目的 探究微囊蛋白-1(caveolin-1,Cav-1)通过调节铁死亡介导的线粒体稳态来对2型糖尿病(T2DM)伴发高血压大鼠肾功能损伤的改善作用.方法 于2021年5月至2022年5月采用自发性高血压大鼠(SHR)建立T2DM大鼠模型,将大鼠按随机数字表法分为对照组、SHR+T2DM组、pCDNA3.1(+)-NC组和pCDNA3.1(+)-Cav-1组,每组10只.测定大鼠收缩压、空腹血糖值(FBG)、空腹胰岛素(FINS)、糖化血红蛋白(GHbA1C)浓度、评价胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、血肌酐、尿素氮含量,并计算尿清蛋白与肌酐比值(UACR)HE染色检测肾组织病理学变化;检测肾组织中亚铁离子(Fe2+)、丙二醛含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性;二氢乙锭(DHE)荧光染色法检测肾组织中活性氧水平;线粒体膜电位荧光探针(JC-1法)检测肾组织中线粒体膜电位(MMP)水平;蛋白质印迹法检测肾组织中谷胱甘肽过氧化酶4(GPX4)、x-CT蛋白表达.结果 SHR+T2DM组收缩压(189.46±7.51)mmHg、FBG(23.46±1.28)mmol/L、FINS(1.62±0.15)mU/L、HOME-IR(1.52±0.13)、GHbA1C(689.31±45.81)nmol/L、血肌酐(83.69±4.25)mmol/L、尿素氮(19.32±2.54)mmol/L、UACR(76.51±8.09)、Fe2+(0.45±0.05)mg/g、丙二醛(58.32±3.26)nmol/L、活性氧含量23.46±1.84均高于对照组[(110.34±5.26)mmHg、(5.12±0.94)mmol/L、(0.68±0.07)mU/L、0.31±0.04、(310.48±23.26)nmol/L、(32.08±3.61)mmol/L、(6.89±1.86)mmol/L、8.31±0.94、(0.13±0.02)mg/g、(15.68±2.15)nmol/L、1.31±0.23],SOD活性(11.56±1.62)U/mg、MMP水平0.25±0.03、GPX4(0.35±0.04)和x-CT蛋白0.51±0.06表达均低于对照组[(35.61±2.17)U/mg、0.62±0.08、1.00±0.10、1.00±0.09](P<0.05);和SHR+T2DM组相比,pCDNA3.1(+)-Cav-1组收缩压(136.27±6.09)mmHg、FBG(10.37±1.05)mmol/L、FINS(0.91±0.10)mU/L、HOME-IR(0.64±0.08)、GHbA1C(426.17±25.94)nmol/L、血肌酐(51.36±3.87)mmol/L、尿素氮(10.71±2.18)mmol/L、UACR(38.62±4.18)、Fe2+(0.18±0.03)mg/g、丙二醛(21.39±2.64)nmol/L、活性氧含量5.47±1.06均明显降低,SOD活性(29.83±1.94)U/mg、MMP水平0.51±0.06、GPX4(0.86±0.09)和x-CT蛋白0.91±0.08表达升高(P<0.05).结论 Cav-1可通过抑制铁死亡来维持线粒体功能的稳态,进而对T2DM合并SHR大鼠的肾组织发挥保护作用.

目的 探究血清网膜素-1(Omentin-1,OMTN)、硫氧还蛋白1(Thioredoxin-1,Trx1)、小窝蛋白-1(caveolin-1,Cav-1)在高血压脑出血(hypertensive intra cerebral hemorrhage,HICH)患者中的表达及其对预后的预测价值.方法 回顾性分析行微创血肿清除术82例HICH患者作为研究对象,根据治疗后30d恢复情况分为预后良好组(n=48例)、预后不良组(n=34例),比较2组入院时血清OMTN、Trx1、Cav-1水平及格拉斯哥昏迷量表(Glasgow coma scale,GCS)评分、Graeb脑室出血评分,并分析其相关性.采用受试者工作曲线分析预测价值,分析入院时各指标不同水平患者不良结局的危险度.结果 预后良好组OMTN水平高于预后不良组,血清Trx1、Cav-1水平低于预后不良组(P<0.05);预后不良组入院时GCS评分低于预后良好组,Graeb评分高于预后良好组(P<0.05);血清Trx1、Cav-1水平与GCS评分呈负相关,与Graeb评分呈正相关,OMTN水平与GCS评分呈正相关,与Graeb评分负相关;各指标单独预测预后不良的AUC均>0.6,但各指标联合诊断的AUC最大,为0.857(P<0.05);入院时OMTN、Trx1、Cav-1高水平HICH患者预后不良的危险度是低水平的0.242、2.462、3.440倍.结论 HICH患者入院时OMTN水平降低,血清Trx1、Cav-1水平升高,各指标联合检测对预后不良预测价值较高,可作为临床评估HICH患者预后情况的辅助指标.

目的:探讨血清陷窝蛋白1(Cav-1)与甲壳质酶蛋白-40(YKL-40)在急性脑梗死中的表达及联合检测与预后评估的价值。方法:回顾性选取2016年1月至2019年6月河北北方学院附属第一医院收治的118例急性脑梗死患者作为研究对象，根据脑梗死体积将患者分为小梗死组(<5 cm 3)、中梗死组(5～10 cm 3)和大梗死组(>10 cm 3)，选择108例健康体检者作为健康对照组，比较各组血清Cav-1、YKL-40水平，并分析脑梗死体积与血清Cav-1、YKL-40水平相关性。采用受试者工作特征曲线(ROC)分析血清Cav-1与YKL-40水平对急性脑梗死的诊断价值；对患者进行一年随访并采用改良Rankin量表(mRS)评分评估预后情况，分析血清Cav-1、YKL-40与预后之间相关性。 结果:不同梗死体积急性脑梗死患者血清Cav-1、YKL-40表达水平显著高于健康组( P<0.001)。血清Cav-1、YKL-40水平与急性脑梗死患者梗死体积呈正相关( r＝0.854， P＝0.004； r＝0.867， P＝0.002)。ROC曲线分析结果表明，Cav-1(以21.78 μg/L为诊断截断值)联合YKL-40(以158.69 ng/ml为诊断截断值)诊断急性脑梗死的灵敏度为85.59%，约登指数为0.532，ROC曲线下面积为0.896(95% CI：0.741～0.932)，显著高于各指标单项检测( P<0.05)，诊断效能最佳。随访8个月和12个月时，联合诊断结果阳性组患者发生死亡的比例以及mRS评分明显高于阴性组患者( P<0.05)。 结论:急性脑梗死患者血清Cav-1、YKL-40呈显著高表达，两者联合检测可提高诊断效能，对于患者早期诊断和预后预测具有潜在应用价值。

目的:评价小窝蛋白3(Cav-3)在小鼠糖尿病心肌病中的作用及其与内质网应激的关系。方法:在体实验：清洁级健康成年雄性野生型小鼠16只，体质量18~20 g，采用随机数字表法分为2组( n＝8)：对照组(Control组)和糖尿病心肌病组(DCM组)，另取Cav-3 KO小鼠8只为Cav-3 KO+糖尿病心肌病组(Cav-3 KO+DCM组)。采用高脂饮食联合腹腔一次性注射链脲佐菌素100 mg/kg的方法制备小鼠2型糖尿病模型，8周时采用心脏超声测定小鼠左心射血分数(EF)、左室短轴缩短率(FS)、左室收缩末期容积(LVESD)、左室舒张末期容积(LVEDD)。随后处死小鼠取心脏，HE染色观察心肌组织形态学结果。离体实验：小鼠来源的HL-1心肌细胞，采用随机数字表法分为3组( n＝6)：正常糖培养组(NG组)、高糖组(HG组)和高糖+甲基-β-环糊精组(HG+β-CD组)。高糖模型采用专用培养基加入50%葡萄糖至终浓度达到30 mmol/L，持续培养36 h。采用LDH、CCK8试剂盒评估细胞损伤情况。采用Western blot法检测心肌组织与HL-1细胞内质网应激相关蛋白结合免疫球蛋白(BiP)、C/EBP同源蛋白(CHOP)及剪接型X-box结合蛋白1(XBP1-s)的表达。 结果:在体实验：与Control组比较，DCM组和Cav-3 KO+DCM组小鼠进食量、饮水量及心脏质量/体质量增加，EF和FS降低，LVESD和LVEDD升高，心肌BiP、CHOP和XBP1-s表达上调，Cav-3表达下调( P<0.05)，病理学损伤加重；与DCM组比较，Cav-3 KO+DCM组EF和FS降低，LVESD和LVEDD升高，心肌BiP、CHOP与XBP1-s表达上调，Cav-3表达下调( P<0.05)，病理学损伤加重。离体实验：与NG组比较，HG组和HG+β-CD组心肌细胞存活率下降，LDH活性升高，BiP、CHOP与XBP1-s表达上调，Cav-3表达下调( P<0.05)；与HG组比较，HG+β-CD组心肌细胞存活率下降，LDH活性升高，BiP、CHOP和XBP1-s表达上调，Cav-3表达下调( P<0.05)。 结论:Cav-3表达下调会加重小鼠糖尿病心肌损伤，其机制与内质网应激过度激活有关。

目的:分析晚期肺腺癌患者肿瘤细胞异质性，探索肿瘤细胞亚群转录组特性以寻找个体特异的治疗方案。方法:从人类肿瘤相关的基因表达汇编(GEO)数据库下载肺腺癌单细胞转录组测序数据芯片编号GSE123902，包含收集于2018年至2019年于纪念斯隆-凯特琳癌症中心手术切除的8例原发肺癌组织，3例脑转移样本，1例骨转移样本，1例肾上腺转移样本。过滤、鉴定并分离肿瘤细胞，对表达数据进行标准化、降维处理并根据表达模式对细胞进行聚类，利用基因差异表达分析，基因集变异分析(GSVA)探索不同肿瘤细胞亚群的表达特性。结果:共分离Ⅳ期肺腺癌原发灶肿瘤细胞211个，脑转移灶肿瘤细胞965个，骨转移灶肿瘤细胞659个，肾上腺转移灶肿瘤细胞14个。样本间比较涉及肿瘤血管生成、上皮间充质转化、侵袭转移相关的基因和基因集，例如骨转移组明显上调的波形蛋白(VIM，logFC＝3.185，校正后的 P<0.01)，差异有统计学意义；膜微囊蛋白-1(CAV-1，logFC＝2.757,校正后的 P<0.01)，差异有统计学意义。单样本分析中，脑转移和骨转移灶中均鉴定出耐药相关细胞亚群，存在多个耐药相关基因上调，包括脑转移细胞亚群中上调的载脂蛋白2(LCN2, logFC＝1.822,校正后的 P<0.01)，差异有统计学意义、骨转移细胞亚群中上调的趋化因子1(CXCL1，logFC＝1.604,校正后的 P<0.01)，差异有统计学意义。 结论:通过单细胞转录组分析肿瘤细胞异质性，可为晚期肺腺癌患者寻找个体化治疗方案提供线索。

发育性癫痫性脑病(DEE)的重要病因之一为离子通道基因变异，其中包括 CACNA1E基因突变。 CACNA1E相关DEE病例首次报道于2018年，突变类型包含新发错义突变、无义突变及移码突变，但突变位点及类型与表型关系不明确，现对已报道的 CACNA1E相关DEE病例进行归纳，进一步探索 CACNA1E相关DEE临床表型与基因突变位点及突变类型之间的关系，同时回顾 CACNA1E相关DEE的可能发病机制及药物干预进展，为DEE的诊断及精准治疗提供帮助。

目的:基于网络药理学分析黄柏通过铁死亡途径治疗类风湿关节炎（RA）的可能作用机制。方法:通过TCMSP数据库、Herb数据库筛选黄柏的主要活性成分及其对应的靶点蛋白，并使用Uniprot数据库将靶点蛋白名称转化为基因ID。在GenCards、OMIM、DrugBank、DisGeNET数据库中获取RA疾病靶点。利用FerrDb数据库收集铁死亡在激动物、抑制物和标志物3方面的基因。然后，利用Venny平台获取黄柏活性成分靶点基因、RA靶点基因和铁死亡相关基因的交集基因，并使用Cytoscape 3.9.1软件绘制"活性成分-靶点-RA-铁死亡"网络图。使用String和DAVID数据库进行蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）、基因本体论（GO）功能和京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路富集分析。使用PyMOL、AutoDock Vina软件和RCSB PDB数据库对活性成分与关键基因进行分子对接。结果:共筛选出11个黄柏活性成分（槲皮素、β-谷固醇、苦楝酮、烛毒素A、黄柏呈、掌叶大黄二蒽酮A、黄连宁、鬃毛酮、Kihadalactone A、尼洛替星、豆甾醇）和34个交集基因（PTGS2、AR、JUN、PRKCA、TGFB1、EGFR、CDKN1A、MAPK1、RB1、IL6、TP53、HIF1A、HSPA5、HMOX1、CAV1、IFNG、ALOX5、PTEN、NFE2L2、PARP1、PPARA、GSTM1、MTOR、PIK3CA、MDM2、MAPK8、GSK3B、SIRT1、DHODH、EZH2、AKR1C2、AKR1C1、STAT3、MAPK3）。预测得到TP53、JUN、STAT3、HIF1A、PTEN、SIRT1、EGFR、MTOR、MAPK3、AR 10个黄柏调控铁死亡抗RA的可能作用靶标，介导细胞对氧化应激的反应、对药物的反应、HIF-1、FoxO和ErbB等信号通路调控铁死亡途径，从而对抗RA的发生及进展。对接结果显示，关键基因与其对应的黄柏活性成分间存在分子结合位点。结论:黄柏可能通过铁死亡效应以多成分、多靶点、多通路、多种作用机制治疗RA。

目的:探讨小窝蛋白1（Cav1）对棕榈酸作用下的胰岛β细胞存活的影响。方法:通过慢病毒载体构建Cav1沉默的小鼠胰岛素瘤NIT-1细胞株和小鼠原代胰岛（Cav1-shRNA组），以空载体病毒组作为对照组（Ctrl-shRNA），并设空白对照组，各组均分别加入脱脂牛血清白蛋白和棕榈酸（0.5 mmol/L）处理24 h及48 h，通过四甲基偶氮唑蓝比色法及Hoechst33342/碘化丙啶（PI）双染色法检测细胞活性及细胞凋亡，实时荧光定量PCR、Western blot检测凋亡相关的mRNA及蛋白表达水平。结果采用 t检验和单因素方差分析法进行统计学分析。 结果:与对照组比较，棕榈酸处理组的细胞存活率显著下降（0.89±0.10比0.24±0.04， t=13.49， P<0.01），P18、P19的mRNA和蛋白表达均上调（1.00±0.09比1.30±0.04、1.00±0.04比1.37±0.13， t=5.28、4.71，均 P<0.05；0.87±0.04比1.48±0.05、1.02±0.06比1.41±0.07， t=16.50、7.33，均 P<0.01）；含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶（Caspase）-6、Caspase-9和Caspase-12的mRNA表达水平明显上调（1.00±0.04比1.57±0.08、1.01±0.15比1.57±0.20、1.02±0.19比1.57±0.09， t=11.04、3.88、4.53，均 P<0.05），蛋白表达也明显上调（0.86±0.10比1.28±0.11、0.69±0.01比0.86±0.06、0.70±0.02比1.18±0.01， t=4.89、4.84、37.18，均 P<0.01）。而Cav1-shRNA+棕榈酸组细胞存活率较Ctrl-shRNA+棕榈酸组显著上升（0.53±0.10比0.26±0.08， t=4.71， P<0.01），P19的mRNA和蛋白表达均下调（1.53±0.18比0.66±0.04、1.48±0.05比0.70±0.02， t=8.17、25.09，均 P<0.01）；Caspase-6、Caspase-7、Caspase-9和Caspase-12的mRNA表达水平下调（1.82±0.11比1.03±0.07、1.43±0.24比0.42±0.15、1.41±0.22比0.51±0.18、1.45±0.18比0.42±0.13， t=5.48~10.49，均 P<0.01），蛋白表达也下调（0.99±0.14比0.63±0.11、0.90±0.14比0.62±0.04、0.90±0.02比0.60±0.04、1.30±0.01比0.65±0.04， t=3.50~27.31，均 P<0.01）。 结论:Cav1沉默可以通过影响胰岛β细胞Caspase家族，促进其增殖、减少棕榈酸作用下的β细胞凋亡，保护脂毒性下胰岛β细胞活性。

目的:初步探讨嗜酸乳杆菌改善创伤性脑损伤(TBI)小鼠肠道平滑肌收缩功能的作用及可能机制。方法:按照随机数字表法将90只C57BL/6雄性小鼠分为假伤组、TBI组、TBI＋嗜酸乳杆菌组，每组30次。TBI组、TBI＋嗜酸乳杆菌组采用改良的Feeney自由落体撞击法建立TBI后肠动力不足模型，假伤组只开颅骨骨窗不进行打击。假伤组及TBI组灌胃0.5 ml嗜酸乳杆菌培养基，TBI＋嗜酸乳杆菌组灌胃0.5 ml嗜酸乳杆菌混悬液(约含菌1×10 10CFU)。各组每天灌胃1次，其余时间自由饮食水。分别在伤后1，3，7 d取末端回肠组织(距离盲肠1.5 cm)，免疫组化染色检测磷酸化20 kDa肌球蛋白轻链(p-MLC20)水平，ELISA法检测肌球蛋白轻链激酶(MLCK)活性及L型电压依赖性钙离子通道α1C亚基(Cav1.2)、三磷酸肌醇受体(IP3R)、兰尼碱受体3(RyR3)蛋白表达。 结果:(1)TBI组1，3，7 d的p-MLC20水平为(530.6±101.5)ng/ml、(566.8±86.9)ng/ml、(635.2±129.6)ng/ml,较假伤组的(813.7±148.9)ng/ml、(802.6±151.2)ng/ml、(805.5±139.9)ng/ml显著降低( P均<0.05)；而TBI＋嗜酸乳杆菌组1，3，7 d的p-MLC20水平为(790.7±59.4)ng/ml、(769.8±85.4)ng/ml、(731.8±82.9)ng/ml，显著高于TBI组( P均<0.05)。(2)TBI组1, 3, 7 d的MLCK活性为(29.4±5.0)U/L、(31.2±3.4)U/L、(30.7±2.4)U/L，明显弱于假伤组的(44.9±6.1)U/L、(44.6±1.7)U/L、(45.1±3.7)U/L( P均<0.05)；TBI＋嗜酸乳杆菌组1，3，7 d的MLCK活性为(35.2±3.1)U/L、(38.7±3.9)U/L、(34.7±2.9)U/L，较TBI组明显增强( P均<0.05)。(3)TBI组1, 3, 7 d的Cav1.2表达量为(1.7±0.4)ng/L、(2.3±0.4)ng/L、(2.9±0.5)ng/L，明显低于假伤组的(5.8±0.6)ng/L、(5.6±0.6)ng/L、(5.7±0.7)ng/L ( P均<0.05)；TBI＋嗜酸乳杆菌组1，3，7 d的Cav1.2水平为(2.8±0.6)ng/L、(4.7±0.6)ng/L、(4.9±0.5)ng/L，较TBI组明显升高( P均<0.05)。TBI组1, 3, 7 d的IP3R表达量为(12.4±2.5)μg/L、(15.7±3.0)μg/L、(16.3±3.1)μg/L，明显低于假伤组的(30.3±3.0)μg/L、(31.9±2.6)μg/L、(32.1±1.7)μg/L( P均<0.05)；TBI＋嗜酸乳杆菌组1 d的IP3R表达量为(13.1±1.9)μg/L，与TBI组的(12.4±2.5)μg/L比较，差异无统计学意义( P>0.05)；TBI＋嗜酸乳杆菌组3 d和7 d的IP3R表达量为(18.4±2.4)μg/L、(22.9±2.8)μg/L，较TBI组明显升高( P均<0.05)。TBI组1，3，7 d的RyR3表达量为(30.8±4.4)pg/ml、(29.1±3.6)pg/ml、(27.9±2.9)pg/ml，明显低于假伤组的(43.5±3.2)pg/ml、(44.9±2.9)pg/ml、(44.2±2.0)pg/ml ( P均<0.05)；TBI＋嗜酸乳杆菌组1，3，7 d的RyR3表达量为(33.3±2.5)pg/ml、(30.4±2.3)pg/ml、(30.2±2.4)pg/ml，与TBI组比较，差异无统计学意义( P均>0.05)。 结论:嗜酸乳杆菌可提高TBI小鼠肠道平滑肌p-MLC20水平，增强MLCK活性，促进Cav1.2、IP3R、RyR3表达，从而保证钙依赖性通路信号的正常传导，可能是其改善TBI小鼠肠道平滑肌收缩的机制之一。

目的:制备兔抗长爪沙鼠免疫球蛋白G1（IgG1）和IgG2的特异性多克隆抗体，并用于蛋白质免疫印迹（WB）和ELISA检测。方法:利用质粒-大肠埃希菌系统分别高效表达密码子优化的长爪沙鼠免疫球蛋白IgG1和IgG2重链恒定域CH2和CH3重组蛋白，纯化后免疫新西兰大白兔，分离并纯化获得相应的兔多克隆抗体，用辣根过氧化物酶（HRP）标记后分别作为一抗应用于WB和作为二抗应用ELISA。结果:IgG1和IgG2重组蛋白在大肠埃希菌中可高效表达并都以包涵体形式存在，I相对分子质量分别为24 800和21 200，与预期相符。其纯化后作为免疫原可诱导兔产生相应的多克隆抗体，HRP标记后用于WB可以特异性地识别重组蛋白长爪沙鼠IgG1-CH23和IgG2-CH23，用于ELISA能检测柯萨奇病毒A16型感染长爪沙鼠后诱导产生的特异性IgG抗体。结论:成功制备了兔抗长爪沙鼠免疫球蛋白IgG1和IgG2的特异性多克隆抗体，为长爪沙鼠特异性抗体血清学检测提供了有效工具。