549细胞,分别给予姜黄素0,5,10,20,40μmol/ml处理,观察各组细胞增殖能力、细胞凋亡率、葡萄糖调节蛋白78(GPR78)、CAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-12(Caspase-12)蛋白表达.结果:姜黄素作用A549细胞后,细胞增殖能力下降,细胞凋亡率升高,GPR78、CHOP和Caspase-12蛋白表达均升高,这些改变随剂量增加而明显(P均<0.05).结论:姜黄素可能通过内质网应激途径诱导肺癌A549细胞调亡,这一作用在一定范围具有剂量依赖性.
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编辑人员丨2023/8/6
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右美托咪定对呼吸机相关性肺损伤大鼠肺组织内质网应激的影响及PI3K/Akt信号通路的关系
编辑人员丨2023/8/6
目的 探讨右美托咪定(DEX)对大鼠呼吸机相关性肺损伤(ventilator associated lung injury,VALI)时内质网应激(ERS)诱导的细胞凋亡及磷脂酰肌醇3-激酶/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(PI3 K/Akt)信号通路的影响.方法 将80只SD大鼠采用随机数字表法分为四组(n=20):对照组(C组)、机械通气组(V组)、右美托咪定组(D组)和右美托咪定± PI3K/Akt信号转导通路抑制剂(LY294002)组(DL组).C组不行机械通气,自主呼吸空气;V组、D组、DL组机械通气4h,机械通气前20 min D组静脉输注右美托咪定5.0 μg/kg,机械通气期间以5.0 μg/(kg·h)的速率静脉输注;DL组在给予右美托咪定前5 min静脉输注LY294002 0.3 mg/kg;V组给予等容量生理盐水.机械通气4h时处死大鼠,测定肺通透指数(LPI)与肺湿/干质量(W/D)比值.采用蛋白质印迹(Western blot)法检测Akt、磷酸化Akt(P-Akt)、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、CAAT增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶12(caspase-12)的表达水平.光镜下观察肺组织病理学结果,测定肺泡损伤率(IAR),采用原位末端标记技术(TUNEL)法观察肺组织细胞凋亡情况并计算凋亡指数(AI).结果 与C组比较,V组与DL组W/D比、LPI、IAR(%)、AI(%)明显升高,GRP78、CHOP、caspase-12表达升高(C组:0.35±0.02、0.28±0.02、0.51±0.03;V组:1.27±0.11、1.09 ±0.13、1.37±0.15;DL组:0.97±0.08、0.66±0.07、1.01 ±0.09;P<0.05),P-Akt表达降低(C组:0.81±0.04;V组:0.23±0.01;DL组:0.44±0.02;P<0.05);与V组比较,DL组与D组W/D比、LPI、IAR(%)、AI(%)明显降低,GRP78、CHOP、caspase-12表达降低(V组:1.27±0.11、1.09±0.13、1.37±0.15;DL组:0.97±0.08、0.66±0.07、1.01±0.09;D组:0.62±0.04、0.43±0.05、0.79±0.07;P <0.05),P-Akt表达升高(V组:0.23±0.01;DL组:0.44±0.02;D组:0.65±0.03;P <0.05)且肺组织病理损伤减轻;与D组比较,DL组W/D比、LPI、IAR(%)、AI(%)明显升高,GRP78、CHOP、caspase-12表达升高(D组:0.62±0.04、0.43±0.05、0.79±0.07;DL组:0.97±0.08、0.66±0.07、1.01±0.09;P<0.05),P-Akt表达降低(D组:0.65±0.03;DL组:0.44±0.02;P<0.05),肺组织病理损伤较重.结论 右美托咪定可减轻大鼠VALI,与其激活PI3 K/Akt信号通路,抑制ERS,减少肺组织细胞凋亡有关.
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编辑人员丨2023/8/6
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中脑星形胶质细胞源性神经营养因子蛋白对脓毒性心肌病大鼠的心脏保护作用机制
编辑人员丨2023/8/5
目的 探究中脑星形胶质细胞源性神经营养因子(MANF)蛋白对脓毒性心肌病(SIC)大鼠的心脏保护作用机制.方法 45只SD大鼠随机分为对照组、模型组、MANF组,每组15只,通过盲肠结扎穿刺制备脓毒症心肌病大鼠模型,对照组盲肠不结扎不穿孔,MANF组大鼠从造模开始给予200 μg/kg外源MANF蛋白腹腔注射,12h重复给药,24h时观察大鼠一般情况,采血,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组大鼠血清中心肌标志物(CK-MB、cTnI)水平及炎性因子(TNF-α、IL-6)水平,采血后处死大鼠取其心肌组织伊红-苏木素(HE)染色,观察各组大鼠心肌病理学改变,采用蛋白质印迹法(Western blot)检测心肌细胞中内质网应激(ERS)相关蛋白葡萄糖调节蛋白94(GRP94)、CAAT区/增强子结合蛋白环磷酸腺苷反应元件结合转录因子同源蛋白(CHOP)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶12(Caspase-12)蛋白表达.结果 HE染色显示,MANF组病理损伤较模型组明显减轻,心肌细胞形态结构趋于正常,心肌细胞轻度肿胀,横纹清楚,间质充血水肿不明显,少量炎性细胞浸润.模型组大鼠血清中TNF-α、IL-6、CK-MB、cTnI及心肌细胞中GRP94、CHOP、caspase-12蛋白水平显著高于对照组(P<0.05);MANF组大鼠血清中TNF-α、IL-6、CK-MB、cTnI及心肌细胞中GRP94、CHOP、c aspase-12蛋白水平显著低于模型组(P<0.05);MANF组大鼠血清中TNF-α、IL-6、CK-MB、cTnI及心肌细胞中GRP94、CHOP、caspase-12蛋白水平较对照组差异有统计学意义(P<0.05).结论 MANF蛋白可能通过抑制ERS激活的GRP94、CHOP、caspase-12表达而减少心肌细胞凋亡,减轻心肌损伤,从而起到保护心脏的作用,这可能为脓毒性心肌病的新治疗靶点.
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编辑人员丨2023/8/5
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内质网应激在高血糖加重脑缺血再灌注损伤中的研究进展
编辑人员丨2023/8/5
各种应激压力导致未折叠蛋白/错误折叠蛋白在内质网(endoplasmic reticulum,ER)腔内蓄积,引起内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS).高血糖与脑缺血再灌注损伤(cerebral ischemia-reperfusion injury,CIRI)通常一起出现,约占所有CIRI的53%,且可加重脑组织的缺血再灌注损伤,细胞凋亡是CIRI的中心环节.新近研究表明,高血糖对CIRI的恶化效应与内质网应激诱导的细胞凋亡密切相关 [1],主要通过增加 CAAT 区/增强子结合蛋白同源蛋白(CAAT/enhance binding protein homologousprotein,CHOP)的表达和激活半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶12(cysteme aspartate specific protease 12,Caspase-12)来实现.故本文将阐述ERS诱导的细胞凋亡在高血糖加重CIRI中的研究进展.
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编辑人员丨2023/8/5
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复方麝香注射液通过抑制内质网应激对大鼠心肌缺血/再灌注损伤起保护作用
编辑人员丨2023/8/5
目的 观察复方麝香注射液对大鼠心肌缺血/再灌注(I/R)损伤的作用,并探讨其作用机制.方法 ?将36只成年雄性SD大鼠按随机数字表法分为假手术组、I/R模型组、药物干预组,每组12只.采用结扎大鼠左冠状动脉(冠脉)前降支30?min后,再灌注120?min的方法,复制I/R损伤模型;假手术组仅在冠脉前降支下穿线而不结扎.药物干预组于术前7?d连续腹腔注射复方麝香注射液2?mL/kg;假手术组和I/R模型组术前给予等量生理盐水.观察不同处理方法各组心肌梗死面积和心肌细胞凋亡指数(AI)的变化;采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质免疫印迹试验(Western?Blot)检测葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、CAAT区/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)和天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶12(caspase-12)的mRNA和蛋白表达水平.结果 I/R模型组心肌梗死面积〔(40.81±5.74)%比(9.27±2.09)%〕、AI〔(35.26±3.49)%比(2.52±0.41)%〕均较假手术组明显升高(均P<0.05);药物干预组大鼠心肌梗死面积〔(32.63±3.78)%比(40.81±5.74)%〕和AI〔(19.73±2.04)%比(35.26±3.49)%〕均明显低于I/R模型组(均P<0.05);I/R模型组GRP78、CHOP、caspase-12?mRNA(2-ΔΔCt)和蛋白(灰度值)表达水平均明显高于假手术组(GRP78?mRNA:3.79±0.23比1.00±0.00,CHOP?mRNA:3.05±0.10比1.00±0.00,caspase-12?mRNA:4.59±0.13比1.00±0.00;GRP78蛋白:3.31±0.14比1.00±0.00,CHOP蛋白:2.16±0.14比1.00±0.00,caspase-12蛋白:4.27±0.15比1.00±0.00,均P<0.05);药物干预组GRP78、CHOP、?caspase-12?mRNA(2-ΔΔCt)和蛋白(灰度值)表达水平均明显低于I/R模型组(GRP78?mRNA:1.96±0.10比3.79±0.23,?CHOP?mRNA:2.26±0.07比3.05±0.10,caspase-12?mRNA:2.84±0.29比4.59±0.13;GRP78蛋白:2.39±0.06比3.31±0.14,CHOP蛋白:1.51±0.11比2.16±0.14,caspase-12蛋白:3.01±0.14比4.27±0.15,均P<0.05).结论 ?复方麝香注射液通过抑制内质网应激对大鼠心肌I/R损伤起到保护作用.
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编辑人员丨2023/8/5
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骨关节炎软骨细胞凋亡与组蛋白去乙酰化酶4含量的降低
编辑人员丨2023/8/5
背景:内质网应激介导的软骨细胞凋亡在骨关节炎的发病中起重要作用,而内质网应激介导的细胞凋亡主要受ATF4/CHOP信号通路调节,但该信号通路在骨关节炎中的作用及其调控仍不清楚.目的:探讨组蛋白去乙酰化酶4和ATF4/CHOP信号通路在骨关节炎软骨细胞凋亡中的作用.方法:按照Outerbridge分级,将从膝关节置换切取的胫骨平台软骨分为相对正常软骨(OuterbridgeⅠ级)和骨关节炎软骨(OuterbridgeⅢ级),通过Tunel染色观察软骨细胞凋亡情况,免疫组化染色检测组蛋白去乙酰化酶4、激活转录因子4(ATF4)与CAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)表达,实时荧光定量PCR检测CAAT/增强子结合蛋白同源蛋白mRNA表达,Western Blot与实时荧光定量PCR检测组蛋白去乙酰化酶4、激活转录因子4的表达.结果 与结论:①Tunel染色显示,骨关节炎软骨中软骨细胞的凋亡率高于相对正常软骨[(83.5±10.1)%,(20.5±5.2)%,P<0.05];②免疫组化染色显示,骨关节炎软骨中激活转录因子4的表达高于相对正常软骨,组蛋白去乙酰化酶4的表达低于相对正常软骨;骨关节炎关节软骨中CAAT/增强子结合蛋白同源蛋白的表达高于相对正常软骨;③骨关节炎软骨中激活转录因子4与CAAT/增强子结合蛋白同源蛋白的mRNA表达均高于相对正常软骨(P<0.05),组蛋白去乙酰化酶4的mRNA表达低于相对正常软骨(P<0.05);④骨关节炎软骨中组蛋白去乙酰化酶4的蛋白表达低于相对正常软骨(P<0.05),激活转录因子4的蛋白表达高于相对正常软骨(P<0.05);⑤结果表明,在骨关节炎病理进程中,关节软骨中的组蛋白去乙酰化酶4表达降低、ATF4/CHOP信号通路分子表达升高,可能与骨关节炎软骨细胞凋亡相关.
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编辑人员丨2023/8/5
