目的:观察组织蛋白酶（CTS）L抑制剂对视网膜色素上皮（RPE）细胞凋亡的作用及其对线粒体氧化应激的影响。方法:体外培养的人RPE细胞分为正常组、过氧化氢（H 2O 2）组、H 2O 2+CTSL抑制剂组。H 2O 2组、H 2O 2+CTSL抑制剂组置于含400 μmol/L H 2O 2的培养基孵育24 h；H 2O 2+CTSL抑制剂组同时加入10 μmol/l CTSL抑制剂。正常组为常规培养细胞。建模后24 h进行后续实验。流式细胞仪检测细胞凋亡率；细胞免疫荧光染色、蛋白质免疫印迹法、实时定量聚合酶链反应检测细胞中CTSL表达水平；MitoSOX荧光探针检测细胞中线粒体超氧化物表达水平；MitoTracker染色观察线粒体形态，定量分析线粒体平均面积、形状因子、分支节点。两组间比较采用双尾Student t检验；多组间比较采用单因素方差分析。 结果:与正常组比较，H 2O 2组细胞凋亡率明显增加，差异有统计学意义（ t=3.307， P=0.029 7）；细胞中CTSL表达水平升高（ t=19.950、6.916、14.220， P<0.05）。与H 2O 2组比较，H 2O 2+CTSL抑制剂组CTSL表达水平、细胞凋亡率、细胞线粒体超氧化物水平显著降低，差异有统计学意义（ t=11.940、4.718、16.680， P<0.05）。H 2O 2+CTSL抑制剂组细胞线粒体呈细长椭圆形或杆状；H 2O 2组细胞线粒体失去其连续轮廓与完整形态。4组细胞线粒体评价面积、形状因子、分支节点比较，差异有统计学意义（ F=251.700、34.010、60.500， P<0.000 1）。 结论:H 2O 2显著诱导RPE细胞的凋亡、CTSL表达升高；CTSL抑制剂可抑制H 2O 2诱导的RPE细胞凋亡，降低线粒体超氧化物水平，有效恢复线粒体形态。

目的:观察组织蛋白酶L（CTSL）阻断前后三氯乙烯（TCE）致敏小鼠肾小球中补体片段3（C3）和内皮细胞损伤相关蛋白的表达情况，探讨CTSL在TCE致敏小鼠肾脏损伤中的作用。方法:于2018年6月，将41只SPF级雌性BALB/c小鼠随机分为空白对照组（ n=5）、溶剂对照组（ n=5）、TCE组（ n=15）和TCE+CTSLi组（ n=16），建立TCE致敏小鼠模型，通过腹腔注射CTSL抑制剂（CTSLi）对小鼠进行预处理，采用TCE对小鼠进行初次激发和末次激发，根据皮肤致敏反应评分将小鼠分为致敏阳性组和致敏阴性组。于末次激发后72 h检测小鼠肾功能指标，观察小鼠肾脏组织病理学改变情况，并检测肾小球C3和内皮细胞损伤相关蛋白[血管细胞黏附分子1（VCAM-1）、紧密连接蛋白5（Claudin-5）和多配体蛋白聚糖1（Syndecan-1）]的表达水平。 结果:TCE组和TCE+CTSLi组小鼠致敏率分别为53.3%（8/15）和50.0%（8/16），两组间差异无统计学意义（ P>0.05）。TCE致敏阳性组小鼠血清肌酐（CRE）、尿素氮（BUN）水平明显高于溶剂对照组和TCE致敏阴性组（ P<0.05），而TCE+CTSLi致敏阳性组小鼠血清CRE、BUN水平明显低于TCE致敏阳性组（ P<0.05）。TCE致敏阳性组小鼠肾脏可见明显空泡变性及细胞水肿，TCE+CTSLi致敏阳性组小鼠上述病理损害程度明显改善。TCE致敏阳性组肾小球C3片段和VCAM-1表达明显高于溶剂对照组和TCE致敏阴性组（ P<0.05），而TCE+CTSLi致敏阳性组C3片段和VCAM-1表达明显低于TCE致敏阳性组（ P<0.05）。Western blot检测结果提示，TCE致敏阳性组小鼠肾小球Claudin-5、Syndecan-1蛋白相对表达水平较溶剂对照组和TCE致敏阴性组明显降低（ P<0.05）。与TCE致敏阳性组比较，TCE+CTSLi致敏阳性组小鼠肾脏Syndecan-1蛋白相对表达水平明显升高，差异有统计学意义（ P<0.05）；Claudin-5蛋白表达水平升高，但差异无统计学意义（ P>0.05）； 结论:CTSL可能通过切割补体C3，激活补体系统，通过破坏内皮细胞结构蛋白Syndecan-1及过表达黏附分子VCAM-1，介导TCE致敏过程中小鼠的肾小球结构和功能损害，抑制CTSL的表达可能是保护小鼠肾小球结构和功能完整性的有效手段。

[编者按] 杨金奎教授,一级主任医师,博士研究生导师. 享受国务院政府特殊津贴专家,2019 年入选"北京学者" . 首都医科大学附属北京同仁医院北京市糖尿病研究所首任所长. 糖尿病防治研究北京市重点实验室主任,北京市糖尿病防治办公室主任,首都医科大学内分泌与代谢病学系主任,民盟中央委员. 重点开展新药靶点发现与新药研发,疾病诊断与预测分子标志物研究;糖尿病微血管病变临床研究和胰岛功能基础研究. 作为首席科学家承担国家重点研发项目1 项,主持国家自然科学基金重点项目、国际合作及面上项目 7 项. 获国家新药证书 3 项,省部级科技成果奖 6 项. 在 Diabetes Care(6 篇)、Cell Discovery、Cell Reports、STTT、Nature Commmunications、eLife等发表SCI论文115 篇,他引超过7000 次. 2006 年发现冠状病毒 ACE2 受体对糖代谢的作用;2017 年发现尿微量触珠蛋白预测糖尿病肾病新方法;2018 年提出胰岛素分泌"双开关"控制理论;2021 年发现黄连素降糖作用分子靶点;2021 年发现CTSL为新型冠状病毒肺炎治疗新靶点.

为防止母体对半同种异体胎儿的免疫反应,孕期机体会出现以胸腺急性退化为代表的特殊适应性免疫系统改变,并能于产后快速修复.这种妊娠期胸腺急性退化(acute thymic involution,ATI)与性激素水平有关,主要由孕激素引起,表现在胸腺体积,特别是皮质部分持续缩小,被膜下皮质上皮细胞(cortical thymic epithelial cells,cTECs)起皱并出现吞噬能力,其他胸腺上皮细胞(TECs)相对不变.而产后胸腺由转录因子叉头框N1(forkhead box N1,FOXN1)及其靶基因趋化因子(C-C基元)配体25[chemokine(C-C motif)ligand 25,CCL25]、趋化因子(C-X-C基元)配体12[chemokine(C-X-C motif)ligand 12,CXCL12]、δ 样蛋白4(delta-like 4,DLL4)、组织蛋白酶L(cathepsin L,CTSL)、丝氨酸蛋白酶16(serine protease,PRSS16)等共同介导再生,一旦产后胸腺修复不良,会导致母体免疫功能失调并罹患产褥疾病,严重危及母体及其后代的生存.中医学认为气血为胎孕的基石,而胸腺发挥关键的气血调控作用.由此可知孕产期的气虚血弱与孕期的ATI和产后胸腺再生不良息息相关.在此理论基础上,中医产后调理累积了丰富的学术思想和临床经验,该综述在系统阐述妊娠期ATI机制修复过程的基础上,通过数据挖掘分析2部中医经典女科著作《万氏女科》《傅青主女科》,发现产后常用中药有当归、人参、甘草、川芎,其中人参、当归、川芎是高频中药,对产后康复具有积极作用,而这些中药如何促进产后胸腺再生尚需进一步深入研究.

卵巢癌的早期发现率低,70%以上的患者诊断时已为进展期,由于广泛转移和耐药,其预后极差.半胱氨酸蛋白酶L(CTSL)是半胱氨酸蛋白酶家族的主要成员之一,可分布于细胞内或分泌到细胞外基质,以细胞内外多种蛋白为底物.CTSL在多种恶性肿瘤组织中表达水平增高,卵巢癌组织和卵巢癌患者血清中CTSL的水平也异常增高.CTSL促进卵巢癌的生长、转移、耐药、血管生成等恶性生物学行为.血清CTSL与其他生物标记联合应用有利于早期诊断卵巢癌,同时实验研究表明以CTSL为靶点的治疗对控制卵巢癌的进展有较好的效果.因此对CTSL在卵巢癌进展中的作用机制进行更深入的探讨有望为卵巢癌的早期诊断和治疗提供新的思路.

目的 观察三氯乙烯(TCE)致敏小鼠皮肤中组织蛋白酶L(CTSL)的表达情况,探讨CTSL在TCE所致免疫性皮肤损伤中的作用机制.方法 无特定病原体级雌性BALB/c小鼠随机分为空白对照组(5只)、溶剂对照组(5只)、TCE组(15只)和抑制剂组(15只).按照豚鼠最大反应实验法进行TCE皮肤致敏实验.TCE组、抑制剂组小鼠根据皮肤致敏结果分为致敏亚组和未致敏亚组.于末次激发后72 h处死小鼠,取其实验部位皮肤,检测表皮厚度,以实时荧光定量聚合酶链式反应检测皮肤中Ctsl mRNA的表达,免疫组化法检测皮肤中CTSL、白细胞介素(IL)-6和IL-17的表达.结果 TCE组与抑制剂组小鼠的致敏率分别为40.0％(6/15)和33.3％ (5/15),2组小鼠致敏率比较,差异无统计学意义(P＞0.05).TCE致敏亚组、抑制剂致敏亚组小鼠表皮厚度和皮肤中Ctsl mRNA、CTSL、IL-6和IL-17的相对表达水平均高于空白对照组、溶剂对照组、TCE未致敏亚组和抑制剂组未致敏亚组(P＜0.05),TCE致敏亚组小鼠上述指标均高于抑制剂致敏亚组(P＜0.05).TCE致敏亚组小鼠皮肤中Ctsl mRNA、CTSL、IL-6和IL-17的相对表达水平在两两之间均存在正相关(P＜0.05).结论 CTSL激活可能在TCE致敏小鼠免疫性皮肤损伤中发挥重要作用,其可能与促进IL-6和IL-17的释放有关.

Cathepsin L (CTSL), a cysteine protease, is closely related to tumor occurrence, development, and metastasis, and possibly regulates cancer cell resistance to chemotherapy. miRNAs, especially the miR-200 family, have been implicated in drug-resistant tumors. In this study we explored the relationship of CTSL, miRNA-200c and drug resistance, and the potential regulatory mechanisms in human lung cancer A549 cells and A549/TAX cells in vitro. A549/TAX cells were paclitaxel-resistant A549 cells overexpressing CTSL and characterized by epithelial-mesenchymal transition (EMT). We showed that miRNA-200c and CTSL were reciprocally linked in a feedback loop in these cancer cells. Overexpression of miRNA-200c in A549/TAX cells decreased the expression of CTSL, and enhanced their sensitivity to paclitaxel and suppressed EMT, whereas knockdown of miRNA-200c in A549 cells significantly increased the expression of CTSL, and decreased their sensitivity to paclitaxel and induced EMT. Overexpression of CTSL in A549 cells significantly decreased the expression of miRNA-200c, and reduced their sensitivity to paclitaxel and induced EMT, but these effects were reversed by miRNA-200c, whereas knockdown of CTSL in A549/TAX cells attenuated paclitaxel resistance and remarkably inhibited EMT, but the inhibition of miRNA-200c could reverse these effects. Therefore, miRNA-200c may be involved in regulating paclitaxel resistance through CTSL-mediated EMT in A549 cells, and CTSL and miRNA-200c are reciprocally linked in a feedback loop.

组织蛋白酶L (cathepsin L,CTSL)是无脊椎动物体内非特异性免疫的重要组成部分.为了研究马氏珠母贝CTSL (Pm-CTSL)的功能,本实验利用RACE技术克隆获得了Pm-CTSL基因,并对其结构和组织表达模式进行了分析.结果表明,Pm-CTSL基因cDNA序列全长为1 237bp,其中开放式阅读框957 bp,5'UTR69 bp,3'UTR211 bp,共编码氨基酸318个.结构域分析发现Pm-CTSL具有CTSL两个典型的结构域Inhibitor_I29和Pept_C1.Pm-CTSL也具有信号肽、保守序列ERFNVN和GNFD、两个潜在的N-糖基化位点和催化活性位点三联体残基(Cys,His和Ash).多序列比对结果表明Pm-CTSL与太平洋牡蛎的同源性最高,为42％;系统进化分析发现,Pm-CTSL与虾夷扇贝等贝类聚为一支.实时荧光定量分析发现,Pm-CTSL在肝胰腺中显著高表达(p＜0.05),表明Pm-CTSL可能参与马氏珠母贝的免疫应答.本研究为进一步探讨CTSL在马氏珠母贝非特异性免疫应答中的作用提供了基础资料.

目的 探索在细胞氧化应激模型和特异性基因沉默细胞模型中,组织蛋白酶B (CTSB)通过瞬时受体电位黏蛋白-1 (TRPML1)对核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体活化的影响.方法 对体外培养的BV2细胞分别用H2O2、钙敏感性受体激动剂GdCl3、CTSB抑制剂CA-074Me单独或同时处理,用酶联免疫吸附实验方法检测白细胞介素-1β (IL-1β)和半胱天冬酶-1-蛋白;用定量PCR方法检测各组BV2细胞的NLRP3 mRNA.用MTT法检测各组BV2细胞生长活力.用定量PCR方法检测BV2细胞中胱抑素C和TRPML1的mRNA,用Western blot检测TRPML1、CTSB、组织蛋白酶D (CTSD)、组织蛋白酶L(CTSL)、组织蛋白酶Ⅴ(CTSV)蛋白.针对TRPML1基因靶序列设计特异性小干扰RNA (siRNA),在BV2细胞中建立TRPML1基因沉默细胞株(命名为Tr-si-BV2细胞),通过H2O2处理,再用Western blot检测Tr-si-BV2细胞或对照组细胞中的TRPML1、CTSB和转录因子EB (TFEB)蛋白.结果 用H2O2处理后,BV2细胞中半胱天冬酶-1蛋白和NLRP3 mRNA表达增加,加用GdCl3处理后,BV2细胞中IL-1β显著增加(P =0.0036);使用CA-074Me处理后,NLRP3 mRNA (P =0.037)、半胱天冬酶-1(P =0.021)、IL-1β(P=0.036)均显著减少.H2O2组和H2O2+ GdCl3组的细胞生长较慢.在H2O2浓度为200 μmol/L的处理组,BV2细胞中CTSB mRNA与TRPML1 mRNA、或CTSB与TRPML1蛋白的表达均有相似的变化;沉默TRPML1基因表达水平后能够抑制H2O2诱导的CTSB蛋白表达.组织蛋白酶CTSD、CTSL、CTSV的变化不受H2O2处理浓度高低的影响.在进行TRPML1基因沉默处理的BV2细胞中,H2O2+siRNA处理组与H2O2处理组比较,CTSB蛋白的表达显著减少(P=0.021).结论 在小胶质细胞的氧化应激模型中,CTSB具有调节NLRP3炎症小体活化的作用,这种作用有可能通过钙离子通道蛋白TRPML1介导.

目的 探究甲状腺乳头状癌 (PTC) 肿瘤组织中组织蛋白酶L (CTSL) 表达情况, 并分析其表达水平与PTC临床病理参数及患者预后之间的关系.方法 选取乐清市人民医院2014年1月—2015年1月PTC肿瘤组织标本60例作为研究组, 同时取癌旁正常甲状腺组织40例作为对照组, 应用免疫组织化学分析法, 检测癌组织中CTSL蛋白表达情况, 并分析其表达与临床病理参数及患者预后的关系.结果 在PTC患者癌组织中CTSL表达阳性率为100.00％, 显著高于癌旁正常组织中表达阳性率[5.00％ (2/40) ], 差异有统计学意义 (χ～2=87.947, P＜0.001).CTSL高表达率在TNM分期Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ中分别为50.00％、80.00％、100.00％、100.00％, 四者之间差异有统计学意义 (χ～2=16.875, P=0.001).CTSL在有淋巴结转移中高表达率为97.06％, 显著高于无淋巴结转移的57.69％, 差异有统计学意义 (χ～2=11.916, P=0.001).肿瘤原发灶中CTSL高表达率为82.35％ (28/34), 虽低于淋巴结转移灶中CTSL高表达率[97.06％ (33/34) ], 但差异无统计学意义 (χ～2=2.548, P=0.110).结论 PTC肿瘤组织中CTSL表达水平的上调与TNM分期、淋巴结转移等病理参数密切相关, 可作为预测PTC的疾病进展和淋巴结转移潜能的辅助指标.