目的:探讨1个cisAB09亚型家系的ABO血型血清学特征与分子遗传学机制。方法:选取2022年2月2日于厦门大学附属中山医院输血科进行ABO血型鉴定的1个cisAB09亚型家系为研究对象。采用常规ABO血型血清学检测方法对先证者及其家系成员ABO血型进行鉴定，采用血浆A和B糖基转移酶活性测定方法测定先证者及其母亲血浆中A和B糖基转移酶活性强度，采用流式细胞术检测先证者红细胞表面A、B抗原表达情况。抽取先证者及其家系成员外周静脉血样，提取基因组DNA后，对 ABO基因第1~7外显子及其侧翼内含子进行测序，并对先证者及其母亲和大女儿 ABO基因第7外显子进行Sanger测序验证。 结果:常规ABO血型血清学检测结果提示，先证者及其母亲和大女儿ABO血型初步判断为A 2B表型，先证者妻子及其小女儿为O型。血浆A和B糖基转移酶活性测定结果提示，先证者及其母亲B糖基转移酶活性滴度分别为32、256，分别较A 1B表型阳性对照活性滴度(128)低与高。流式细胞术检测结果显示，先证者红细胞表面A抗原表达数量减少，B抗原表达数量未见异常。 ABO基因测序结果显示，先证者及其母亲和大女儿在 ABO*B.01等位基因基础上，第7外显子发生c.796A>G变异，导致B糖基转移酶第266位氨基酸由甲硫氨酸变为缬氨酸，符合 ABO*cisAB.09等位基因的特征。先证者及其大女儿 ABO基因型为 ABO*cisAB.09/ABO*O.01.01，先证者母亲为 ABO*cisAB.09/ABO*B.01，先证者妻子及其小女儿为 ABO*O.01.01/ABO*O.01.01。 结论:ABO*B.01等位基因c.796A>G变异导致B糖基转移酶第266位甲硫氨酸变为缬氨酸，是产生cisAB09亚型的分子遗传学基础， ABO*cisAB.09等位基因编码的糖基转移酶，可在红细胞表面合成正常水平B抗原和较低水平A抗原。

男，27岁，尿毒症拟行肾移植。患者母亲，49岁，拟供肾者。本研究通过天津市第一中心医院伦理委员会审查(BL202302)，受试者均签署临床研究知情同意书于2022年4月21日纳入本研究。患者为B(A)型血型，其父、母亲血型分别为O型与AB亚型伴抗B抗体，经典试管法血型鉴定结果见表1。患者及其母亲不规则抗体筛查呈阴性。基于聚合酶链式反应-序列特异性引物(polymerase chain reaction-sequence specific primer，PCR-SSP)人类红细胞 ABO-cisAB与 B(A)基因检测结果显示：患者为B(A) 02/O型，患者母亲为A/B(A) 02型。患者及其母亲 ABO基因PCR-SSP结果，见表2。患者及其母亲ABO基因第1~7外显子Sanger测序结果显示：患者为 ABO*BA.02/ABO*O.01.02[B(A) 02/O 02]杂合子，其母亲为 ABO*A1.02/ABO*BA.02[A 102/B(A) 02]杂合子，第7外显子均发生700C>G变异(图1)，导致第234位脯氨酸替换为丙氨酸(Pro234Ala)，符合B(A) 02分子生物学特征。

目的:研究1例ABO亚型的分子机制。方法:先证者红细胞ABO表型鉴定采用常规血清学技术， ABO基因第6～7外显子序列采用PCR技术扩增并应用Sanger法双向进行测序分析。先证者 ABO基因第6～7外显子单体型检测采用单链扩增测序技术。 结果:先证者红细胞与抗-A凝集强度4＋、抗-A1不凝集，抗-B凝集强度3＋，抗-H凝集强度4＋；其血清与标准A细胞、O细胞和自身细胞不凝集，与标准B细胞在4℃呈现弱凝集，先证者血清学特性符合ABO亚型。 ABO基因第6～7外显子双链测序分析显示先证者261 G/del、297AG、526CG、657CT、703GA、803GC、930GA杂合，796CC纯合。单体型测序显示先证者一个等位基因为 ABO* O.01.01，另一个等位基因与 ABO* B.01相比仅c.796A>C变异，导致266位蛋氨酸变成亮氨酸；比较国际输血协会 ABO等位基因已命名的数据，发现该变异属于新等位基因。 结论:ABO* B.01等位基因c.796 A>C变异，导致266位蛋氨酸变成亮氨酸，可引起CisAB亚型。准确鉴定ABO亚型应结合血清学技术和分子生物学技术。

目的:探讨红细胞B抗原弱表达的分子生物学原因。方法:应用血清学方法进行血型鉴定，包括正反定型检测，抗-A1，抗-H检测，并进行吸收放散试验以检测弱B抗原。应用直接测序对第1-7外显子进行分析，并对其中1例进行克隆后测序。结果:血清学检测的23例患者红细胞均含有弱B抗原。DNA测序确定这些B亚型的等位基因，包括2例Bel型、4例B3型、14例Bw型、2例CisAB型及1例新的等位基因。其中新B等位基因，在第7外显子发生了662G>A变异，将其DNA序列上传红细胞血型抗原变异数据库，命名为Bel10。结论:血型基因DNA碱基变异导致血型亚型，表现为血清学抗原减弱，Bw表型为常见B亚型。

目的:探讨A205cisAB01亚型先证者的分子生物学鉴定及家系调查与遗传学分析。方法:选择2019年1月21日于日照市中心血站参加无偿献血时，因血型复检正反定型不符需进一步血型确认的1例先证者及其姐姐、妻子、女儿和儿子为研究对象。先证者为男性，48岁，汉族，既往体健，无输血史。采用试管法对受试者的ABO血型进行血型血清学鉴定，采用Sanger测序法对受试者 ABO基因第6、7外显子进行直接测序和单克隆测序，确定其 ABO基因型，并且根据检测结果分析该亚型等位基因在家系中的遗传情况。本研究遵循的程序符合2013年修订版《世界卫生协会赫尔辛基宣言》要求，并且与所有受试者签署知情同意书。 结果:①本例先证者及其姐姐、女儿的血清学分型一致，均为cisAB型；先证者妻子和儿子的血清学分型分别为AB和AwB型。②直接测序结果显示，先证者 ABO基因第7外显子存在3个突变位点：c.467C>T纯合、c.803G>C杂合和c.1009A>G杂合突变。单克隆测序结果确认其 ABO基因型为A2.05/cisAB.01。③先证者姐姐、妻子、女儿、儿子的 ABO基因型分别为 A2.05/cisAB.01、A1.02/B.01、A1.02/cisAB.01、cisAB.01/B.01。④家系调查结果显示，先证者的 ABO*cisAB.01等位基因稳定遗传至其女儿和儿子。 结论:对 ABO基因直接测序能够明确碱基突变位点，单克隆测序可确认其基因型。 ABO*cisAB.01等位基因的表达受不同等位基因的影响，存在不同的血清学表现。采用分子生物学检测技术和家系调查有助于准确鉴定ABO亚型，明确血清学表型的分子基础。

目的 正确鉴定ABO正反定型不相符献血者的血型并研究其表型与分子生物学特性.方法 微孔板法正反定型不相符的献血者标本分别进行盐水试管法血型血清学鉴定和聚合酶链反应-序列特异性(PCR-SSP)基因分型,并对部分献血者的PCR产物进行ABO基因 1-7 外显子直接测序,分析献血者的血型表型、基因分型及基因序列.结果 微孔板法ABO正反定型不相符的献血者标本 256 份,通过试管法血型血清学鉴定,正常ABO血型 119份,ABO血型抗体减弱 90 份,ABO亚型 47 份.256 份标本进行了PCR-SSP基因分型试验,除了 6 份标本基因分型无法明确判读外,233 份标本试管法血清学表型与基因型一致(91.02%),17 份表型与基因型不一致(6.64%).250份标本共计检出 17 种基因型:AO1(56 份)、AO2(58 份)、AA(50 份)、BO1(31 份)、BO2(17 份)、BB(8 份)、O1O1(2份)、O1O2(7 份)、AB(13 份),AO4、A205O2、A205A、A201A、O1O4、O2O2、A201B、A205B各1 份.对78 份标本ABO基因 1-7 外显子测序,共检出 29 个 ABO 等位基因,其中 7 个是常见等位基因:?A101、?A102、?A104、?B101、?O01、?O02、?O04,23 个是少见或罕见等位基因:?A201、?A205、?Ax01、?Ax03、?Ax13、?Ax19、?Ax22、?Ael10、?B305、?Bel03、?Bel06/?Bx02、?Bw07、?Bw12、?Bw17、?Bw37、?O05、?O26、?O61、?B(A)04、?B(A)07、?cisAB01 和?cisAB01var.另外发现 6 个罕见等位基因突变位点(c.101A＞G;c.103_106delG;c.146_147insGC;c.259G＞T;c.322C＞T;c.932T＞C).结论 疑难ABO血型的鉴定需要血清学检测和分子生物学检测相结合,提供明确的血型以保障临床用血安全.

目的 探讨莆田市无偿献血人群疑难血型血清学及分子生物学特征,并对相关献血者建档,以备自身输血或者助人应急献血.方法 收集莆田市中心血站 2019 年 1 月1 日—2023 年8 月31 日期间68 593 名无偿献血者的血液标本,采用血清学方法进行血型鉴定;对疑难血型标本进行ABO基因(包含启动子、增强子和7 个外显子以及其侧翼序列和内含子 6)以及FUT1 基因检测;运用Chimira和PyMOL软件建立 3D模型,预测基因突变对酶结构的影响.结果 血清学共检出 16 例ABO亚型,其中检出率最高的表型为类孟买型(0.73/万),其次为cisAB型(0.44/万);基因分析共检出 12 例含有已知突变的标本(FUT1.01N.06/FUT1.01N.06 4 例,FUT1 01W.08/FUT1.01N.06 1 例,A2.08/B.01 2 例,BA.02/O.01.01 1 例,A3.07/O.01.01 1 例,cisAB.01/B.01 3 例),4 例未找到关键突变(A1.02/B.01 2 例,A1.02/O.01.02 2 例).3D分子模型分析发现,A3.07 等位基因和FUT1.01W.08 等位基因均能导致相应糖基转移酶活性降低,导致亚型的出现.结论 福建莆田地区无偿献血者最常见的引起ABO正反不符的表型为类孟买型,其最常见等位基因为FUT1.01N.06.

目的 研究95例血清学ABO亚型标本的分子机制.方法 对95例血清学ABO正反定型不符亚型标本全部进行血清学确认和聚合酶链反应-序列特异性(PCR-SSP)ABO基因分型,对PCR-SSP无法检测到亚型等位基因的标本分别先后进行ABO基因第1～7外显子双链测序和单链测序,以确定突变位点以及突变点所在基因位置.结果 95例标本共检测出34个ABO等位基因.其中5个常见ABO等位基因(ABO*A1.01、ABO*A1.02、ABO*B.01、ABO*O.01.01和ABO*O.01.02)和29个罕见亚型等位基因,包括16个ISBT命名等位基因(ABO*A2.01、ABO*A2.05、ABO*A2.13、ABO*A3.07、ABO*AW.37、ABO*AEL.05、ABO*B3.01、ABO*B3.05、ABO*BW.03、ABO*BW.07、ABO*BW.27、ABO*BEL.03、ABO*cisAB.01、ABO*cisAB.05、ABO*BA.02、ABO*BA.04)和 5 个 dbRBC 曾命名等位基因(A223、B309、Bw37、Bel09、Bw40)和 8 个均未命名新等位基因[ABO*B.01+978C＞A、ABO*A1.02+248A＞T、ABO*B.01+125dupT、ABO*B.01+(98+1 G＞A)、ABO*A1.02/ABO*B.01+1A＞G,ABO*A1.02/ABO*O.01.01+28G＞T,ABO*A1.02/ABO*B.01+538C＞T,ABO*A1.02/ABO*O.01.01+797insT,后4个标本因标本量不足无法进行单链测序验证].95例标本通过PCR-SSP确认亚型等位基因76例(21个ISBT和dbRBC已命名等位基因),剩余19例标本进行ABO基因第1～7外显子测序确认,其中确认8例未命名等位基因标本,剩余11例标本经测序未发现在检测范围内的亚型等位基因.结论 研究揭示了 95例血清学ABO亚型的分子遗传学背景,发现8种罕见的未命名新等位基因.血清学疑难血型的检测受到患者病理、生理等因素的干扰,ABO亚型鉴定需要血清学检测和基因检测相结合.

目的 探究恩施土家族苗族地区患者ABO正反定型不符原因及分子生物学分析结果.方法 以2018年10月～2022年10月我院鉴定的59例ABO正反定型不符样本为研究对象进行回顾性研究.分别对样本进行吸收放散试验、意外抗体检测以及分子生物学检测,分析ABO正反定型不符原因,并对比血清学及分子生物学检测结果.结果 59例ABO正反定型不符样本中正定型异常8(13.56%)例,反定型异常47(79.66%)例,正、反定型异常4(6.78%)例.男性比例62.71%(37/59)高于女性比例37.29%(22/59)(P＜0.05);≥61岁年龄段比例42.37%(25/59)高于41～50岁年龄段比例32.20%(19/59)和51～60岁年龄段比例25.42%(15/59)(P＜0.05).17例ABO亚型样本中12(70.6%)例为土家族.59例正反定型不符样本中29(49.16%)例为意外抗体,17(28.81%)例为ABO亚型,13(22.03%)例为血清抗体减弱.17例ABO亚型中,A亚型6例(A2型1例,A3型4例,Ael型1例),B亚型4例(B3型3例,Bel型1例),AB3型2例,B亚型(A型)3例,cisAB型2例.17例ABO亚型中,有8例血清学结果与基因分型结果一致,一致率47.1%(8/17).A亚型中以A307/O02基因型为主,B亚型中以B303/O02基因型为主.结论 ABO亚型是恩施土家族苗族地区ABO正反定型不符的重要原因.亚型中A亚型以A307/O02基因型为主,B亚型以B303/O02基因型为主.

目的 构建人ABO血型A101、B101及其CisAB01、Ael05、B(A)04和Bw03亚型真核表达载体,为研究ABO血型基因及亚型基因的功能奠定基础.方法 从已知ABO基因分型的标本中(A101,B101)提取总RNA,将其逆转录合成cDNA,经特异性引物扩增目的基因片段,将其定向连接到pcDNA3.1(+)真核表达载体;采用定点突变PCR的方法构建CisAB01、Ael05、B(A)04和Bw03亚型真核表达载体,通过测序鉴定其序列正确.将ABO血型A101、B101及其CisAB01、Ael05、B(A)04和Bw03亚型真核表达载体分别转染Hela细胞系,通过免疫荧光和Western印迹检测各ABO基因在细胞中的表达.结果 测序结果显示扩增到的A101及B101 cDNA以正确序列和方式插入载体,CisAB01、Ael05、B(A)04和Bw03亚型真核表达载体的测序结果显示相应位点均成功突变;免疫荧光和Western印迹结果显示A101、B101及其CisAB01、Ael05、B(A)04和Bw03亚型在Hela细胞中均有表达.结论 成功构建了ABO血型基因及亚型基因真核表达载体,体外转染Hela细胞成功表达糖基转移酶,为后续研究奠定了基础.