目的:探讨钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ（CaMKⅡ）和Yes相关蛋白（YAP）是否参与急性肾损伤（AKI）中肾小管上皮细胞（RTEC）凋亡及其机制。方法:15只6~8周雌性BALB/c小鼠随机分为正常对照组、阿霉素（ADR）干预组、ADR+ CaMKⅡ抑制剂（K）干预组（ n=5）。ADR干预小鼠建立AKI模型，HE染色观察小鼠肾小管细胞损伤，酶联免疫吸附检测小鼠血肌酐值。ADR干预体外培养HK-2细胞建立RTEC凋亡模型，流式细胞仪检测ADR、ADR+K、YAP-siRNA、CaMKⅡ活化剂（C）、C +oYAP（过表达YAP）对细胞凋亡率的影响。免疫印迹检测小鼠肾组织和HK-2细胞总蛋白Bax和Bcl-2、胞质蛋白pCaMKⅡ和CaMKⅡ、核YAP蛋白的表达。 结果:与正常对照组比较，ADR干预小鼠肾小管细胞损伤增加和血肌酐值升高，予K后肾小管细胞损伤减少、血肌酐值降低（均 P<0.05）。ADR干预的RTEC凋亡率明显高于对照组（ P<0.05），予K后细胞凋亡减轻（ P<0.05）。与正常对照组和siRNA空白对照组比较，YAP-siRNA和C干预的RTEC中细胞凋亡率明显增加（均 P<0.05），而C干预RTEC的同时予oYAP后细胞凋亡又减轻（ P<0.05）。与正常对照组比较，ADR干预的RTEC和小鼠肾组织细胞中，pCaMKⅡ/CaMKⅡ、Bax蛋白的表达增加而核YAP蛋白、Bcl-2蛋白的表达减少（均 P<0.05），予K后这些作用减轻（均 P<0.05）。 结论:CaMKⅡ可能通过YAP调节ADR诱导AKI小鼠的RTEC凋亡。

室性心律失常是导致心原性猝死的重要原因，研究室性心律失常的发生机制具有重大临床意义。钙-钙调素依赖性蛋白激酶2型（CaMKⅡ）是一种在心脏电活动中发挥重要作用的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶。研究表明，CaMKⅡ可在许多病理状态下激活，通过影响下游多种离子通道，最终导致室性心律失常发生。因此，CaMKⅡ可能是治疗室性心律失常的潜在靶点。

目的:评价腕踝针对七氟烷诱发老龄大鼠认知功能障碍及海马磷酸化磷脂酶Cγ(p-PLCγ)表达的影响。方法:SPF级健康老龄雄性SD大鼠15只，18月龄，体质量530～600 g，采用随机数字表法分为3组( n＝5)：假手术组(S组)、认知功能障碍组(CD组)和腕踝针组(A组)。采用吸入3%七氟烷与空气混合气体的方法制备大鼠认知功能障碍模型，A组麻醉前取右侧后肢下1-3区行腕踝针，针刺时间30 min，S组行假刺激。2 d后采用Morris水迷宫实验评价大鼠认知功能，随后麻醉大鼠处死取海马组织，HE染色和尼氏染色法观察病理学结果，采用Western blot法检测p-PLCγ、磷酸化钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(p-CaMKⅡ)和磷酸化肌醇-1，4，5-三磷酸受体(p-IP3R)的表达。 结果:与S组比较，CD组和A组逃避潜伏期延长，穿越原平台位置次数减少，海马p-PLCγ、p-CaMKⅡ和p-IP3R表达上调( P<0.05)；与CD组比较，A组逃避潜伏期缩短，穿越原平台位置次数增加，海马p-PLCγ、p-CaMKⅡ和p-IP3R表达下调( P<0.05)。A组大鼠海马病理学损伤程度较CD组减轻。 结论:腕踝针可减轻七氟烷诱发老龄大鼠认知功能障碍，机制与其抑制海马p-PLCγ表达有关。

耳鸣严重影响患者的生活质量，目前认为其产生机制与听觉通路信号改变所引起的神经元可塑性变化有关，其中可能涉及神经元兴奋性和抑制性传导失衡。A型γ-氨基丁酸受体（γ-aminobutyric acid a receptor,GABA AR）和N-甲基-D天冬氨酸受体（N-methyl-D-aspartic acid receptor,NMDAR）是重要的神经元抑制性和兴奋性受体，NMDAR功能亢进和GABA AR功能抑制可能是耳鸣发生中的关键性事件。钙/钙调蛋白激酶Ⅱ(Ca 2+/calmodulin-dependent protein kinaseⅡ,Ca 2+/CaMKⅡ）是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，介导NMDAR和GABA AR的磷酸化及其相互作用，在神经突触受体活性调节过程中发挥重要作用，并可能参与耳鸣的发生发展过程。本文就Ca 2+/CaMKⅡ介导NMDAR与GABA AR的相互作用及其与耳鸣的关系展开综述，并结合临床试验介绍相关耳鸣治疗最新研究成果，以期为临床耳鸣的治疗提供新的作用靶点和干预思路。

目的:评价脊髓胞质活化/增殖相关蛋白1(Caprin-1)介导的钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡα)表达与小鼠痛觉感知的关系。方法:通过Nestin CreERT2小鼠与Caprin-1 flox/flox小鼠多代杂交，获得Nestin CreERT2；Caprin-1 flox/flox纯合子小鼠，采用随机数字表法分为2组( n＝5)：Nestin CreERT2；Caprin-1 flox/flox溶剂对照组(SC组)和Caprin-1敲除组(KO组)。KO组连续5 d腹腔注射他莫昔芬100 mg/kg，以诱导性敲除Caprin-1基因，SC组给予等容量溶剂。于连续给药前1 d和给药结束后5 d时测定机械缩足反应阈(MWT)。随后处死小鼠，取脊髓L 4-6节段，采用Western blot检测脊髓Caprin-1、CaMKⅡα表达，采用实时定量PCR法检测脊髓Caprin-1、CaMKⅡα的mRNA表达，采用免疫荧光双标染色检测Caprin-1与CaMKⅡα共表达情况。 结果:与SC组比较，KO组他莫昔分给药结束后5 d时MWT升高，脊髓Caprin-1及其mRNA、CaMKⅡα及其mRNA表达下调( P<0.05)，Caprin-1与CaMKⅡα在脊髓背角共定位表达下调。 结论:脊髓Caprin-1可通过促进CaMKⅡα表达，参与小鼠痛觉感知的形成。

目的:探讨1，25二羟维生素D 3［1，25（OH） 2D 3］对柯萨奇病毒B3（CVB3）诱导小鼠心肌炎症反应的影响及机制。 方法:将雄性野生型（WT）小鼠和1α羟化酶基因敲除［1（OH）ase -/-］小鼠分为WT组、WT+CVB3组、1（OH）ase -/-+CVB3组和1（OH）ase -/-+CVB3+VD 3组，每组8只。实时荧光定量PCR测定促炎症因子白细胞介素（IL）1β、IL-6、干扰素γ（IFN-γ）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）mRNA水平；HE染色观察心肌组织病理学改变；TUNEL染色及流式细胞仪检测心肌细胞凋亡；Fluo-4/AM荧光探针检测心肌细胞内的钙离子含量；Western印迹法检测钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ（CaMKⅡ）及内质网应激相关葡萄糖调节蛋白78（GRP78）、CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白（CHOP）的表达水平。 结果:与WT组相比，WT+CVB3组小鼠心肌中促炎症因子IL-1β（14.88±3.32比1.03±0.02， P=0.009）、IL-6（7.00±1.09比1.81±0.18， P=0.005）、IFN-γ（4.70±1.11比1.34±0.34， P=0.006）、TNF-α（17.20±3.22比1.02±0.12， P<0.001）mRNA水平均升高，炎症细胞浸润增多，心肌细胞凋亡率增加（16.66%±1.09%比7.85%±1.12%， P=0.012），心肌细胞胞质中游离Ca 2+增加（2.98±1.05比0.96±0.10， P=0.006），磷酸化CaMKⅡ（pCaMKⅡ）（1.97±0.34比1.00±0， P<0.001）、GRP78（1.78±0.19比1.00±0， P=0.005）及CHOP（1.62±0.09比1.00±0， P=0.002）蛋白表达增加；上述心肌细胞损伤指标在1，25（OH） 2D 3缺乏的1（OH）ase -/-+ CVB3组更显著；而在给予1，25（OH） 2D 3补充的1（OH）ase -/-+CVB3+VD3组，上述心肌细胞损伤指标均改善（均 P<0.05）；此外，CaMKⅡ特异性抑制剂可同样降低CVB3感染小鼠的心肌损伤和细胞凋亡率。 结论:1，25（OH） 2D 3缺乏可通过CaMKⅡ过度活化加重小鼠心肌炎症反应。

目的:研究黄芩素对Aβ 25-35损伤PC12细胞中谷氨酸受体相关蛋白表达的影响。 方法:将PC12细胞按随机数字表法分为对照组、模型组、雌二醇组及不同浓度的黄芩素组，采用噻唑蓝（MTT）法检测各组PC12细胞存活情况。将PC12细胞按随机数字表法分为对照组、模型组、雌二醇组、黄芩素组。对照组、模型组加入DMEM培养液培养，雌二醇组加入1×10 -3 μmol/L雌二醇DMEM培养液，黄芩素组加入1 μmol/L的黄芩素的DMEM培养液，干预2 h后，模型组、雌二醇组、黄芩素组加入20 μmol/L Aβ 25-35诱导PC12细胞损伤。干预22 h后，采用流式细胞术检测细胞凋亡情况，Western blot检测雌激素受体β（ERβ）、磷酸化的c-jun氨基末端激酶（p-JNK/JNK）和谷氨酸受体中离子型受体N-甲基-D-天冬氨酸受体1（NMDAR1）、谷氨酸受体2（GluR2）和钙/钙调素依赖蛋白激酶-Ⅱ（CaMKⅡ）表达。 结果:与模型组比较，1 μmol/L黄芩素组细胞增殖率［（95.80±2.47）%比（64.34±3.84）%］提高（ P<0.01），黄芩素组细胞凋亡率［（7.83±0.67）%比（12.84±0.91）%］明显降低（ P<0.01），NMDAR1蛋白［（0.582±0.012）比（0.352±0.012）］、GluR2蛋白［（0.538±0.017）比（0.355±0.006）］、ERβ蛋白［（0.362±0.015）比（0.262±0.018）］表达明显升高（ P<0.01），p-JNK/JNK蛋白［（0.476±0.013）比（0.752±0.014）］、CaMKⅡ蛋白［（0.499±0.019）比（0.670±0.016）］表达显著降低（ P<0.01）。 结论:黄芩素对Aβ 25-35损伤PC12细胞具有保护作用，其作用机制可能与激活ERβ、抑制p-JNK/JNK活性、调节谷氨酸受体相关蛋白表达有关。

目的:探讨Wnt信号通路蛋白5a(Wnt5a)基因过表达对骨髓间充质干细胞(BMSC)移植治疗心肌梗死的影响及分子机制。方法:结扎雄性SD大鼠冠脉前降支制备心肌梗死动物模型，按数字表法分为实验组(40只)和假手术组(20只)，4周后超声检测大鼠血流动力学指标变化；分离大鼠BMSC并在体外培养纯化，建立Wnt5a稳定沉默(sh-Wnt5a)和过表达的(oe-Wnt5a)BMSC细胞株，采用划痕实验检测Wnt5a沉默和过表达对细胞迁移能力的影响；采用酶联免疫吸附实验(ELISA)技术检测心肌梗死大鼠模型组血清中胰岛素样生长因子1(IGF-1)、血管内皮生长因子(VEGF)、干细胞因子(SCF)和肝细胞生长因子(HGF)的含量；BMSC移植治疗心肌梗死大鼠，实验共分4组：心肌梗死对照组，生理盐水组、BMSC组和oe-Wnt5a组。移植治疗4周后，超声检测血流动力学变化后取材大鼠心肌，冰冻切片、苏木精-伊红(HE)染色后检测大鼠心肌梗死的面积；采用蛋白质印迹法(Western blot)技术检测移植后大鼠心肌组织中Wnt5a、桩蛋白(Paxillin)、干细胞因子受体(C-KIT)、Ca 2+依赖的蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)和钙敏感受体(CaSR)蛋白的表达，两组和多组间比较分别采用 t检验和单因素方差分析。 结果:(1)成功建立Wnt5a稳定沉默和过表达的BMSC细胞模型。sh-Wnt5a组细胞迁移率显著低于对照组(6.67±1.02比18.71±3.02， t＝6.542， P<0.01)，oe-Wnt5a组细胞迁移率显著高于对照组(43.33±7.95比18.71±3.02， t＝5.014， P<0.01)。(2)ELISA结果显示，BMSC组及oe-Wnt5a组的血清中IGF-1、VEGF、SCF和HGF的浓度明显高于心肌梗死组[(5 473.20±474.55)、(1 237.85±173.90)、(548.09±77.06)、(136.14±37.41) pg/ml比(3 799.20±384.99)、(652.32±95.34)、(352.78±65.89)、(62.92±12.93) pg/ml， t＝4.745、5.114、3.337、3.204， P<0.05]；oe-Wnt5a组的血清中IGF-1、VEGF、SCF和HGF的浓度明显高于BMSC组[(6 264.31±498.87)、(1 445.75±179.58)、(663.22±79.71)、(238.15±62.09) pg/ml比(5 473.20±474.55)、(1 237.85±173.90)、(548.09±77.06)、(136.14±37.41) pg/ml， t＝3.990、5.441、3.799、3.437， P<0.05]。(3)移植治疗4周，大鼠心功能血流动力学有所改善。BMSC组的Wnt5a、Paxillin、C-KIT、和CaSR蛋白显著高于心肌梗死组(33.37±7.34、86.71±13.12、57.67±11.23、96.45±11.45比14.19±5.26、61.62±10.76、26.81±7.89、64.01±7.75， t＝3.679、3.561、3.895、4.064， P<0.05)；oe-Wnt5a组的Wnt5a、Paxillin、C-KIT、CAMKⅡ和CaSR蛋白表达显著高于心肌梗死组(60.33±10.12、90.22±15.42、86.44±12.45、73.30±11.34、108.69±14.43比14.19±5.26、61.62±10.76、26.81±7.89、47.66±9.87、64.01±7.75， t＝7.007、2.635、7.007、2.954、4.725， P<0.05)。Wnt5a和C-KIT蛋白表达显著高于BMSC组(60.33±10.12、86.44±12.45比33.37±7.34、57.67±11.23， t＝3.735、2.972， P<0.05)BMSC组和Oe-Wnt5a的心梗面积小于心肌梗死组(20.98±1.46、14.14±3.11比32.79±3.96， t＝4.825、6.415， P<0.05)，Oe-Wnt5a组的梗死面积小于BMSC组(14.14±3.11比20.98±1.46， t＝3.448， P<0.05)。 结论:Wnt5α基因过表达能有效促进BMSC的迁移及细胞因子的表达，过表达Wnt5a的BMSC移植治疗心肌梗死大鼠比单独移植BMSC疗效更显著。

目的:观察慢性氟中毒大鼠脑组织中磷酸化-N-甲基-D-天冬氨酸受体（phosphorylated N-methyl-D-aspartat receptor，P-NMDAR）亚基及钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ（calmodulin-dependent kinaseⅡ，CaMKⅡ）蛋白表达变化，探讨慢性氟中毒神经损伤的分子发病机制。方法:选择1月龄SD大鼠18只（雌雄各半），适应性喂养1周，按体质量[（100 ± 20）g]采用随机数字表法分为对照组（饮用自来水，含氟量< 0.5 mg/L）、低氟组（饮水含氟量为10.0 mg/L）、高氟组（饮水含氟量为100.0 mg/L），每组6只（雌雄各半）；饲养180 d后处死取大鼠脑组织。HE染色观察大鼠脑组织形态学改变；尼氏染色观察神经细胞尼氏体变化；免疫组织化学染色（免疫组化）观察大鼠脑组织中P-NMDAR亚基（P-NMDAR1、P-NMDAR2A）及CaMKⅡ蛋白表达水平。结果:光镜下，HE染色可见高氟组大鼠脑组织海马区神经元排列紊乱，细胞核浓染、嗜碱性增强。尼氏染色结果显示，对照组、低氟组、高氟组大鼠脑组织海马区神经细胞尼氏体平均光密度值分别为0.024 4 ± 0.009 7、0.024 0 ± 0.003 1、0.023 9 ± 0.013 8，各组间比较差异无统计学意义（ F = 0.010， P > 0.05）。免疫组化结果显示，高氟组大鼠脑组织P-NMDAR1、P-NMDAR2A、CaMKⅡ蛋白表达水平（0.026 3 ± 0.005 7、0.086 3 ± 0.009 0、0.210 9 ± 0.048 7）与对照组（0.011 8 ± 0.006 5、0.065 6 ± 0.011 1、0.143 8 ± 0.029 9）和低氟组（0.017 2 ± 0.006 8、0.062 6 ± 0.017 8、0.135 6 ± 0.029 6）比较显著升高（ P均< 0.05），且低氟组P-NMDAR1蛋白表达水平明显高于对照组（ P < 0.05）。 结论:长期过量氟摄入可导致大鼠神经细胞损伤，其损伤机制可能与NMDAR亚基过度激活所致的钙离子（Ca 2+）超载诱导的兴奋性神经毒性有关。

本文通过研究RIP3/CaMKⅡ信号通路对重症VMC小鼠心脏功能及生存曲线的影响，旨在为重症VMC的防治提供新的靶点和思路，现将结果报道如下。