目的:评价腕踝针对七氟烷诱发老龄大鼠认知功能障碍及海马磷酸化磷脂酶Cγ(p-PLCγ)表达的影响。方法:SPF级健康老龄雄性SD大鼠15只，18月龄，体质量530～600 g，采用随机数字表法分为3组( n＝5)：假手术组(S组)、认知功能障碍组(CD组)和腕踝针组(A组)。采用吸入3%七氟烷与空气混合气体的方法制备大鼠认知功能障碍模型，A组麻醉前取右侧后肢下1-3区行腕踝针，针刺时间30 min，S组行假刺激。2 d后采用Morris水迷宫实验评价大鼠认知功能，随后麻醉大鼠处死取海马组织，HE染色和尼氏染色法观察病理学结果，采用Western blot法检测p-PLCγ、磷酸化钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(p-CaMKⅡ)和磷酸化肌醇-1，4，5-三磷酸受体(p-IP3R)的表达。 结果:与S组比较，CD组和A组逃避潜伏期延长，穿越原平台位置次数减少，海马p-PLCγ、p-CaMKⅡ和p-IP3R表达上调( P<0.05)；与CD组比较，A组逃避潜伏期缩短，穿越原平台位置次数增加，海马p-PLCγ、p-CaMKⅡ和p-IP3R表达下调( P<0.05)。A组大鼠海马病理学损伤程度较CD组减轻。 结论:腕踝针可减轻七氟烷诱发老龄大鼠认知功能障碍，机制与其抑制海马p-PLCγ表达有关。

目的:探讨钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ（CaMKII）对离体心肌缺血-再灌注损伤的影响及对细胞凋亡与自噬的作用。方法:选取心电图正常的SPF级雌性SD大鼠（体重250~280 g），Langendorff灌流系统建立成功的离体心肌缺血-再灌注损伤模型共70只，随机分为五组（ n = 14），心脏缺血-再灌注组（IR组）、CaMKII磷酸化激活剂组（IR+异丙肾上腺素组）、CaMKII磷酸化抑制剂类似物组（IR+KN92组）、CaMKII磷酸化抑制剂组（IR+KN93组）、空白对照组（Control组）。采用再灌注末，左心室功能的变化、心肌细胞形态的变化评价心肌损伤程度；原位末端标记(TUNEL)法来检测细胞凋亡指数；蛋白印迹法（Western blot）检测CaMKII、受磷蛋白（PLN）的磷酸化水平（p-CaMKII/CaMKII、p-PLN/PLN）、以及凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Cleaved Caspase-3和自噬标记蛋白LC3II/LC3I、Beclin-1、P62的表达水平。 结果:与Control组相比，IR组的大鼠左心室功能降低,心肌纤维形态排列紊乱，凋亡指数增高，p-CaMKII/CaMKII、p-PLN/PLN、Cleaved Caspase-3、Bax/Bcl-2、LC3II/LC3I、Beclin-1表达增多，P62表达减少，凋亡和自噬水平明显升高（均 P < 0.05）。与IR组相比，IR+KN93组的大鼠心肌损伤有明显改善，凋亡指数减少，p-CaMKII/CaMKII、p-PLN/PLN、Cleaved Caspase-3、Bax /Bcl-2、LC3II/LC3I、Beclin-1表达减少，P62表达增多，凋亡和自噬水平明显降低（均 P < 0.05）。IR+异丙肾上腺素组与IR组相比，进一步降低大鼠左心室功能，同时凋亡和自噬水平进一步升高（ P < 0.05），而IR+KN92组大鼠与IR组相比，心肌各指标比较差异无统计学意义（ P > 0.05）。 结论:抑制CaMKII磷酸化通过降低细胞凋亡和自噬进而减轻离体心肌缺血-再灌注损伤。

本文通过研究RIP3/CaMKⅡ信号通路对重症VMC小鼠心脏功能及生存曲线的影响，旨在为重症VMC的防治提供新的靶点和思路，现将结果报道如下。

目的:评价艾司氯胺酮对发育期大鼠慢性应激后学习记忆功能及海马N-甲基-D-天冬氨酸受体(NMDAR)-钙-钙调素依赖性蛋白激酶2型(CaMKⅡ)-环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)信号通路的影响。方法:清洁级健康SD大鼠60只，雌雄不拘，7日龄，体质量10～15 g，采用随机数字表法分为3组( n＝20)：对照＋生理盐水组(CN组)、慢性应激＋生理盐水组(NS组)和慢性应激＋艾司氯胺酮组(ES组)。采用慢性不可预知性应激方法建立慢性应激模型。应激刺激结束后，ES组腹腔注射艾司氯胺酮10 mg/kg，NS组腹腔注射等容量生理盐水，连续7 d，1次/d。腹腔给药结束后，行Y迷宫实验和Morris水迷宫实验测定学习记忆功能；取静脉血样，采用ELISA法检测血清皮质醇和ROS浓度；随后麻醉断头取脑，分离海马组织，观察海马CA1区神经元病理学结果，采用Western blot法确定磷酸化NMDAR(p-NMDAR)/NMDAR、磷酸化CaMKⅡ(p-CaMKⅡ)/CaMKⅡ、磷酸化CREB(p-CREB)/CREB表达水平的比值。 结果:与CN组比较，NS组新臂停留时间缩短，进入新臂次数减少，逃避潜伏期延长，穿越原平台位置次数减少，血清皮质醇和ROS浓度升高，p-NMDAR/NMDAR比值、p-CaMKⅡ/CaMKⅡ比值和p-CREB/CREB比值降低( P<0.05)，神经元发生明显病理学损伤；与NS组比较，ES组新臂停留时间延长，进入新臂次数增多，逃避潜伏期缩短，穿越原平台位置次数增多，血清皮质醇和ROS浓度下降，p-NMDAR/NMDAR比值、p-CaMKⅡ/CaMKⅡ比值和p-CREB/CREB比值升高( P<0.05)，神经元病理学损伤减轻。 结论:艾司氯胺酮可改善发育期大鼠慢性应激后学习记忆功能，机制可能与降低氧化应激水平，增强海马NMDAR-CaMKⅡ-CREB信号通路活性有关。

目的:分析RAB7/mTOR/TFEB信号通路在心肌细胞线粒体自噬中的作用及其机制.方法:建立并培养稳定转染的RAB7过表达和阴性对照腺病毒,分别命名为对照组和过表达RAB7组.流式细胞术检测细胞ROS水平和细胞凋亡率,溶酶体和线粒体的相互作用通过共定位的荧光成像显示,应用蛋白印迹测定RAB7、mTOR、TFEB、LC3B-Ⅱ、CaMKIIδ和P62表达水平.结果:与对照组相比,过表达RAB7组mTOR表达升高,TFEB表达降低,ROS水平升高,细胞凋亡率增加,溶酶体和线粒体之间的相互作用显著增加.线粒体自噬相关的LC3B-Ⅱ、CaMKII δ和P62蛋白表达升高(P＜0.01).结论:过表达RAB7可以通过mTOR/TFEB信号通路,增加ROS释放、细胞凋亡和线粒体自噬蛋白表达而促进心肌细胞线粒体自噬激活.

目的 探讨柴金解郁安神片调控钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKII)和Cofilin双信号通路,改善抑郁症海马谷氨酸能神经元突触重塑的分子机制.方法 皮质酮联合脂多糖建立抑郁症体外细胞模型,实验设正常组、模型组、GR阻断剂组、GR激动剂组、CX3CR1阻断剂组、CX3CR1激动剂组、柴金解郁安神片组、柴金解郁安神片联合GR激动剂组、柴金解郁安神片联合CX3CR1激动剂组,观察星形胶质细胞、小胶质细胞、前扣带皮层(anterior cingulate cortex,ACC)和海马神经元形态结构变化;检测ACC和海马谷氨酸能神经元激活及突触重塑情况;免疫荧光、Western blot分别检测海马谷氨酸能神经元内突触重塑相关谷氨酸受体2A(GRIN2A)、GRIN2B、CaMKII、MK2、Cofilin 蛋白表达水平.结果 柴金解郁安神片能明显改善胶质细胞、ACC和海马神经元损伤,并抑制ACC和海马谷氨酸能神经元异常激活,同时下调 GRIN2A、GRIN2B、MK2 蛋白,上调 CaMKII、Cofilin蛋白,继而改善海马谷氨酸能神经元突触可塑性损伤和突触重塑.结论 柴金解郁安神片能有效改善抑郁症海马谷氨酸能神经元突触重塑,其分子机制与调节突触重塑相关NR/CaMKII、MK2/Cofilin 信号通路有关.

成骨细胞分化和凋亡在维持骨稳态中起着至关重要的作用,异常的成骨细胞分化或凋亡会导致多种骨代谢疾病.钙离子/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)是一类广泛存在于体内的多功能蛋白激酶家族,它通过将细胞内的Ca2+信号转化为多种生理或病理的细胞反应,在成骨细胞的分化和凋亡调控中发挥着重要作用.CaMKⅡ对成骨细胞分化的影响主要通过3 个信号通路实现:(1)通过 1α-25(OH)2D3 膜介导信号通路调节成骨细胞的分化;(2)参与WNT/Ca2+信号通路;(3)通过RUNX2-OSX信号通路影响成骨细胞分化.这些信号通路共同作用于成骨细胞,促进其成熟和功能发挥.CaMKⅡ在成骨细胞凋亡中的作用则涉及调节内质网应激反应和调控Bax/Bcl-2表达比例.这些机制对于成骨细胞的存活和凋亡至关重要,影响骨组织的稳定性和重建.总体而言,CaMKⅡ作为一个多功能信号分子,在成骨细胞分化和凋亡的调控中扮演重要角色.对CaMKⅡ的进一步研究,特别是在骨代谢疾病治疗中的应用,是未来研究的一个重要方向.

目的 探索早期补充硫胺素对海马神经元细胞 DNA 甲基化及 Aβ染毒的干预作用及机制.方法 新生大鼠海马神经元细胞(HNCs)体外培养,随机分为空白组、模型组及硫胺素低、中、高剂量组,进行不同剂量硫胺素干预 3 d,HPLC法测定 HNCs细胞 DNA整体甲基化,质谱法检测 CaMKIIα和 GluR-2 启动子甲基化,继续空白 B27培养液培养至细胞成熟,观察硫胺素早期干预对HNCs成熟期Aβ1-42 染毒后细胞增殖率(PR%)、细胞凋亡率(AR%)的影响.结果 ①与空白组比较,硫胺素低、中剂量组HNCs整体DNA甲基化水平均有所降低,中剂量组显著低于空白组(P＜0.05);②与空白组比较,硫胺素低剂量组CaMKIIα基因启动子CpG_3、CpG_11 位点甲基化水平明显降低(P＜0.05),GluR-2 基因CpG_5、CpG_23 位点甲基化水平明显升高(P＜0.05);③Aβ染毒后,与空白组比较,模型组HNCs PR%显著下降、AR%明显升高(P＜0.05);与模型组比较,硫胺素干预各组Aβ染毒HNCs PR%明显升高(P＜0.05),高剂量组较低、中剂量组显著升高(P＜0.05);与模型组比较,硫胺素干预各组Aβ染毒HNCs AR%明显降低(P＜0.05),3 个剂量组之间两两比较差异无统计学意义(P＜0.05).结论 硫胺素早期干预,能调节神经元细胞的甲基化水平,通过降低CaMKIIα启动子甲基化水平的表观遗传学机制,提高成熟期神经元细胞的抗Aβ神经毒性作用.

目的:通过体内外实验探讨阿尔茨海默病关键发病分子β-淀粉样蛋白42寡聚体(Aβ42Os)作用下离子型谷氨酸受体N-甲基-D-天冬氨酸受体(NMDAR)亚基(NR2A、NR2B和NR1)和代谢型谷氨酸受体5(mGluR5)在突触内外的表达分布变化.方法:(1)用不同浓度的Aβ42Os处理乳小鼠原代神经元,Western blot和免疫荧光染色检测原代神经元中mGluR5和NMDAR的表达和分布情况.(2)在C57BL/6小鼠侧脑室立体定位注射不同浓度的Aβ42Os,Western blot检测海马组织中mGluR5和NMDAR在突触内外的蛋白水平,以及mGluR5下游磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(PKB/AKT)信号通路相关蛋白、钙信号下游通路相关蛋白和突触相关蛋白的表达.结果:(1)高浓度Aβ42Os处理原代小鼠神经元增加mGluR5表达(P<0.01),减少NR2A、NR2B和NR1表达(P<0.01);引起mGluR5膜表面聚集,而使NR2A、NR2B和NR1膜表面表达分布减少.(2)高浓度Aβ42Os引起小鼠海马组织中突触mGluR5表达增加(P<0.01),NR2A(P<0.05)和NR2B(P<0.01)表达减少,突触外NR2B表达增加(P<0.01);抑制PI3K表达及AKT和细胞外信号调节激酶(ERK)磷酸化,过度激活钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶IIα(CaMKIIα);引起突触后致密蛋白95、亲棘蛋白(spinophilin)、突触小泡蛋白(synaptophysin)和微管相关蛋白2表达减少(P<0.01).结论:(1)高浓度Aβ42Os引起神经元突触mGluR5过度聚集,NR2A、NR2B和NR1表达减少,而突触外NR2B表达增加.(2)高浓度Aβ42Os抑制PI3K/AKT和ERK信号通路,过度激活CaMKIIα通路,损伤突触结构.

Tibetan singing bowls emit low-frequency sounds and produce perceptible harmonic tones and vibrations through manual tapping.The sounds the singing bowls produce have been shown to enhance relaxation and reduce anxiety.However,the underlying mechanism remains unclear.In this study,we used chronic restraint stress or sleep deprivation to establish mouse models of anxiety that exhibit anxiety-like behaviors.We then supplied treatment with singing bowls in a bottomless cage placed on the top of a cushion.We found that unlike in humans,the combination of harmonic tones and vibrations did not improve anxiety-like behaviors in mice,while individual vibration components did.Additionally,the vibration of singing bowls increased the level of N-methyl-D-aspartate receptor 1 in the somatosensory cortex and prefrontal cortex of the mice,decreased the level of γ-aminobutyric acid A(GABA)receptor α 1 subtype,reduced the level of CaMKII in the prefrontal cortex,and increased the number of GABAergic interneurons.At the same time,electrophysiological tests showed that the vibration of singing bowls significantly reduced the abnormal low-frequency gamma oscillation peak frequency in the medial prefrontal cortex caused by stress restraint pressure and sleep deprivation.Results from this study indicate that the vibration of singing bowls can alleviate anxiety-like behaviors by reducing abnormal molecular and electrophysiological events in somatosensory and medial prefrontal cortex.