目的:探讨碳水化合物反应元件结合蛋白-β（ChREBP-β）对白色脂肪棕色化的影响，并进一步明确其在糖代谢稳态中的作用。方法:利用Cre/loxP技术，将Rosa-LSL-ChREBP-β转基因小鼠与Adiponectin-Cre小鼠杂交，建立在脂肪组织中特异性过表达ChREBP-β的小鼠模型（AET-β）；以AET-β杂合小鼠为实验组，同龄同性别不含Cre的野生型小鼠为对照组。对小鼠进行急性寒冷暴露和长期冷训练实验，分析小鼠的耐寒能力、白色脂肪形态和产热相关基因表达，探讨ChREBP-β对白色脂肪棕色化的影响；对小鼠进行普食、高糖和高脂饮食喂养，分析小鼠的血糖、糖耐量和胰岛素耐量的变化，探讨ChREBP-β对糖代谢稳态的调控作用。对照组和实验组之间的均值比较采用Student- t检验，急性冷暴露试验采用重复测量方差分析，不同组间均数的多重比较采用最低显著性差异（LSD）检验。 结果:与对照组相比，AET-β小鼠在急性寒冷暴露下的核心体温和棕色脂肪局部温度明显降低（ P<0.05），在长期冷刺激训练后白色脂肪产热相关基因的表达水平无显著变化（ P>0.05），在高脂喂养条件下的葡萄糖耐量轻微改善（ P<0.05）。 结论:ChREBP-β在脂肪组织中过度激活可显著抑制棕色脂肪的产热功能，而对白色脂肪棕色化以及糖代谢稳态的影响非常有限。

[背景]长期睡眠期噪声可能对代谢系统产生不利影响,肝脏脂质代谢与生物钟基因关系密切.[目的]探讨长期睡眠期噪声暴露对小鼠肝脏生物钟及脂质代谢的影响及相关机制.[方法]20只C57BL/6J 雄性小鼠随机分为噪声暴露组和对照组,每组 10只.噪声暴露组小鼠连续 30 d暴露于白噪声 90 dB声压级(SPL),每天 8 h,从 9:00-17:00.对照组背景噪声≤40 dB SPL.噪声暴露结束后在 14:00(ZT6)和 2:00(ZT18)处死动物,每个时间点处死 5只,收集肝脏组织.采用胆固醇氧化酶法和磷酸甘油氧化酶法测定肝脏总胆固醇、甘油三酯.实时荧光定量PCR法检测肝脏内生物钟基因Clock、Bmal1、Rev-erbα、Rev-erbβ,以及脂质代谢基因Srebp1c、Hmgcr、Fasn、Lxrα、Acc1、Chrebp的表达.[结果]在ZT18时,噪声暴露组小鼠肝脏总胆固醇含量较对照组升高 48%(P<0.05),甘油三酯含量升高 61%(P<0.05).与对照组相比,噪声暴露组小鼠肝脏内的生物钟基因Clock、Bmal1 mRNA的表达在ZT18时升高(P<0.05),在ZT6时降低(P<0.05);Rev-erbα mRNA表达水平在ZT6、ZT18时均降低(P<0.05);Rev-erbβ mRNA表达水平则在ZT6、ZT18时均无明显变化.噪声暴露组小鼠肝脏脂质代谢相关基因Srebp1c、Hmgcr、Chrebp、Lxrα mRNA的表达较对照组在ZT18时均升高(P<0.05);Acc1、Fasn mRNA的表达在ZT6时无明显变化,在ZT18时则均有上升的趋势,但结果差异尚无统计学意义(P>0.05).[结论]长期睡眠期噪声暴露可致小鼠生物钟及脂代谢紊乱.噪声暴露抑制关键生物钟基因Rev-erbα的表达,使脂质合成基因Srebp1c和Chrebp上调,促进肝脏脂质沉积,导致脂质代谢紊乱.

本研究旨在探讨血管紧张素Ⅱ (angiotensin Ⅱ,Ang Ⅱ)对INS-1胰岛细胞凋亡及硫氧还蛋白相互作用蛋白(thioredoxin-interacting protein,TXNIP)表达的影响,并分析其可能的作用机制.体外常规培养大鼠胰岛细胞株INS-1,使用CCK-8试剂盒检测不同浓度和不同作用时间的Ang Ⅱ对细胞存活率的影响,确定最佳作用浓度及作用时间为1×10-6 mol/L和24 h;在上述浓度及作用时间条件下,使用流式细胞术及Western blot检测细胞凋亡;Western blot检测Ang Ⅱ对TXNIP、碳水化合物反应元件结合蛋白(carbohydrate response element-binding protein,ChREBP)及血管紧张素Ⅱ1型受体(angiotensin Ⅱ type 1 receptor,AT1R)蛋白表达的影响;Real-time PCR检测TXNIP及ChREBP mRNA表达;IF/ICC法观察TXNIP、ChREBP及AT1R的表达变化.结果显示Ang Ⅱ可浓度依赖性及时间依赖性地降低细胞活力(P＜ 0.05,n=6)并上调TXNIP的表达(P＜ 0.05,n=6);与对照组相比,Ang Ⅱ组细胞凋亡率、ChREBP及ATlR的表达均明显增高(P＜ 0.05,n=6).使用AT1R受体抑制剂替米沙坦(telmisartan,TM)后,Ang Ⅱ对INS-1细胞TXNIP及ChREBP的诱导作用被抑制(P＜0.05,n=6),Ang Ⅱ诱导的细胞活力降低及细胞凋亡升高被逆转.上述结果表明,Ang Ⅱ可通过ATlR增加ChREBP活化而上调TXNIP的表达,促进细胞凋亡,提示TXNIP可能在糖尿病时Ang Ⅱ诱发胰岛细胞凋亡中发挥作用,并有望成为糖尿病新的治疗靶点.

目的 探讨2型糖尿病患者血清ChREBP水平与糖尿病肾病的关系.方法 选取2017年1月—2018年1月于吉林大学第二医院内分泌科确诊为2型糖尿病的80例患者,分为糖尿病肾病组[DN组,24 h尿白蛋白排泄率(24 h UAER)≥30 mg/24 h]和单纯2型糖尿病组(T2DM组,24 h UAER<30 mg/24 h),每组40例,从体检中心收集同期健康群众40例作为对照组(NC组).采集研究对象的性别、年龄、病程、身高及体重等资料,计算体重指数.测定空腹血糖(FPG)、糖化血红蛋白(HbA1c)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、尿素氮、血清肌酐(Scr)、空腹胰岛素(FINS)及24 h UAER,计算肾小球滤过率(eGFR)和稳态胰岛素评价指数(HOMA-IR).采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清中ChREBP、高迁移率族蛋白-1、TNF-α、IL-1β 及IL-6水平.结果 血清ChREBP水平DN组最高,NC组最低(P<0.05).ChREBP与eGFR呈负相关(r s=-0.694,P=0.000);ChREBP与24 h UAER、IL-1β、IL-6、TNF-α 及HMG-1呈正相关(r s=0.596、0.711、0.650、0.684和0.515,P<0.05).Logistic回归分析显示,病程[Ol^R=1.44,95％CI(1.10,1.87)]、HOMA-IR[Ol^R=2.22,95％CI(1.31,3.76)]、24 h UAER[Ol^R=1.03,95％CI(1.00,1.06)]及ChREBP[Ol^R=1.01,95％CI(1.00,1.03)]是糖尿病患者肾脏病变的独立危险因素(P<0.05).结论 2型糖尿病患者血清ChREBP水平升高可能与糖尿病肾病的发生、发展相关.

该文研究了竹节参皂苷Ⅳa(Panax japonicus saponinⅣa,SPJ-Ⅳa)通过miR-17-5p/mitofusin 2 (MFN2)信号通路改善非酒精性脂肪性肝炎(nonalcoholic steatohepatitis,NASH)的作用.采用高脂饮食(high-fat diet,HFD)联合CCl4诱导Balb/c雄性小鼠NASH模型,并采用不同剂量SPJ-Ⅳa进行干预,处理5周后留取血清及肝脏,称量体质量及肝重,计算肝指数,检测血清生化指标丙氨酸氨基转移酶(ALT)、甘油三酯(TG)及葡萄糖(Glu)的含量,HE及Masson染色法观察肝脏形态学变化及纤维化病变情况,Real-time PCR法检测脂代谢相关基因[脂肪酸合成基因(fatty acid synthase gene,FASN)、碳水化合物反应元件结合蛋白(carbohydrate response element binding protein,chREBP)、乙酰辅酶A羧化酶1(acetyl CoA carboxylase 1,ACC1)、肝X受体(liver X receptor,LXR)]、炎症因子白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-1β(IL-1β)、miR-17-5p及MFN2的表达情况,Western blot法检测MFN2蛋白表达水平.结果 显示,与正常组相比,HFD+CCl4组中肝指数明显增加,生化指标ALT,TG,Glu的含量明显增高;形态学结果显示有大量脂肪空泡出现,表现出明显的脂肪变性,并可见明显的胶原纤维沉积;脂代谢相关基因、炎症因子IL-6和IL-1β及miR-17-5p mRNA表达水平明显增加,MFN2 mRNA表达水平明显降低;MFN2蛋白水平降低.经SPJ-Ⅳa干预后,生化指标ALT,TG,Glu的含量有所下降,脂肪变性有所减轻,胶原纤维沉积有所减少,脂代谢相关基因、炎症因子IL-6和IL-1β及miR-17-5p mRNA表达水平有所下降,MFN2 mRNA表达水平有所升高;MFN2蛋白水平也升高.该研究结果表明,miR-17-5p/MFN2信号通路可能参与了NASH的发生发展,且SPJ-Ⅳa对NASH有保护作用,其机制可能与调控miR-17-5p/MFN2信号通路有关.

目的:探讨小肠上皮细胞中转录因子碳水化合物反应元件结合蛋白(ChREBP)在果糖耐受中的作用.方法:利用Cre/loxP系统,构建了ChREBP基因的肠道特异性敲除(ChGO)小鼠模型,并利用RT-qPCR、Western blot和免疫组化等技术,在基因组、mRNA和蛋白水平对该模型的基因敲除效率和组织特异性进行了鉴定分析.结果:表型分析显示,高果糖饮食可导致ChREBP敲除小鼠出现体重降低、摄食量减少和严重肠胀气等果糖不耐受的表现.机制研究发现ChREBP-β和Max样蛋白X(Mlx)可以协同促进小肠上皮细胞果糖特异性转运子葡萄糖转运蛋白5(GLUT5)编码基因Slc2a5的转录,而ChREBP缺陷导致高果糖饮食对Slc2a5基因的转录激活作用丧失.结论:ChREBP是果糖激活小肠上皮细胞Slc2a5基因转录所必需的转录因子,对维持机体的果糖耐受性至关重要.

目的 应用高脂饮食诱导小鼠非酒精性脂肪性肝病,研究竹节参总皂苷的干预作用.方法 模型小鼠灌胃给予不同剂量(15、45 mg/kg)竹节参总皂苷,共19周,称定体质量、肝脏质量,计算肝质量指数,收集血清及肝脏组织检测相关生化指标,HE染色观察肝脏组织形态及病理变化,RT-PCR与RT-qPCR测定小鼠肝脏中脂质代谢相关基因、炎症因子及miR-181a、PPARαmRNA表达,Western blot检测肝脏中TLR4、p-STAT1蛋白表达.结果 模型组小鼠体质量、肝质量指数及血清ALT、肝组织TG水平均增加;HE染色表现典型脂肪样变及炎性浸润;miR-181a、脂质代谢相关基因、炎症相关基因及蛋白表达增加,而PPARαmRNA表达下降.竹节参总皂苷干预后,血清ALT及肝组织TG水平减少;肝组织病理学变化明显改善.miR-181a、SREBP-1c、ChREBP,TLR4、p-STAT1,IL-1β、TNFαmRNA表达下降,而PPARαmRNA表达上升.结论 竹节参总皂苷可改善高脂饮食诱导的非酒精脂肪性肝病,其作用机制可能与miR-181a/PPARα及其介导的脂毒性及炎症信号通路有关.

目的 研究竹节参总皂苷(total saponins of Panax ja-ponicas,TSPJ)通过调节 miR-199/SIRT1/MFN2 信号通路改善非酒精性脂肪性肝炎(nonalcoholic steatohepatitis,NASH)的作用及相关机制.方法 45 只BALB/c小鼠随机分为正常组、高脂饮食(high fat diet,HFD)组、TSPJ低剂量组、TSPJ高剂量组,正常组给予普通维持饲料,HFD组、TSPJ低、高剂量组给予高脂饲料.TSPJ低、高剂量组小鼠分别每天灌胃给予15、45 mg·kg－1的TSPJ(溶于生理盐水),其他组每天灌胃等量的生理盐水.持续7个月后处死小鼠,进行血清收集及肝脏取材.结果 HE染色显示,HFD组小鼠肝脏脂质变性明显,炎症反应明显,TSPJ组小鼠肝组织脂质变性缓解,炎症减轻.TSPJ明显上调MFN2、SIRT1 表达水平,下调TNF-α、IL-1β、SREBP、ChREBP 表达水平.同时在 mRNA 水平, miR-199与SIRT1显示良好的负调控关系,生物信息学提示miR-199 靶向 SIRT1.结论 TSPJ 可通过 miR-199/SIRT1/MFN2信号通路改善高脂饮食所致的NASH的发生发展.