目的:探讨外用紫草素对咪喹莫特诱导的银屑病样小鼠模型的干预作用及对CCAAT增强子结合蛋白δ（CEBPD）表达的影响。方法:将20只SPF级BALB/c雄性小鼠按照简单随机抽样法分为模型组、紫草素1组、紫草素2组及空白对照组，每组5只。模型组、紫草素1组和紫草素2组小鼠背部脱毛区均每日外涂5%咪喹莫特乳膏（IMQ）50 mg建立银屑病样小鼠模型，用药6 h后，紫草素1组、紫草素2组小鼠建模区分别予0.5 ml浓度为0.576 g/L和5.76 g/L的紫草素，共处理8 d；空白对照组不予任何处理。每日肉眼观察各组小鼠银屑病皮损严重程度指数（PASI）随时间的变化情况；8 d后，脱颈处死小鼠，取背部皮损，通过免疫组化及Western印迹法检测CEBPD在小鼠背部表皮层的表达。采用SPSS 16.0进行统计学分析，不同组间观察指标的比较采用单因素方差分析，两两多重比较采用LSD- t检验。 结果:第8天时，模型组小鼠可见明显的红斑、鳞屑及皮损浸润增厚，紫草素1、紫草素2组小鼠与同期模型组相比，皮损显著改善，紫草素2组改善更明显。第8天时，空白对照组PASI评分为0分，模型组为（11.0±1.22）分，紫草素1组为（8.6±0.55）分，紫草素2组为（5.8±1.30）分，各组间差异有统计学意义（ F=128.21， P<0.01），组间两两比较显示差异亦均有统计学意义（均 P<0.01）。免疫组化显示，模型组CEBPD表达水平（ A值）为0.072±0.026，紫草素1组0.177±0.036，紫草素2组0.290±0.062，空白对照组0.407±0.051，各组间差异有统计学意义（ F=48.895， P<0.01），两两比较显示差异均有统计学意义（均 P<0.01）。Western印迹检测显示，小鼠表皮层中CEBPD表达水平从高至低依次为空白对照组、紫草素2组、紫草素1组、模型组，各组间CEBPD表达差异有统计学意义（ F=10.237， P<0.05），模型组、紫草素1组和空白对照组间差异有统计学意义（均 P<0.05），而紫草素2组和空白对照组间差异无统计学意义（ P>0.05）。 结论:外用紫草素可有效干预咪喹莫特诱导银屑病样小鼠模型的形成；CEBPD在银屑病样小鼠模型中表达降低，外用紫草素可显著升高CEBPD的表达。

目的:研究转录激活因子6（ATF6）与需肌醇酶1-X-框结合蛋白1（IRE1-XBP1）在氧糖剥夺/复氧（OGD/R）损伤小鼠海马神经元（HT22）细胞中的交互作用。方法:复制OGD/R损伤HT22细胞模型，观察OGD/R后不同时间点（0、3、6、12、24 h）内质网应激（ERS）、细胞活性和凋亡的变化。将对数生长期的HT22细胞分为空白对照组、对照+ATF6激动剂AA147组、对照+IRE1抑制剂4μ8c组、OGD/R模型组、OGD/R+AA147组、OGD/R+4μ8c组（AA147组和4μ8c组于全程添加10 μmol/L AA147或16 μmol/L 4μ8c）。采用蛋白质免疫印迹试验（Western blotting）检测各组HT22细胞ERS相关蛋白〔葡萄糖调节蛋白78（GRP78）、磷酸化需肌醇酶1（p-IRE1）、磷酸化真核细胞翻译起始因子2α（p-eIF2α）〕以及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3（caspase-3）、活化caspase-3的表达；采用实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）检测ERS相关基因以及ATF6〔同型半胱氨酸内质网应激泛素样结构域1（Herpud1）、蛋白二硫键异构酶家族成员4（Pdia4）、Lin-12样抑制子/增强子（Sel1L）〕和剪接型X-框结合蛋白1〔XBP1s，包括DnaJ热休克蛋白成员B9（Erdj4）、Sec24相关基因家族成员D（Sec24d）、信号受体序列3（Ssr3）〕介导的转录反应相关基因的mRNA表达；采用细胞增殖与毒性检测试剂盒（CCK-8）检测细胞活性；采用免疫荧光法检测活化caspase-3表达。结果:与空白对照组比较，ERS相关蛋白p-IRE1和p-eIF2α的蛋白表达量分别在OGD/R 12 h、OGD/R 3 h升高（p-IRE1/β-actin：2.09±0.10比1.00±0.00，p-eIF2α/β-actin：1.39±0.11比1.00±0.00，均 P<0.01），ERS相关基因ATF6、XBP1s、非剪接型X-框结合蛋白1（XBP1u）、转录激活因子4（ATF4）、CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白（CHOP）的mRNA表达量在OGD/R后不同时间点也明显升高，表明ERS在OGD/R作用的HT22细胞中被激活。与OGD/R模型组比较，OGD/R+AA147组p-IRE1蛋白表达量无改变，但XBP1s和XBP1u的mRNA表达量明显下降〔XBP1s（2 -ΔΔCt）：0.76（0.71，0.92）比1.13（1.03，1.29），XBP1u（2 -ΔΔCt）：0.29±0.05比0.52±0.04，均 P<0.01〕，而XBP1s介导的转录反应相关基因表达量无明显改变。与OGD/R模型组比较，在使用4μ8c后短链ATF6（sATF6）和GRP78的蛋白表达量无明显改变，ATF6介导的转录反应相关基因的mRNA也无明显改变。提示ATF6的激活能抑制XBP1s和XBP1u的mRNA表达，但ATF6与XBP1s介导的转录反应无交互作用。与空白对照组比较，HT22细胞活性在OGD/R 3 h时显著降低〔（44.64±5.12）%比（99.13±5.76）%， P<0.01〕，凋亡相关蛋白Bax/Bcl-2比值和活化caspase-3/caspase-3比值分别在OGD/R 3 h和OGD/R 0 h显著升高（Bax/Bcl-2比值：6.15±1.65比1.00±0.00，活化caspase-3/caspase-3比值：17.48±2.75比1.00±0.00，均 P<0.01），表明凋亡在OGD/R作用的HT22细胞中被激活。与OGD/R模型组比较，OGD/R+AA147组细胞活性显著下降〔（36.52±17.78）%比（69.90±9.43）%， P<0.01〕，Bax/Bcl-2比值和活化caspase-3/caspase-3比值明显升高（Bax/Bcl-2比值：2.06±0.31比1.10±0.25，活化caspase-3/caspase-3比值：3.35±0.59比0.55±0.09，均 P<0.01）。 结论:在OGD/R损伤HT22细胞中，ATF6和XBP1s介导的转录反应无明显交互作用，但AA147激活的ATF6能抑制XBP1s和XBP1u的mRNA表达并促进应激HT22细胞中死亡的发生。

目的:探讨CCAAT/增强子结合蛋白δ（CEBPD）对巨噬细胞极化的调控及通过巨噬细胞对肝癌细胞侵袭转移、凋亡的影响。方法:用慢病毒转染技术构建敲减CEBPD（shCEBPD）及阴性对照shNC的THP-1稳定转染细胞。用佛波醇12-十四酸酯13-乙酸酯（PMA）将转染后的THP-1细胞诱导为巨噬细胞，脂多糖（LPS）和干扰素γ（IFNγ）进一步将巨噬细胞向M1型极化诱导。实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测M1型巨噬细胞相关基因白细胞介素1β（IL-1β）、IL-6、肿瘤坏死因子α（TNFα）及诱导型一氧化氮合酶（iNOS）的mRNA表达水平，流式细胞术检测M1型巨噬细胞特异表面标志物CD80表达水平。用Transwell非接触式共培养小皿将经M1型诱导后的巨噬细胞与肝癌MHCC97H细胞进行共培养。在共培养条件下，通过Transwell和划痕实验检测MHCC97H的侵袭转移能力，流式细胞术检测MHCC97H细胞的凋亡情况。组间数据比较采用 t检验分析。 结果:敲减CEBPD后，THP-1来源巨噬细胞中M1型巨噬细胞标志基因iNOS、TNFα、IL-6及IL-1β的mRNA表达水平降低，M1型巨噬细胞表面特异标志物CD80表达减少（23.7%±2.1%与62.5%±2.0%， t = 9.58， P < 0.05）。将shCEBPD组和shNC组的THP-1分别与MHCC97H进行共培养，与shNC组相比，shCEBPD组共培养的MHCC97H细胞侵袭能力[（158.0±3.5）个与（75.0±4.5）个， t = 39.87， P < 0.01]和转移能力（54.6%±1.5%与24.3%±1.0%， t = 61.42， P < 0.01）增强、凋亡率降低[（9.4%±1.0%）与（23.7%±1.2%）， t = 12.68， P < 0.01]。 结论:CEBPD通过促进巨噬细胞M1型极化抑制肝癌侵袭转移，并增加肝癌细胞凋亡。

目的:探讨6-甲酰基吲哚并[3，2-b]咔唑（FICZ）对脂多糖（LPS）诱导小鼠急性肺损伤（ALI）的作用及机制。方法:采用简单随机抽样方法将8～12周龄雄性C57BL/6J小鼠分为4组，每组8只。以腹腔注射LPS 5 mg/kg制备脓毒症致ALI小鼠模型（LPS组）；磷酸盐缓冲液（PBS）对照组（PBS组）注射等体积PBS。LPS+FICZ组制模后1 h腹腔注射FICZ 1 μg进行干预，而FICZ对照组（FICZ组）腹腔注射PBS后1 h给予等量FICZ。制模后24 h取血清及肺组织，经苏木素-伊红（HE）染色、肺组织湿/干重（W/D）比值分析肺组织病理改变；用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清及肺组织中炎性因子表达；实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）和蛋白质免疫印迹试验（Western blotting）检测内质网应激信号通路相关分子的表达水平。结果:与PBS组比较，LPS组肺组织炎性细胞浸润增加，可见肺泡萎陷及明显的肺泡内渗出性病变，肺组织W/D比值显著升高，血清白细胞介素-6（IL-6）水平、肺组织IL-6 mRNA表达和内质网应激信号通路葡萄糖调节蛋白78（GRP78）、蛋白激酶R样内质网激酶（PERK）、CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白（CHOP）的mRNA表达以及肺组织GRP78、PERK、活化转录因子6（ATF6）、CHOP的蛋白表达水平均明显升高；而FICZ组各指标则不受影响。与LPS组比较，LPS+FICZ组肺组织炎性细胞浸润较少，肺泡结构相对完整，肺组织W/D比值显著下降（5.38±0.10比6.60±0.30， P<0.01），血清IL-6水平（ng/L：15.55±3.77比32.22±3.84）和肺组织IL-6 mRNA表达（2 -ΔΔCt：0.79±0.21比6.89±0.92）显著降低（均 P<0.01），内质网应激信号通路GRP78、PERK、CHOP的mRNA表达显著降低〔GRP78 mRNA（2 -ΔΔCt）：1.90±0.16比7.55±1.29，PERK mRNA（2 -ΔΔCt）：1.68±0.20比4.54±0.89，CHOP mRNA（2 -ΔΔCt）：1.13±0.24比4.44±1.13，均 P<0.05〕，GRP78、PERK、ATF6、CHOP的蛋白表达水平也显著降低（GRP78/GAPDH：0.59±0.02比0.77±0.01，PERK/GAPDH：0.48±0.03比1.04±0.05，ATF6/GAPDH：0.51±0.03比0.65±0.01，CHOP/GAPDH：0.91±0.05比1.11±0.07，均 P<0.05）。 结论:FICZ对LPS诱导的小鼠ALI具有保护作用，其机制与抑制内质网应激、下调血清和肺组织IL-6水平有关。

目的 探讨腺病毒载体介导C/ebp delta对缺血性心脏病的治疗作用.方法 构建腺病毒C/ebp delta增强型绿色荧光蛋白(Ad C/ebp delta-EGFP)载体,局部注射小鼠心脏左心室前壁,观察其对心肌细胞的转染效率.取C57BL/6小鼠,以腺病毒空载体局部注射心肌为对照组,Ad C/ebp delta-EGFP载体局部注射心肌为实验组.2组小鼠心肌局部注射腺病毒载体后行冠状动脉左前降支结扎,用心脏超声检测C/ebp delta对心脏功能的影响.无痛苦处死小鼠,收获心脏,TUNEL染色观察C/ebp delta对心肌细胞凋亡的影响;CD31免疫组化观察C/ebp delta对心肌梗死后梗死交界区毛细血管密度的影响;蛋白免疫印迹检测C/ebp delta对心肌梗死后心脏低氧诱导因子-1(HIF-1)、血红素加氧酶-1(HO-1)及血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达的影响.结果 成功构建Ad C/ebp delta-EGFP载体.超声显示实验组小鼠心肌梗死后心脏左室短轴缩短分数(LVFS,0.323±0.031)和心脏左室射血分数(LVEF,0.605±0.085)较对照组(0.221±0.031和0.464±0.071)显著改善(P<0.05);心肌细胞凋亡率较对照组明显减少(20.36％±3.07％vs.44.26％±6.25％,P<0.01);心肌梗死交界区毛细血管密度(毛细血管数目/每个视野)较对照组显著增加(145.41±15.52 vs.77.60±5.19,P<0.01);HIF-1、HO-1和VEGF蛋白的表达较对照组均显著增加(P<0.01).结论腺病毒介导的C/ebp delta可能通过激活HIF-1信号通路增加HO-1和VEGF表达,进而通过保护心肌细胞及促进心脏血管新生治疗缺血性心脏病.

目的 研究C/EBPδ在结直肠癌中的表达情况及其对结直肠癌细胞增殖能力的影响和相关机制.方法 选取2017年至2018年于云南省第二人民医院行结肠癌根治术的40例患者的肠癌组织以及对应的癌旁组织和正常肠组织,采用免疫组织化学法检测组织中的C/EBPδ蛋白质表达情况.采用免疫共沉淀方法检测结直肠癌组织中C/EBPδ与Siah2的相互作用.构建C/EBPδ过表达及干扰的病毒载体,分别感染结直肠癌Caco-2细胞,通过CCK8、流式细胞仪检测、平板克隆形成实验观察C/EBPδ过表达和干扰对细胞增殖、凋亡及周期的影响.采用卡方检验对阳性表达率相关因素进行统计学分析.结果(1)从正常肠组织到癌旁组织再到结直肠癌组织中C/EBPδ的表达依次升高,差异均有统计学意义(P<0.05),C/EBPδ蛋白表达量在伴有肝转移的结直肠癌患者中更为显著;(2)C/EBPδ升高的结直肠癌组织中伴有Saih2的升高,但二者没有直接的相互作用;(3)C/EBPδ过表达能显著提高Caco-2细胞的增殖,而C/EBPδ的shRNA干扰使结直肠癌细胞增殖明显减少;(4)与对照组相比,C/EBPδ的shRNA干扰显著抑制了结直肠癌细胞Caco-2细胞的体外迁移和侵袭能力(P<0.05).结论 C/EBPδ在结直肠癌组织中存在异常,过表达的C/EBPδ通过与Saih2相互作用促进结直肠癌细胞的侵袭和转转,其与结直肠癌的不良预后可能相关.

目的 了解大鼠肝再生启动阶段CCAAT增强子结合蛋白δ(CEBPδ) mRNA、miR-3553和rno-Acad8_0002调节肝细胞处于G0期还是G1期的途径和方法.方法 按Higgins等方法制备大鼠2/3肝切除(PH)模型,按Smedsrod等方法分离肝细胞,用大规模定量分析技术检测大鼠肝再生中肝细胞竞争性内源RNA (ceRNA)表达的变化,用Cytoscape 3.2软件构建ceRNA的相互作用网络,用ceRNA综合分析等方法解析它们表达和作用的相关性.结果 PH后0h和6h时,CEBPδ mRNA的比值为0.40±0.08和2.15±0.24,miR-3553为2.53±0.47和1.17±0.31,rno-Acad8_0002为1.24±0.04和2.66±0.54.CEBPδ抑制的G0期相关基因转化生长因子β受体2(TGFBR2)为2.77±0.20和0.79±0.13,磷脂酶A2-IVA(PLA2G4A)为2.56±0.76和0.42±0.13.CEBPδ促进的G1期相关基因纤溶酶原激活剂尿激酶受体(PLAUR)为0.27±0.08和2.62±0.31,丝裂原活化蛋白激酶14(MAPK14)为1.01±0.15和2.01±0.32,ETS变异转录因子6(ETV6)为0.77±0.05和2.22±0.68,血红蛋白加氧酶1(HMOXl)为1.05±0.21和4.57±0.88.结论 PH后0h时,CEBPδmRNA下调,有利于CEBPδ抑制的G0期相关基因表达和肝细胞处于G0期.相反,PH后6h时,rno-Acad8_0002和miR-3553的相互作用解除了后者对CEBPδ mRNA的抑制,有利于CEBPδ形成,有利于CEBPδ促进的G,期相关基因表达和肝细胞处于G1期.

近年来,各种基因组学和蛋白质组学的研究日益增多,而转录因子在基因表达调控中发挥重要作用.CCAAT 增强子结合蛋白(CCAAT enhancer binding proteins ,C/EBPs)是1个C端包含高度保守亮氨酸拉链结构的转录因子家族,主要包括6个成员:C/EB Pα,C/EB Pβ,C/EB Pδ,C/EB Pγ,C/EBPε以及C/EBPζ(即C/EBP同源蛋白CHOP).它们通过与DNA增强子结合区结合来发挥转录调控作用.C/EBPβ是1个重要的核转录因子,参与细胞增殖、分化,调控机体代谢和炎症反应.本研究将围绕C/EB Pβ的结构、相关修饰以及其在中枢神经系统中的功能展开概述.

目的 观察金水缓纤方对肺纤维化大鼠肺组织内质网应激/未折叠蛋白反应(ERS/UPR)通路的影响.方法 选择32只SPF级SD大鼠,按随机数字法分为正常对照组、模型组、金水缓纤方组与吡非尼酮组,每组 8 只.采用一次性气管内注射博来霉素(5 mg/kg)复制肺纤维化大鼠模型.于制模前 1d和制模后 28 d、42d测定大鼠肺功能;制模后 42d处死大鼠取肺部组织,行苏木素-伊红(HE)染色和Masson染色观察各组大鼠肺组织病理学改变;采用原位末端缺刻标记试验(TUNLE)测定肺组织细胞凋亡情况;采用定量比色法测定肺组织羟脯氨酸(HYP)含量;采用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应(RT-qPCR)测定葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、X-框结合蛋白 1(XBP-1)、CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)的mRNA表达水平;采用蛋白质免疫印迹试验(Western blotting)测定E-钙黏蛋白(E-cad)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、GRP78、XBP-1、磷酸化真核细胞翻译起始因子-2α(p-eIF2α)、CHOP、Smad2/3 的蛋白表达水平.结果 与正常对照组比较,制模后 42d模型组大鼠肺功能指标潮气量(TV)、呼气峰流速(PEF)、吸气峰流速(PIF)均明显下降[TV(mL):1.55±0.24 比 2.39±0.37,PEF(mL/s):17.64±2.79 比 21.94±3.05,PIF(mL/s):18.30±3.99 比 26.95±2.09,均P＜0.05],气道狭窄指数(Penh)明显升高(0.71±0.12 比 0.52±0.05,P＜0.05);光镜观察肺组织病理学改变可见:模型组肺泡间隔增厚,肺泡和肺间质有广泛炎症细胞浸润,且胶原纤维大量沉积,肺泡炎和肺纤维化评分均明显升高[肺泡炎评分(分):2.50±0.84 比 0.17±0.41,肺纤维化评分(分):6.17±1.17 比 0.33±0.52,均P＜0.01];肺组织HYP含量、细胞凋亡指数(AI)和GRP78 mRNA、XBP-1 mRNA、CHOP mRNA及p-eIF2α、α-SMA、GRP78、XBP-1、CHOP、Smad2/3 的蛋白表达水平均明显增加[HYP(μg/g):16.98±3.58 比 11.57±2.35,AI:(24.27±2.73)％比(1.40±0.78)％,GRP78 mRNA(2-ΔΔCt):5.01±0.57 比 1.00±0.12,XBP-1 mRNA(2-ΔΔCt):2.20±0.39 比 1.00±0.25,CHOP mRNA(2-ΔΔCt):2.40±0.45 比 1.00±0.14,α-SMA/GAPDH:1.24±0.15 比0.17±0.04,GRP78/GAPDH:1.50±0.11 比 0.07±0.02,XBP-1/GAPDH:1.97±0.10 比 0.61±0.06,p-eIF2α/GAPDH:1.21±0.18 比 0.11±0.02,CHOP/GAPDH:1.32±0.15 比 0.04±0.02,Smad2/3/GAPDH:1.12±0.17比 0.19±0.12,均P＜0.01],E-cad的蛋白表达水平明显降低(E-cad/GAPDH:0.34±0.07 比 1.44±0.19,P＜0.01).与模型组比较,金水缓纤方组和吡非尼酮组TV、PEF、PIF均升高[TV(mL):2.03±0.17、2.10±0.36比 1.55±0.24,PEF(mL/s):21.84±3.43、19.25±2.06 比 17.64±2.79,PIF(mL/s):22.78±2.67、24.25±2.16比 18.30±3.99],Penh明显降低(0.58±0.10、0.58±0.11 比 0.71±0.12,均P＜0.05),肺组织病理学变化显著改善,胶原纤维有所减少,金水缓纤方组和吡非尼酮组肺泡炎和肺纤维化评分均明显降低[肺泡炎评分(分):1.50±0.55、1.33±1.03 比 2.50±0.84,肺纤维化评分:4.67±1.37、3.83±1.17 比 6.17±1.17,均P＜0.05],HYP含量、AI明显减少[HYP(μg/g):13.31±2.94、13.20±2.21 比 16.98±3.58,AI:(5.20±1.20)％、(7.43±1.79)％比(24.27±2.73)％,均P＜0.05],肺组织GRP78、XBP-1、CHOP的mRNA表达和α-SMA、GRP78、XBP-1、p-eIF2α、CHOP、Smad2/3的蛋白表达水平均降低[GRP78 mRNA(2-ΔΔCt):1.64±0.35、2.10±0.22比5.01±0.57,XBP-1 mRNA(2-ΔΔCt):1.75±0.40、1.06±0.30 比 2.20±0.39,CHOP mRNA(2-ΔΔCt):1.94±0.16、1.83±0.32 比2.40±0.45,α-SMA/GAPDH:0.46±0.14、0.48±0.23 比 1.24±0.15,GRP78/GAPDH:0.75±0.03、0.56±0.05 比1.50±0.11,XBP-1/GAPDH:1.16±0.07、0.62±0.06 比 1.97±0.10,p-eIF2α/GAPDH:0.81±0.12、0.61±0.09 比1.21±0.18,CHOP/GAPDH:0.49±0.10、0.30±0.06 比 1.32±0.15,Smad2/3/GAPDH:0.71±0.12、0.76±0.20 比1.12±0.17,均P＜0.05],E-cad的蛋白表达升高(E-cad/GAPDH:0.57±0.11、0.76±0.07 比 0.34±0.07,均P＜0.05).结论 金水缓纤方能改善肺功能,减少胶原沉积,减轻肺纤维化,其机制与其作用ERS/UPR通路抑制上皮间质转化和细胞凋亡有关.